clascoterone衍生物或其可药用的盐及其制备方法和用途
技术领域
1.本发明涉及化学药物及制备方法和用途，特别涉及clascoterone衍生物或其可药用的盐及其制备方法和用途。
背景技术：2.痤疮与脱发发病广泛，严重影响患者的外在形象，严重者甚至会引起社交恐惧症、自尊心下降、抑郁症以及导致轻生行为的发生。clascoterone是由意大利公司cassiopea spa开发的新型甾体类局部雄激素受体拮抗剂，主要用于治疗痤疮和雄激素性脱发，不引起全身性副作用。目前，美国fda于2020年8月已批准clascoterone(1％乳膏剂)用于治疗12岁及以上患者的痤疮。
技术实现要素：3.发明目的：本发明的目的在于提供clascoterone衍生物或其可药用的盐，旨在发现疗效更优的候选药物。本发明的另一目的是提供上述化合物或其可药用的盐的制备方法。本发明的还有一个目的是提供所述的化合物或其可药用的盐在制备治疗痤疮、雄激素性脱发药物中的用途。
4.技术方案：本发明所述的如通式(i)所示的化合物或其可药用的盐：
[0005][0006]
其中，
[0007]
r1选自碳数为1～6的烷氧基、碳数为1～3的烷烃基、氢、羟基、氨基、取代或未取代的苄胺基；
[0008]
r2选自碳数为1～6的酰基、碳数为1～3的烷烃基、氢、三氟甲基。
[0009]
所述的化合物或其可药用的盐，所述化合物选自如下：
[0010]
n-(4-氟苯甲基)-3-氧代-雄甾-4-烯-17α-(1-氧代丙氧基)-17β-甲酰胺(xhz1701)
[0011]
[0012]
n-(3-氟苯甲基)-3-氧代-雄甾-4-烯-17α-(氧代丙氧基)-17β-甲酰胺(xhz1702)
[0013][0014]
n-(3,5-二氟苯甲基)-3-氧代-雄甾-4-烯-17α-(1-氧代丙氧基)-17β-甲酰胺(xhz1703)
[0015][0016]
n-(4-三氟甲硫基苯甲基)-3-氧代-雄甾-4-烯-17α-(1-氧代丙氧基)-17β-甲酰胺(xhz1704)
[0017][0018]
n-(4-三氟甲基苯甲基)-3-氧代-雄甾-4-烯-17α-(1-氧代丙氧基)-17β-甲酰胺(xhz1705)
[0019][0020]
n-(3-三氟甲基苯甲基)-3-氧代-雄甾-4-烯-17α-(1-氧代丙氧基)-17β-甲酰胺
(xhz1706)
[0021][0022]
药物组合物，其中含有一种或多种所述的化合物或其可药用的盐和药学上可接受的载体。
[0023]
所述的化合物或其可药用的盐的制备方法，包括如下步骤：
[0024][0025]
所述的化合物或其可药用的盐的制备方法，具体包括如下步骤：
[0026]
以化合物1为原料，首先与高碘酸发生氧化反应，得到化合物2；然后化合物2再与丙酸酐发生酯化反应得到化合物3，最后在缩合剂hatu和三乙胺的催化下，化合物3与各种苄胺进行缩合反应，得到通式(i)的化合物；或者还通过成盐反应得到所述化合物的可药用的盐。
[0027]
所述的化合物或其可药用的盐的制备方法，所述化合物1为17α,21-二羟基-孕甾-4-烯-3,20-二酮，化合物2为3-氧代-雄甾-4-烯-17α-羟基-17β-甲酸，化合物3为3-氧代-雄甾-4-烯-17α-(1-氧代丙氧基)-17β-甲酸。
[0028]
所述的化合物或其可药用的盐在制备治疗痤疮药物中的用途。
[0029]
所述的化合物或其可药用的盐在制备治疗雄激素性脱发药物中的用途。
[0030]
有益效果：本发明与现有技术相比，具有如下优点：本发明的化合物或其可药用的盐对人毛乳头细胞(hhdpc)均有不同程度的促增殖作用，能够用于制备治疗人痤疮、雄激素性脱发的药物，具有良好的应用前景。
附图说明
[0031]
图1为化合物xhz1703以及阳性药clascoterone对ar基因转录水平的抑制效果。
具体实施方式
[0032]
以下实施例中的熔点数据结果均是由x-4型数字显示显微熔点仪(北京泰克仪器有限公司)测定；终产物以及中间体的核磁谱图数据是以dmso-d6或者cdcl
3-d3为溶剂，tms为内标，由bruker公司的300mhz或者400mhz核磁共振仪测定；高分辨质谱(hrms)均是由安捷伦公司的型号为q-tof 6520的质谱仪测定。
[0033]
化合物的合成、纯化、分离中所使用的试剂有：(1)柱层析硅胶：200或者300目硅胶
均购自青岛海洋化工；(2)hsgf254型tlc薄层色谱板：购自烟台化工研究所；(3)柱层析洗脱系统中所使用的常规溶剂如石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇等以及反应所需的化学试剂，除特殊说明外，均为市售化学纯或分析纯产品。
[0034]
实施例1：3-氧代-雄甾-4-烯-17α-羟基-17β-甲酸(2)的制备
[0035]
将化合物17α,21-二羟基-孕甾-4-烯-3,20-二酮(1)(1g,2.89mmol)溶于10ml四氢呋喃溶液，加入h5io6(1.31g,5.78mmol)的水溶液，室温反应2h。反应结束后，减压浓缩，加水搅拌30min，抽滤，干燥得黄色产品(0.79g,摩尔收率83％)。1h nmr(300mhz,dmso-d6)δ12.32(s,1h),5.66(d,j＝1.5hz,1h),4.87(s,1h),1.18(s,3h),0.70(s,3h).
[0036]
实施例2：3-氧代-雄甾-4-烯-17α-(1-氧代丙氧基)-17β-甲酸(3)的制备
[0037]
将化合物3-氧代-雄甾-4-烯-17α-羟基-17β-甲酸(2)(1.4g,4.22mmol)溶于13ml丙酸酐，加入3ml无水吡啶，室温反应1h。反应结束后加入200ml水冰浴下析晶，抽滤得白色固体(0.92g，摩尔收率65％)。1h nmr(300mhz,dmso-d6)δ12.48(s,1h),5.55(s,1h),2.71-2.56(m,1h),1.07(s,3h),0.92(t,j＝7.5hz,4h),0.63(s,3h).
[0038]
实施例3：n-(4-氟苯甲基)-3-氧代-雄甾-4-烯-17α-(1-氧代丙氧基)-17β-甲酰胺(xhz1701)的制备
[0039]
将化合物3-氧代-雄甾-4-烯-17α-(1-氧代丙氧基)-17β-甲酸(3)(0.26g,0.67mmol)溶于3ml二氯甲烷溶液，加入0.38g hatu(1.0mmol)，0.37ml tea(2.68mmol)于室温反应1h后，加入0.14ml 4-氟苄胺(1.2mmol)继续反应10h。反应结束后，加水淬灭。二氯甲烷萃取，有机相用饱和氯化铵溶液洗三次，合并有机相。减压浓缩，柱层析分离得黄白色固体(0.11g,摩尔收率35％)。流动相体系(ch2cl2:ch3oh＝100:1)。m.p.186.4-188.4℃.1h nmr(300mhz,dmso-d6)δ8.00(t,j＝6.1hz,1h),7.36-7.21(m,2h),7.14(t,j＝8.9hz,2h),5.67(s,1h),4.32-4.07(m,2h),2.99-2.77(m,1h),1.18(s,3h),1.02(t,j＝7.5hz,3h),0.62(s,3h).
13
c nmr(75mhz,cdcl3)δ199.44,173.00,170.79,169.36,160.58,134.21,129.74,123.99,115.65,92.59,77.50,77.07,76.65,53.28,50.83,47.19,42.99,38.58,35.71,33.95,32.74,31.94,30.42,30.13,28.16,23.82,20.62,17.40,14.40,9.02.
19
f nmr(282mhz,cdcl3)δ-114.87.hrms(esi)m/z calcd for[m+na]
+
518.2677,found 518.2671.
[0040]
实施例4：n-(3-氟苯甲基)-3-氧代-雄甾-4-烯-17α-(氧代丙氧基)-17β-甲酰胺(xhz1702)的制备
[0041]
采用化合物xhz1701的合成方法制备xhz1702。投料化合物3-氧代-雄甾-4-烯-17α-(1-氧代丙氧基)-17β-甲酸(3)(0.25g,0.6mmol)，hatu(0.36g,0.96mmol)，tea(0.35ml,2.57mmol)，二氯甲烷(3ml)，3-氟苄胺(0.13ml,1.11mmol)。柱层析分离得到黄白色固体(0.09g，摩尔收率30％)。流动相体系(ch2cl2:ch3oh＝100：1)。m.p.158.2-160.4℃,1h nmr(300mhz,dmso-d6)δ8.12(t,j＝6.2hz,1h),7.42-7.29(m,1h),7.08(t,j＝9.4hz,3h),5.93(s,1h),4.29(q,j＝6.6hz,2h),2.89(t,j＝13.5hz,1h),1.14(s,3h),1.07-0.98(m,4h),0.63(s,3h).
13
c nmr(101mhz,cdcl3)δ199.46,173.06,170.85,169.49,164.17,161.71,140.98,130.22,123.95,123.45,114.83,92.58,53.27,50.83,47.20,43.19,38.58,35.70,33.94,32.74,31.93,30.44,30.17,28.13,23.80,20.61,17.39,14.40,9.86,8.95.
19
f nmr(282mhz,dmso-d6)δ-113.85.hrms(esi)m/z calcd for[m+na]
+
518.2677,found 518.2670.
[0042]
实施例5：n-(3,5-二氟苯甲基)-3-氧代-雄甾-4-烯-17α-(1-氧代丙氧基)-17β-甲
甲酰胺(xhz1706)的制备
[0049]
采用化合物xhz1701的合成方法制备xhz1706。投料化合物3-氧代-雄甾-4-烯-17α-(1-氧代丙氧基)-17β-甲酸(3)(0.25g,0.6mmol)，hatu(0.36g,0.96mmol)，tea(0.35ml,2.57mmol)，二氯甲烷(3ml)，3-三氟甲基苄胺(0.16ml,1.16mmol)。柱层析分离得到黄白色固体(56mg，摩尔收率16％)。流动相体系(ch2cl2:ch3oh＝100:1)。m.p.59.3-61.4℃.1h nmr(300mhz,dmso-d6)δ8.15(t,j＝6.0hz,1h),7.65-7.51(m,4h),5.66(s,1h),4.46-4.25(m,2h),2.94-2.79(m,1h),1.17(s,3h),1.01(t,j＝7.5hz,4h),0.61(s,3h).
13
c nmr(101mhz,cdcl3)δ199.43,173.03,170.77,169.58,139.52,131.34,129.14,124.42,124.28,123.98,92.56,53.28,50.84,47.23,43.14,38.58,35.71,33.94,32.73,31.94,31.52,30.49,30.20,28.13,23.81,20.56,17.39,14.37,8.92.
19
f nmr(282mhz,dmso-d6)δ-61.05.hrms(esi)m/z calcd for[m+na]
+
568.2645,found 568.2642.
[0050]
表1为上述部分实施例中clascoterone衍生物或其可药用的盐的取代基的分配情况。
[0051]
表1 clascoterone衍生物或其可药用的盐的取代基的分配情况
[0052][0053]
实施例9：性能测试
[0054]
表2是以下性能测试所用到的试剂来源。
[0055]
表2试剂来源
[0056]
试剂名称生产厂家dmem/high glucose(1
×
)hyclone德国胎牛血清(fbs)gibcomttamresco胰蛋白酶biosharp
pbs自制无血清冻存液bambankerdmso南京化学试剂股份有限公司雌二醇meryer氯仿阿拉丁异丙醇阿拉丁乙醇阿拉丁rnaiso plustakaraprimescrip rt reagent kit with gdna erasertakarasybr premix ex taqtakara
[0057]
表3是以下性能测试所用到的仪器来源。
[0058]
表3仪器来源
[0059][0060][0061]
(一)化合物的药理(促增殖)实验
[0062]
由于hhdpc细胞促增殖实验可以用来初步评价化合物在体外对雄激素脱发的抑制作用，所以本文对合成的部分化合物进行了体外hhdpc抗增殖实验。
[0063]
1、实验材料和细胞培养
[0064]
1.1 hhdpc细胞复苏
[0065]
把冻存管从液氮中取出来，立即投入37℃水浴锅中，轻微摇动。液体都融化后。把细胞悬液吸到装离心管中，1000转离心5min。把上清液倒掉，加2ml培养基吹打细胞。之后将细胞悬液吸到t25培养瓶，加3ml培养基，放到5％co2培养箱中培养，一天换一次培养基。
[0066]
1.2 hhdpc细胞传代
[0067]
培养皿中的细胞覆盖率达到80％～90％时，把原有培养基倒掉。加适当的胰蛋白酶，于5％co2培养箱消化1～2min。消化完成后，加入2ml培养基终止消化。用移液枪吹打细胞。将细胞悬浮液转移至的离心管中，1000转离心5min。倒掉上清液，加1～2ml培养基。把细胞悬液分至2个t25培养瓶，继续培养。
[0068]
2、mtt法测定细胞增殖率
[0069]
2.1细胞铺板：将对数生长期hhdpc细胞用胰蛋白酶消化，配制成浓度为1～10
×
104个/ml的细胞悬液，按3000～5000细胞每孔接种于96孔板，每孔加100μl，置于5％co2培养箱中37℃下培养过夜贴壁，边缘孔用无菌pbs填充。
[0070]
2.2加药处理：镜下观察细胞贴壁后加入各药物孵育48h，样品最终浓度为10μm，做好各组标记。每个样本浓度设3个重复值。
[0071]
2.3 mtt反应：所有孔中分别加入20μl mtt溶液(5mg/ml，即0.5％mtt)，培养箱中孵育4h。
[0072]
2.4 dmso溶解：小心的吸除上清液，每孔加dmso 150μl，在摇床低速(120～140rpm/min)震荡使结晶物充分溶解。
[0073]
2.5测吸光度值：使用酶标仪测定490nm光吸收值。
[0074]
表4为hhdpc细胞株促增殖活性结果。
[0075]
表4 hhdpc细胞株促增殖活性结果
[0076]
compound增殖率(％)xha170111.275xha170213.865xha170327.374xha170414.728xha170512.951xha170614.119clacoterone30.168
[0077]
上述hhdpc细胞株来自江苏凯基生物技术股份有限公司，clacoterone实施例作对照组。
[0078]
研究结果表明，本发明化合物对hhdpc细胞表现出较好的促增值活性。
[0079]
(二)rt-pcr法测试ar受体的表达
[0080]
结合hhdpc细胞促增殖实验，我们从中挑选出活性较好的化合物xhz1703，利用rt-pcr技术，以clascoterone为阳性对照，测试化合物对ar靶基因转录水平的抑制作用。
[0081]
1、rna的提取
[0082]
将hhdpc细胞处理好后，去除培养基，往六孔板中加pbs洗一遍细胞，去除pbs，加入1ml trizol，室温放置2min，将trizol转移至无rna酶的ep管中。加入氯仿200ul，用力振摇15s，室温静置15min，离心(4℃,12,000g,15min).离心后液体分为三层，小心吸取上层无色液体移入一新的ep管中。加入等体积异丙醇，上下颠倒混匀,室温静置5min，离心(4℃,12,000g,10min)。去上清，沉淀加入75％乙醇1ml，轻微振荡15s，离心(4℃,7,500g,5min)。小心去上清，管内沉淀在超净台中鼓风静置干燥3～5min.。加入50μl depc水溶解，nanodrop检测浓度，-80℃冰箱保存。
[0083]
2、cdna的合成
[0084]
逆转录实验步骤按照逆转录试剂盒说明书操作(takara,rr047)，首先在冰上把所提取的rna配置成逆转录所需的反应液，并置于室温下反应10min。然后按照逆转录试剂盒说明书操作，向该反应液中加入buffer、反转录酶、反转录随机引物等试剂，置于pcr仪中进
行逆转录合成cdna，条件为37℃15min，85℃5s。
[0085]
3、荧光定量pcr
[0086]
以合成的cdna为模板，按照sybr qpcr mix说明操作，于stepone plus荧光定量pcr仪中进行pcr扩增。以gapdh作为内参，并用sybr green i染料对其做定量分析。其中ar引物的正向序列为：ccagggaccatgttttgcc，反向序列为：cgaagacgacaagatggacaa；内参引物正向序列：aggtcggtgtgaacggatttg，反向序列：ggggtcgttgatggcaaca。
[0087]
结果显示，本专利中化合物xhz1703对ar的mrna水平有明显的下调作用，且效果与阳性药相当。
技术特征：1.如通式(i)所示的化合物或其可药用的盐：其中，r1选自碳数为1～6的烷氧基、碳数为1～3的烷烃基、氢、羟基、氨基、取代或未取代的苄胺基；r2选自碳数为1～6的酰基、碳数为1～3的烷烃基、氢、三氟甲基。2.根据权利要求1所述的化合物或其可药用的盐，其特征在于，所述化合物选自如下：n-(4-氟苯甲基)-3-氧代-雄甾-4-烯-17α-(1-氧代丙氧基)-17β-甲酰胺n-(3-氟苯甲基)-3-氧代-雄甾-4-烯-17α-(氧代丙氧基)-17β-甲酰胺n-(3，5-二氟苯甲基)-3-氧代-雄甾-4-烯-17α-(1-氧代丙氧基)-17β-甲酰胺n-(4-三氟甲硫基苯甲基)-3-氧代-雄甾-4-烯-17α-(1-氧代丙氧基)-17β-甲酰胺
n-(4-三氟甲基苯甲基)-3-氧代-雄甾-4-烯-17α-(1-氧代丙氧基)-17β-甲酰胺n-(3-三氟甲基苯甲基)-3-氧代-雄甾-4-烯-17α-(1-氧代丙氧基)-17β-甲酰胺3.一种药物组合物，其特征在于，其中含有一种或多种如权利要求1或2所述的化合物或其可药用的盐和药学上可接受的载体。4.一种权利要求1所述的化合物或其可药用的盐的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：5.根据权利要求4所述的化合物或其可药用的盐的制备方法，其特征在于，具体包括如下步骤：以化合物1为原料，首先与高碘酸发生氧化反应，得到化合物2；然后化合物2再与丙酸酐发生酯化反应得到化合物3，最后在缩合剂hatu和三乙胺的催化下，化合物3与各种苄胺进行缩合反应，得到通式(i)的化合物；或者还通过成盐反应得到所述化合物的可药用的
盐。6.根据权利要求4所述的化合物或其可药用的盐的制备方法，其特征在于，所述化合物1为17α，21-二羟基-孕甾-4-烯-3，20-二酮，化合物2为3-氧代-雄甾-4-烯-17α-羟基-17β-甲酸，化合物3为3-氧代-雄甾-4-烯-17α-(1-氧代丙氧基)-17β-甲酸。7.权利要求1所述的化合物或其可药用的盐在制备治疗痤疮药物中的用途。8.权利要求1所述的化合物或其可药用的盐在制备治疗雄激素性脱发药物中的用途。
技术总结本发明公开了Clascoterone衍生物或其可药用的盐及其制备方法和用途，含有如通式(I)所示的化合物或其可药用的盐，本发明还公开了上述化合物或其可药用的盐的制备方法及用途。本发明的化合物或其可药用的盐可用于制备治疗痤疮和雄激素性脱发。疗痤疮和雄激素性脱发。疗痤疮和雄激素性脱发。疗痤疮和雄激素性脱发。
技术研发人员：向华 马露雨 齐麟 朱美旗 邹玉梅 任胜楠 肖茂旭 池幸龙 付子璇 敬怡辰 吉辰轩 宋珂 黎定杰 傅晓颖 陈明琪 陈德英
受保护的技术使用者：中国药科大学
技术研发日：2022.04.19
技术公布日：2022/7/5
