1.本发明属于红球藻加工技术领域，具体涉及一种抗氧化消炎雨生红球藻提取物及制备方法。
背景技术：2.雨生红球藻(haematococcus pluvialis)，或名湖生红球藻属于绿藻门、团藻目、红球藻属；雨生红球藻属于一种淡水型单细胞绿藻，具有特殊的生活周期，以游动形态和孢囊形态存在于自然界中。雨生红球藻在科学界被称为天然的虾青素载体，由于红藻会因高温、高强度光照和氧化压力诱导等天然因素，而使其细胞体内自然分泌、聚集大量的虾青素，其虾青素含量会达到3％左右。大量的研究表明，雨生红球藻在以上天然因素的刺激下，会使虾青素的积累速率和总量比其他动植物高，各种脂类在雨生红球藻中所占比约为70％的单脂、25％的双脂和5％的单体，与诸多水产养殖动物极其相似。其次，此类红藻中的虾青素结构以3s-3’s型为主，与鱼类等水产类原料中提取出的结构基本一致，更加有利于人体吸收。虽然现在虾青素的获取能够通过化学手段合成，但是在化学合成过程中不可避免地会残留化学杂质。所以，通过合成方式得到的非天然人工虾青素会大大降低其产品的安全性。这是导致美国国家食品药品管理局仅仅批准了以天然材料为基础提取出的虾青素进入保健品市场的主要原因。综上所述，开发天然的雨生红球藻为载体的虾青素，是保障人体摄取安全的有效方式之一。
3.专利cn109295147b提供了一种促进雨生红球藻中虾青素积累的方法，将雨生红球藻在低光条件下培养到对数生长后期和/或平台期的雨生红球藻细胞，将碘化钾溶液添加到雨生红球藻培养基中，但是该方法效率较低，其生产方法的收率较低不利于经济效益。
技术实现要素：4.针对上述现有技术中存在的不足，本发明提供了一种抗氧化消炎雨生红球藻提取物及制备方法。
5.为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：
6.抗氧化消炎雨生红球藻提取物的制备方法：
7.q1将培育得到的雨生红球藻进行冻干脱水处理，随后粉碎过筛，得到雨生红球藻冻干粉末；
8.q2将所述雨生红球藻冻干粉末投入二氧化碳超临界萃取器中进行萃取，得到所述抗氧化消炎雨生红球藻提取物。
9.优选的，抗氧化消炎雨生红球藻提取物的制备方法：
10.q1采用冻干温度为-30～-25℃，冻干时长为140-145min，冻干真空度为150-155pa，解析温度为7-8℃，解析时长为120-130min，解析真空度为280-300pa的工艺参数将培育得到的雨生红球藻进行冻干脱水处理，随后粉碎过100-120目筛，得到雨生红球藻冻干粉末；
11.q2将所述雨生红球藻冻干粉末投入二氧化碳超临界萃取器中，以萃取釜温度为34-35℃、萃取压力为32-33mpa、二氧化碳流量为42-45l/h、萃取时长为3-4h的工艺条件进行萃取，得到所述抗氧化消炎雨生红球藻提取物。
12.所述雨生红球藻的培育过程为：
13.f1将雨生红球藻藻株接种至扩增培养基中并在红蓝光照与无光联合条件下扩培；
14.所述扩增培养基由以下原料组成：硝酸钠、三氧化钼、维生素b1、维生素h、六水硝酸钴、五水硫酸铜、柠檬酸铁、氯化锰、硫酸锌、水，以磷酸二氢钾和磷酸氢二钾调节ph；
15.f2将步骤f1所得完成扩培的扩增培养基离心，分离出其中的扩培后雨生红球藻并转移至诱导培养基中然后在红蓝光照与无光联合条件下培养，再离心分离得到雨生红球藻；
16.所述诱导培养基由以下原料组成：三氧化钼、维生素b1、维生素h、六水硝酸钴、五水硫酸铜、柠檬酸铁、氯化锰、硫酸锌、诱导剂、水，以磷酸二氢钾和磷酸氢二钾调节ph。
17.在红蓝光的照射下雨生红球藻中参与新陈代谢的酶活力得到提升，因而其繁殖扩增速率增大，合成虾青素的效率也得到提高。
18.硝酸钠、三氧化钼、维生素b1、维生素h、六水硝酸钴、五水硫酸铜、柠檬酸铁、氯化锰、硫酸锌可以为雨生红球藻的新陈代谢活动提高必要的微量元素等营养。
19.本发明先后采用乙醚破壁提取和二氧化碳超临界萃取的手段得到的菜豆提取物中包含2,6-二叔丁基对甲苯酚等高活性酚类物，这使得所述菜豆提取物可以在高盐浓度胁迫条件下促进雨生红球藻大量合成虾青素。2,6-二叔丁基对甲苯酚和2,6-二叔丁基对(二甲氨甲基)苯酚可以调控雨生红球藻细胞中的酶系与非酶系两套抗氧化系统应对氧化应激反应。在光照强度为6400-6500lx条件下，雨生红球藻产生氧化应激反应，产生大量ros从而触发细胞防御反应。ros水平过高会对雨生红球藻细胞中的蛋白质和核酸生物大分子物质产生毒害作用，添加菜豆提取物和2,6-二叔丁基对(二甲氨甲基)苯酚则可以增强细胞中的酶系(如sod、pod和cat)和非酶系(gsh和虾青素)两套抗氧化防御系统，从而清除过量的ros以维持雨生红球藻细胞内的动态平衡，以此维护细胞的正常新陈代谢活动。菜豆提取物和2,6-二叔丁基对(二甲氨甲基)苯酚可以上调与合成虾青素有关的酶的基因(dxs、lcy、bkt、chy)的表达量，从而促进虾青素的合成与累积。不仅如此，菜豆提取物和2,6-二叔丁基对(二甲氨甲基)苯酚的添加可以提高雨生红球藻内一氧化氮的含量，可以促进雨生红球藻的新陈代谢活动，合成出更多的虾青素。
20.本发明将菜豆提取物和2,6-二叔丁基对(二甲氨甲基)苯酚协同使用作为诱导雨生红球藻合成虾青素的诱导剂，获得了虾青素浓度含量更高的所述雨生红球藻提取物，推测是菜豆提取物中具有高活性的2,6-二叔丁基对(二甲氨甲基)苯酚中的二甲氨甲基中的氮原子的可以在水溶液状态下部分电离，以活化电荷的方式增强其渗透到雨生红球藻细胞中，而细胞中的2,6-二叔丁基对(二甲氨甲基)苯酚的叔丁基对于细胞外的2,6-二叔丁基对甲苯酚的叔丁基具有较强的相容性，从而进一步提高雨生球红藻对于所述诱导剂的吸收，从而调高雨生红球藻中与合成虾青素有关的酶的基因(dxs、lcy、bkt、chy)的表达量，从而促进虾青素的合成与累积。
21.优选的，所述雨生红球藻的培育过程为：
22.f1将雨生红球藻藻株接种至扩增培养基中并在红蓝光照与无光联合条件下扩培
8-12d，每1kg所述扩增培养基中接种1-2g所述雨生红球藻藻株，培养温度26-27.2℃；
23.所述扩增培养基由以下重量份原料组成：140-160重量份硝酸钠、0.1-0.25重量份三氧化钼、0.3-0.65重量份维生素b1、0.7-0.95重量份维生素h、40-55重量份六水硝酸钴、35-45重量份五水硫酸铜、70-90重量份柠檬酸铁、90-108重量份氯化锰、75-90重量份硫酸锌、106重量份水，以磷酸二氢钾和磷酸氢二钾调节ph至7.2-7.3；
24.所述红蓝光照与无光联合条件具体为，采用功率为100-120w、红蓝比为1:(2-3)、红光波长为645-650nm、蓝光波长为455-460nm的光源，每个红光光源和蓝光光源的光照强度均为2000-2100lx；红蓝光照和无光的时间比为(10-15)h:12h；
25.f2以10000-12000rpm的转速将步骤f1所得完成扩培的扩增培养基离心3-5min，分离出其中的扩培后雨生红球藻并转移至诱导培养基中然后在红蓝光照与无光联合条件下培养8-10d，每1kg所述诱导培养基中接种1-2g所述扩培后雨生红球藻，培养温度为29-31℃，再以10000-12000rpm的转速离心8-12min分离得到雨生红球藻；
26.所述红蓝光照与无光联合条件具体为，采用功率为90-100w、红蓝比为(1-3):1、红光波长为640-643nm、蓝光波长为463-466nm的光源，每个红光光源和蓝光光源的光照强度均为6400-6500lx；红蓝光照和无光的时间比为(10-15)h:12h；
27.所述诱导培养基由以下重量份原料组成：0.1-0.2重量份三氧化钼、0.5-0.64重量份维生素b1、0.5-1重量份维生素h、40-50重量份六水硝酸钴、40-45重量份五水硫酸铜、75-85重量份柠檬酸铁、100-110重量份氯化锰、80-90重量份硫酸锌、106重量份水，以磷酸二氢钾和磷酸氢二钾调节ph至9.8-10.0；另加入氯化钠并使其浓度达到0.35-0.45g/l；另加入诱导剂并使其浓度达到2.15-2.25mg/l。
28.所述诱导剂为菜豆提取物、2,6-二叔丁基对(二甲氨甲基)苯酚中的至少一种。
29.优选的，所述诱导剂为菜豆提取物、2,6-二叔丁基对(二甲氨甲基)苯酚以质量比(1-3):(1-3)组成的混合物。
30.更优选的，所述诱导剂为菜豆提取物、2,6-二叔丁基对(二甲氨甲基)苯酚以质量比3:1组成的混合物。
31.所述菜豆提取物的制备方法为：
32.a1用水漂洗菜豆，漂洗完毕后将所述菜豆捞出并沥干表面水分；
33.a2将步骤a1所得菜豆和乙醚混合后投入破壁机中进行破壁处理，然后用纱布过滤掉菜豆渣，得到菜豆浆；
34.a3将步骤a2所得菜豆浆投入到二氧化碳超临界萃取器中进行萃取，得到所述菜豆提取物。
35.优选的，所述菜豆提取物的制备方法为：
36.a1用温度为20-25℃的水漂洗菜豆10-20min，所述水和菜豆的质量比为(3-4):1，漂洗完毕后将所述菜豆捞出并沥干表面水分；
37.a2将步骤a1所得菜豆和乙醚以质量比1:(7-8)混合后投入破壁机中，以功率为1000-1100w、电机转速为50000-58000rpm、时长为8-13min的工艺条件进行破壁处理，然后用孔径为0.05-0.1mm的纱布过滤掉菜豆渣，得到菜豆浆；
38.a3将步骤a2所得菜豆浆投入到二氧化碳超临界萃取器中，采用萃取釜温度为35-37℃、萃取压力为34-36mpa、二氧化碳流量为46-48l/h、萃取时长为4-5h的工艺条件进行萃
取，得到所述菜豆提取物。
39.本发明的有益效果：本发明提供了一种抗氧化消炎雨生红球藻提取物及制备方法，用二氧化碳超临界萃取的方式从经过本发明特定方法培育的雨生红球藻中得到雨生红球藻提取物，富含虾青素等高活性物，具有很好的抗氧化、消炎作用。此外，本发明培育的雨生红球藻采用了由特定配方组成的扩增培养基和诱导培养基以及红蓝光照与无光联合处理的培育方式，得到了富含虾青素等活性成分的雨生红球藻。
具体实施方式
40.下面结合具体实施方式对本发明上述发明内容作进一步详细描述，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于下述实施例。
41.本技术中部分原料的介绍：
42.雨生红球藻藻株：采用德国sag保藏中心的雨生红球藻sag 34-1b藻株。
43.菜豆：phaseolus vulgaris linn.，产地：江苏南京。
44.2,6-二叔丁基对(二甲氨甲基)苯酚，cas：88-27-7。
45.实施例1
46.抗氧化消炎雨生红球藻提取物的制备方法：
47.q1采用冻干温度为-28℃，冻干时长为140min，冻干真空度为150pa，解析温度为8℃，解析时长为120min，解析真空度为300pa的工艺参数将培育得到的雨生红球藻进行冻干脱水处理，随后粉碎过120目筛，得到雨生红球藻冻干粉末；
48.q2将所述雨生红球藻冻干粉末投入二氧化碳超临界萃取器中，以萃取釜温度为35℃、萃取压力为32mpa、二氧化碳流量为42l/h、萃取时长为3h的工艺条件进行萃取，得到所述抗氧化消炎雨生红球藻提取物。
49.所述雨生红球藻的培育过程为：
50.f1将雨生红球藻藻株接种至扩增培养基中并在红蓝光照与无光联合条件下扩培10d，每1kg所述扩增培养基中接种2g所述雨生红球藻藻株，培养温度26.5℃；
51.所述扩增培养基由以下重量份原料组成：150重量份硝酸钠、0.15重量份三氧化钼、0.55重量份维生素b1、0.8重量份维生素h、45重量份六水硝酸钴、43重量份五水硫酸铜、80重量份柠檬酸铁、106重量份氯化锰、85重量份硫酸锌、106重量份水，以磷酸二氢钾和磷酸氢二钾调节ph至7.3；
52.所述红蓝光照与无光联合条件具体为：采用功率为100w、红蓝比为1:2、红光波长为645nm、蓝光波长为460nm的光源，每个红光光源和蓝光光源的光照强度均为2000lx；红蓝光照和无光的时间比为12h:12h。
53.实施例2
54.抗氧化消炎雨生红球藻提取物的制备方法：
55.q1采用冻干温度为-28℃，冻干时长为140min，冻干真空度为150pa，解析温度为8℃，解析时长为120min，解析真空度为300pa的工艺参数将培育得到的雨生红球藻进行冻干脱水处理，随后粉碎过120目筛，得到雨生红球藻冻干粉末；
56.q2将所述雨生红球藻冻干粉末投入二氧化碳超临界萃取器中，以萃取釜温度为35℃、萃取压力为32mpa、二氧化碳流量为42l/h、萃取时长为3h的工艺条件进行萃取，得到所
述抗氧化消炎雨生红球藻提取物。
57.所述雨生红球藻的培育过程为：
58.f1将雨生红球藻藻株接种至扩增培养基中并在光照与无光联合条件下扩培10d，每1kg所述扩增培养基中接种50g所述雨生红球藻藻株，培养温度26.5℃；
59.所述扩增培养基由以下重量份原料组成：150重量份硝酸钠、0.15重量份三氧化钼、0.55重量份维生素b1、0.8重量份维生素h、45重量份六水硝酸钴、43重量份五水硫酸铜、80重量份柠檬酸铁、106重量份氯化锰、85重量份硫酸锌、106重量份水，以磷酸二氢钾和磷酸氢二钾调节ph至7.3；
60.所述光照与无光联合条件为，采用功率为100w、光照强度为2000lx的日光灯；光照和无光的时间比为12h:12h；
61.f2以12000rpm的转速将步骤f1所得完成扩培的扩增培养基离心3min，分离出其中的雨生红球藻并转移至诱导培养基中然后在光照与无光联合条件下培养9d，每1kg所述诱导培养基中接种250g所述雨生红球藻，培养温度为30℃，再以12000rpm的转速离心10min分离得到雨生红球藻；
62.所述光照与无光联合条件为，采用功率为100w、光照强度为6500lx的日光灯；光照和无光的时间比为12h:12h；
63.所述诱导培养基由以下重量份原料组成：0.15重量份三氧化钼、0.55重量份维生素b1、0.8重量份维生素h、45重量份六水硝酸钴、43重量份五水硫酸铜、80重量份柠檬酸铁、106重量份氯化锰、85重量份硫酸锌、106重量份水，以磷酸二氢钾和磷酸氢二钾调节ph至10.0；另加入氯化钠并使其浓度达到0.38g/l；另加入诱导剂并使其浓度达到2.23mg/l；
64.所述诱导剂为菜豆提取物。
65.所述菜豆提取物的制备方法为：
66.a1用温度为25℃的水漂洗菜豆20min，所述水和菜豆的质量比为3:1，漂洗完毕后将所述菜豆捞出并沥干表面水分；
67.a2将步骤a1所得菜豆和乙醚以质量比1:8混合后投入破壁机中，以功率为1100w、电机转速为58000rpm、时长为13min的工艺条件进行破壁处理，然后用孔径为0.05mm的纱布过滤掉菜豆渣，得到菜豆浆；
68.a2将步骤a2所得菜豆浆投入到二氧化碳超临界萃取器中，采用萃取釜温度为37℃、萃取压力为34mpa、二氧化碳流量为46l/h、萃取时长为4h的工艺条件进行萃取，得到所述菜豆提取物。
69.实施例3
70.抗氧化消炎雨生红球藻提取物的制备方法：
71.q1采用冻干温度为-28℃，冻干时长为140min，冻干真空度为150pa，解析温度为8℃，解析时长为120min，解析真空度为300pa的工艺参数将培育得到的雨生红球藻进行冻干脱水处理，随后粉碎过120目筛，得到雨生红球藻冻干粉末；
72.q2将所述雨生红球藻冻干粉末投入二氧化碳超临界萃取器中，以萃取釜温度为35℃、萃取压力为32mpa、二氧化碳流量为42l/h、萃取时长为3h的工艺条件进行萃取，得到所述抗氧化消炎雨生红球藻提取物。
73.所述雨生红球藻的培育过程为：
74.f1将雨生红球藻藻株接种至扩增培养基中并在红蓝光照与无光联合条件下扩培10d，每1kg所述扩增培养基中接种2g所述雨生红球藻藻株，培养温度26.5℃；
75.所述扩增培养基由以下重量份原料组成：150重量份硝酸钠、0.15重量份三氧化钼、0.55重量份维生素b1、0.8重量份维生素h、45重量份六水硝酸钴、43重量份五水硫酸铜、80重量份柠檬酸铁、106重量份氯化锰、85重量份硫酸锌、106重量份水，以磷酸二氢钾和磷酸氢二钾调节ph至7.3；
76.所述红蓝光照与无光联合条件具体为：采用功率为100w、红蓝比为1:2、红光波长为645nm、蓝光波长为460nm的光源，每个红光光源和蓝光光源的光照强度均为2000lx；红蓝光照和无光的时间比为12h:12h；
77.f2以12000rpm的转速将步骤f1所得完成扩培的扩增培养基离心3min，分离出其中的扩培后雨生红球藻并转移至诱导培养基中然后在红蓝光照与无光联合条件下培养9d，每1kg所述诱导培养基中接种2g所述扩培后雨生红球藻，培养温度为30℃，再以12000rpm的转速离心10min分离得到雨生红球藻；
78.所述红蓝光照与无光联合条件为，采用功率为90w、红蓝比为2:1、红光波长为640nm、蓝光波长为466nm的光源，每个红光光源和蓝光光源的光照强度均为6500lx；红蓝光照和无光的时间比为12h:12h；
79.所述诱导培养基由以下重量份原料组成：0.15重量份三氧化钼、0.55重量份维生素b1、0.8重量份维生素h、45重量份六水硝酸钴、43重量份五水硫酸铜、80重量份柠檬酸铁、106重量份氯化锰、85重量份硫酸锌、106重量份水，以磷酸二氢钾和磷酸氢二钾调节ph至10.0；另加入氯化钠并使其浓度达到0.1g/l；另加入诱导剂并使其浓度达到2.23mg/l。
80.所述诱导剂为菜豆提取物。
81.所述菜豆提取物的制备方法为：
82.a1用温度为25℃的水漂洗菜豆20min，所述水和菜豆的质量比为3:1，漂洗完毕后将所述菜豆捞出并沥干表面水分；
83.a2将步骤a1所得菜豆和乙醚以质量比1:8混合后投入破壁机中，以功率为1100w、电机转速为58000rpm、时长为13min的工艺条件进行破壁处理，然后用孔径为0.05mm的纱布过滤掉菜豆渣，得到菜豆浆；
84.a3将步骤a2所得菜豆浆投入到二氧化碳超临界萃取器中，采用萃取釜温度为37℃、萃取压力为34mpa、二氧化碳流量为46l/h、萃取时长为4h的工艺条件进行萃取，得到所述菜豆提取物。
85.实施例4
86.抗氧化消炎雨生红球藻提取物的制备方法：
87.q1采用冻干温度为-28℃，冻干时长为140min，冻干真空度为150pa，解析温度为8℃，解析时长为120min，解析真空度为300pa的工艺参数将培育得到的雨生红球藻进行冻干脱水处理，随后粉碎过120目筛，得到雨生红球藻冻干粉末；
88.q2将所述雨生红球藻冻干粉末投入二氧化碳超临界萃取器中，以萃取釜温度为35℃、萃取压力为32mpa、二氧化碳流量为42l/h、萃取时长为3h的工艺条件进行萃取，得到所述抗氧化消炎雨生红球藻提取物。
89.所述雨生红球藻的培育过程为：
90.f1将雨生红球藻藻株接种至扩增培养基中并在红蓝光照与无光联合条件下扩培10d，每1kg所述扩增培养基中接种2g所述雨生红球藻藻株，培养温度26.5℃；
91.所述扩增培养基由以下重量份原料组成：150重量份硝酸钠、0.15重量份三氧化钼、0.55重量份维生素b1、0.8重量份维生素h、45重量份六水硝酸钴、43重量份五水硫酸铜、80重量份柠檬酸铁、106重量份氯化锰、85重量份硫酸锌、106重量份水，以磷酸二氢钾和磷酸氢二钾调节ph至7.3；
92.所述红蓝光照与无光联合条件具体为：采用功率为100w、红蓝比为1:2、红光波长为645nm、蓝光波长为460nm的光源，每个红光光源和蓝光光源的光照强度均为2000lx；红蓝光照和无光的时间比为12h:12h；
93.f2以12000rpm的转速将步骤f1所得完成扩培的扩增培养基离心3min，分离出其中的扩培后雨生红球藻并转移至诱导培养基中然后在红蓝光照与无光联合条件下培养9d，每1kg所述诱导培养基中接种2g所述扩培后雨生红球藻，培养温度为30℃，再以12000rpm的转速离心10min分离得到雨生红球藻；
94.所述红蓝光照与无光联合条件为，采用功率为90w、红蓝比为2:1、红光波长为640nm、蓝光波长为466nm的光源，每个红光光源和蓝光光源的光照强度均为6500lx；红蓝光照和无光的时间比为12h:12h；
95.所述诱导培养基由以下重量份原料组成：0.15重量份三氧化钼、0.55重量份维生素b1、0.8重量份维生素h、45重量份六水硝酸钴、43重量份五水硫酸铜、80重量份柠檬酸铁、106重量份氯化锰、85重量份硫酸锌、106重量份水，以磷酸二氢钾和磷酸氢二钾调节ph至10.0；另加入氯化钠并使其浓度达到0.38g/l。
96.实施例5
97.抗氧化消炎雨生红球藻提取物的制备方法：
98.q1采用冻干温度为-28℃，冻干时长为140min，冻干真空度为150pa，解析温度为8℃，解析时长为120min，解析真空度为300pa的工艺参数将培育得到的雨生红球藻进行冻干脱水处理，随后粉碎过120目筛，得到雨生红球藻冻干粉末；
99.q2将所述雨生红球藻冻干粉末投入二氧化碳超临界萃取器中，以萃取釜温度为35℃、萃取压力为32mpa、二氧化碳流量为42l/h、萃取时长为3h的工艺条件进行萃取，得到所述抗氧化消炎雨生红球藻提取物。
100.所述雨生红球藻的培育过程为：
101.f1将雨生红球藻藻株接种至扩增培养基中并在红蓝光照与无光联合条件下扩培10d，每1kg所述扩增培养基中接种2g所述雨生红球藻藻株，培养温度26.5℃；
102.所述扩增培养基由以下重量份原料组成：150重量份硝酸钠、0.15重量份三氧化钼、0.55重量份维生素b1、0.8重量份维生素h、45重量份六水硝酸钴、43重量份五水硫酸铜、80重量份柠檬酸铁、106重量份氯化锰、85重量份硫酸锌、106重量份水，以磷酸二氢钾和磷酸氢二钾调节ph至7.3；
103.所述红蓝光照与无光联合条件具体为：采用功率为100w、红蓝比为1:2、红光波长为645nm、蓝光波长为460nm的光源，每个红光光源和蓝光光源的光照强度均为2000lx；红蓝光照和无光的时间比为12h:12h；
104.f2以12000rpm的转速将步骤f1所得完成扩培的扩增培养基离心3min，分离出其中
的扩培后雨生红球藻并转移至诱导培养基中然后在红蓝光照与无光联合条件下培养9d，每1kg所述诱导培养基中接种2g所述扩培后雨生红球藻，培养温度为30℃，再以12000rpm的转速离心10min分离得到雨生红球藻；
105.所述红蓝光照与无光联合条件为，采用功率为90w、红蓝比为2:1、红光波长为640nm、蓝光波长为466nm的光源，每个红光光源和蓝光光源的光照强度均为6500lx；红蓝光照和无光的时间比为12h:12h；
106.所述诱导培养基由以下重量份原料组成：0.15重量份三氧化钼、0.55重量份维生素b1、0.8重量份维生素h、45重量份六水硝酸钴、43重量份五水硫酸铜、80重量份柠檬酸铁、106重量份氯化锰、85重量份硫酸锌、106重量份水，以磷酸二氢钾和磷酸氢二钾调节ph至10.0；另加入氯化钠并使其浓度达到0.38g/l；另加入诱导剂并使其浓度达到2.23mg/l。
107.所述诱导剂为菜豆提取物。
108.所述菜豆提取物的制备方法为：
109.a1用温度为25℃的水漂洗菜豆20min，所述水和菜豆的质量比为3:1，漂洗完毕后将所述菜豆捞出并沥干表面水分；
110.a2将步骤a1所得菜豆和乙醚以质量比1:8混合后投入破壁机中，以功率为1100w、电机转速为58000rpm、时长为13min的工艺条件进行破壁处理，然后用孔径为0.05mm的纱布过滤掉菜豆渣，得到菜豆浆；
111.a3将步骤a2所得菜豆浆投入到二氧化碳超临界萃取器中，采用萃取釜温度为37℃、萃取压力为34mpa、二氧化碳流量为46l/h、萃取时长为4h的工艺条件进行萃取，得到所述菜豆提取物。
112.实施例6
113.抗氧化消炎雨生红球藻提取物的制备方法：
114.q1采用冻干温度为-28℃，冻干时长为140min，冻干真空度为150pa，解析温度为8℃，解析时长为120min，解析真空度为300pa的工艺参数将培育得到的雨生红球藻进行冻干脱水处理，随后粉碎过120目筛，得到雨生红球藻冻干粉末；
115.q2将所述雨生红球藻冻干粉末投入二氧化碳超临界萃取器中，以萃取釜温度为35℃、萃取压力为32mpa、二氧化碳流量为42l/h、萃取时长为3h的工艺条件进行萃取，得到所述抗氧化消炎雨生红球藻提取物。
116.所述雨生红球藻的培育过程为：
117.f1将雨生红球藻藻株接种至扩增培养基中并在红蓝光照与无光联合条件下扩培10d，每1kg所述扩增培养基中接种2g所述雨生红球藻藻株，培养温度26.5℃；
118.所述扩增培养基由以下重量份原料组成：150重量份硝酸钠、0.15重量份三氧化钼、0.55重量份维生素b1、0.8重量份维生素h、45重量份六水硝酸钴、43重量份五水硫酸铜、80重量份柠檬酸铁、106重量份氯化锰、85重量份硫酸锌、106重量份水，以磷酸二氢钾和磷酸氢二钾调节ph至7.3；
119.所述红蓝光照与无光联合条件具体为：采用功率为100w、红蓝比为1:2、红光波长为645nm、蓝光波长为460nm的光源，每个红光光源和蓝光光源的光照强度均为2000lx；红蓝光照和无光的时间比为12h:12h；
120.f2以12000rpm的转速将步骤f1所得完成扩培的扩增培养基离心3min，分离出其中
的扩培后雨生红球藻并转移至诱导培养基中然后在红蓝光照与无光联合条件下培养9d，每1kg所述诱导培养基中接种2g所述扩培后雨生红球藻，培养温度为30℃，再以12000rpm的转速离心10min分离得到雨生红球藻；
121.所述红蓝光照与无光联合条件为，采用功率为90w、红蓝比为2:1、红光波长为640nm、蓝光波长为466nm的光源，每个红光光源和蓝光光源的光照强度均为6500lx；红蓝光照和无光的时间比为12h:12h；
122.所述诱导培养基由以下重量份原料组成：0.15重量份三氧化钼、0.55重量份维生素b1、0.8重量份维生素h、45重量份六水硝酸钴、43重量份五水硫酸铜、80重量份柠檬酸铁、106重量份氯化锰、85重量份硫酸锌、106重量份水，以磷酸二氢钾和磷酸氢二钾调节ph至10.0；另加入氯化钠并使其浓度达到0.38g/l；另加入诱导剂并使其浓度达到2.23mg/l。
123.所述诱导剂为2,6-二叔丁基对(二甲氨甲基)苯酚。
124.实施例7
125.抗氧化消炎雨生红球藻提取物的制备方法：
126.q1采用冻干温度为-28℃，冻干时长为140min，冻干真空度为150pa，解析温度为8℃，解析时长为120min，解析真空度为300pa的工艺参数将培育得到的雨生红球藻进行冻干脱水处理，随后粉碎过120目筛，得到雨生红球藻冻干粉末；
127.q2将所述雨生红球藻冻干粉末投入二氧化碳超临界萃取器中，以萃取釜温度为35℃、萃取压力为32mpa、二氧化碳流量为42l/h、萃取时长为3h的工艺条件进行萃取，得到所述抗氧化消炎雨生红球藻提取物。
128.所述雨生红球藻的培育过程为：
129.f1将雨生红球藻藻株接种至扩增培养基中并在红蓝光照与无光联合条件下扩培10d，每1kg所述扩增培养基中接种2g所述雨生红球藻藻株，培养温度26.5℃；
130.所述扩增培养基由以下重量份原料组成：150重量份硝酸钠、0.15重量份三氧化钼、0.55重量份维生素b1、0.8重量份维生素h、45重量份六水硝酸钴、43重量份五水硫酸铜、80重量份柠檬酸铁、106重量份氯化锰、85重量份硫酸锌、106重量份水，以磷酸二氢钾和磷酸氢二钾调节ph至7.3；
131.所述红蓝光照与无光联合条件具体为：采用功率为100w、红蓝比为1:2、红光波长为645nm、蓝光波长为460nm的光源，每个红光光源和蓝光光源的光照强度均为2000lx；红蓝光照和无光的时间比为12h:12h；
132.f2以12000rpm的转速将步骤f1所得完成扩培的扩增培养基离心3min，分离出其中的扩培后雨生红球藻并转移至诱导培养基中然后在红蓝光照与无光联合条件下培养9d，每1kg所述诱导培养基中接种2g所述扩培后雨生红球藻，培养温度为30℃，再以12000rpm的转速离心10min分离得到雨生红球藻；
133.所述红蓝光照与无光联合条件为，采用功率为90w、红蓝比为2:1、红光波长为640nm、蓝光波长为466nm的光源，每个红光光源和蓝光光源的光照强度均为6500lx；红蓝光照和无光的时间比为12h:12h；
134.所述诱导培养基由以下重量份原料组成：0.15重量份三氧化钼、0.55重量份维生素b1、0.8重量份维生素h、45重量份六水硝酸钴、43重量份五水硫酸铜、80重量份柠檬酸铁、106重量份氯化锰、85重量份硫酸锌、106重量份水，以磷酸二氢钾和磷酸氢二钾调节ph至
10.0；另加入氯化钠并使其浓度达到0.38g/l；另加入诱导剂并使其浓度达到2.23mg/l。
135.所述诱导剂为菜豆提取物、2,6-二叔丁基对(二甲氨甲基)苯酚以质量比3:1组成的混合物。
136.所述菜豆提取物的制备方法为：
137.a1用温度为25℃的水漂洗菜豆20min，所述水和菜豆的质量比为3:1，漂洗完毕后将所述菜豆捞出并沥干表面水分；
138.a2将步骤a1所得菜豆和乙醚以质量比1:8混合后投入破壁机中，以功率为1100w、电机转速为58000rpm、时长为13min的工艺条件进行破壁处理，然后用孔径为0.05mm的纱布过滤掉菜豆渣，得到菜豆浆；
139.a3将步骤a2所得菜豆浆投入到二氧化碳超临界萃取器中，采用萃取釜温度为37℃、萃取压力为34mpa、二氧化碳流量为46l/h、萃取时长为4h的工艺条件进行萃取，得到所述菜豆提取物。
140.测试例1
141.虾青素含量测试：根据gb/t 31520-2015《红球藻中虾青素的测定液相色谱法》分别测定本发明实施例1-7培育得到的雨生红球藻中虾青素的含量。
142.称取实施例1-7培育得到的雨生红球藻50mg，置于干燥的玻璃匀浆器中，加入1ml二氯甲烷-甲醇溶液充分研磨使细胞壁破碎完全，转移至50ml离心管中，用10ml二氯甲烷-甲醇溶液分3次清洗玻璃匀浆器，合并提取液。超声提取5min，5℃下以8000rpm的转速离心5min，将上清液转移至50ml容量瓶中，离心管中再加入10ml二氯甲烷-甲醇溶液，重复上述步骤三次，合并上清液，用二氯甲烷-甲醇溶液定容至50ml，然后静置15min，移取5ml上清液于另一50ml容量瓶，用二氯甲烷-甲醇溶液稀释定容，备用。在5℃下皂化时长为12h。各例均取5份平行样品进行上述测试，结果取平均值。
143.表1培育得到的雨生红球藻中虾青素的含量
[0144][0145]
本发明先后采用乙醚破壁提取和二氧化碳超临界萃取的手段得到的菜豆提取物中包含2,6-二叔丁基对甲苯酚等高活性酚类物，这使得菜豆提取物可以在高盐浓度胁迫条件下促进雨生红球藻大量合成虾青素。2,6-二叔丁基对甲苯酚和2,6-二叔丁基对(二甲氨
甲基)苯酚可以调控雨生红球藻细胞中的酶系与非酶系两套抗氧化系统应对氧化应激反应。在光照强度为6400-6500lx条件下，雨生红球藻产生氧化应激反应，产生大量ros从而触发细胞防御反应。ros水平过高会对雨生红球藻细胞中的蛋白质和核酸生物大分子物质产生毒害作用，添加菜豆提取物和2,6-二叔丁基对(二甲氨甲基)苯酚则可以增强细胞中的酶系(如sod、pod和cat)和非酶系(gsh和虾青素)两套抗氧化防御系统，从而清除过量的ros以维持雨生红球藻细胞内的动态平衡，以此维护细胞的正常新陈代谢活动。菜豆提取物和2,6-二叔丁基对(二甲氨甲基)苯酚可以上调与合成虾青素有关的酶的基因(dxs、lcy、bkt、chy)的表达量，从而促进虾青素的合成与累积。不仅如此，菜豆提取物和2,6-二叔丁基对(二甲氨甲基)苯酚的添加可以提高雨生红球藻内一氧化氮的含量，可以促进雨生红球藻的新陈代谢活动，合成出更多的虾青素。本发明将菜豆提取物和2,6-二叔丁基对(二甲氨甲基)苯酚协同使用作为诱导雨生红球藻合成虾青素的诱导剂，获得了虾青素浓度含量更高的所述雨生红球藻提取物，推测是菜豆提取物中具有高活性的2,6-二叔丁基对(二甲氨甲基)苯酚中的二甲氨甲基中的氮原子的可以在水溶液状态下部分电离，以活化电荷的方式增强其渗透到雨生红球藻细胞中，而细胞中的2,6-二叔丁基对(二甲氨甲基)苯酚的叔丁基对于细胞外的2,6-二叔丁基对甲苯酚的叔丁基具有较强的相容性，从而进一步提高雨生球红藻对于所述诱导剂的吸收，从而调高雨生红球藻中与合成虾青素有关的酶的基因(dxs、lcy、bkt、chy)的表达量，从而促进虾青素的合成与累积。
[0146]
在红蓝光的照射下雨生红球藻中参与新陈代谢的酶活力得到提升，因而其繁殖扩增速率增大，合成虾青素的效率也得到提高。硝酸钠、三氧化钼、维生素b1、维生素h、六水硝酸钴、五水硫酸铜、柠檬酸铁、氯化锰、硫酸锌可以为雨生红球藻的新陈代谢活动提高必要的微量元素等营养。
[0147]
测试例2
[0148]
皮肤修复能力测试：
[0149]
(1)选用体重为38
±
2g的二月龄健康雌性昆明小鼠进行试验；
[0150]
(2)小鼠背部脱毛后用生理盐水清理，然后用强力胶带粘贴该处皮肤8次，每天重复4次，连续3天进行上述胶带撕扯处理；
[0151]
(3)第4天起，在小鼠的受损部位分布涂抹本发明实施例制备的抗氧化消炎雨生红球藻提取物和甘油以质量比1:1组成的混合物，每天2次，连续7天；设置一个空白对照组，仅涂抹甘油；涂抹量均为0.2g/cm2；各对比组中均含有20只上述小鼠，试验结果取平均值；
[0152]
(4)在经过上述7天涂抹处理之后的第二天，使用corneometer cm825测试仪测定被测部位的角质层水分含量。
[0153]
表2抗氧化消炎雨生红球藻提取物对于胶带撕扯模型小鼠的修复
[0154]
[0155]
本发明所得雨生红球藻提取物中富含虾青素，而虾青素具有强大的抗氧化能力，可以有效清除皮肤中的自由基，起到抗炎、修复的作用。在本测试中，小鼠经过胶带拉扯伤害后皮肤出现破损，皮肤应激产生大量自由基导致发炎，受损部位因皮肤屏障受损而使得经皮失水量增大。在使用了由本发明特定方法制得的雨生红球藻提取物后，在虾青素的抗氧化作用下小鼠受损皮肤的炎症得到缓和、镇定和修复，使得受损部位的经皮失水量显著降低。
技术特征：1.一种抗氧化消炎雨生红球藻提取物的制备方法，其特征在于：q1将培育得到的雨生红球藻进行冻干脱水处理，随后粉碎过筛，得到雨生红球藻冻干粉末；q2将所述雨生红球藻冻干粉末投入二氧化碳超临界萃取器中进行萃取，得到所述抗氧化消炎雨生红球藻提取物。2.如权利要求1所述抗氧化消炎雨生红球藻提取物的制备方法，其特征在于，所述雨生红球藻的培育过程为：f1将雨生红球藻藻株接种至扩增培养基中并在红蓝光照与无光联合条件下扩培；f2将步骤f1所得完成扩培的扩增培养基离心，分离出其中的扩培后雨生红球藻并转移至诱导培养基中然后在红蓝光照与无光联合条件下培养，再离心分离得到雨生红球藻。3.如权利要求2所述抗氧化消炎雨生红球藻提取物的制备方法，其特征在于，所述扩增培养基由以下原料组成：硝酸钠、三氧化钼、维生素b1、维生素h、六水硝酸钴、五水硫酸铜、柠檬酸铁、氯化锰、硫酸锌、水，以磷酸二氢钾和磷酸氢二钾调节ph。4.如权利要求2所述抗氧化消炎雨生红球藻提取物的制备方法，其特征在于，所述诱导培养基由以下原料组成：三氧化钼、维生素b1、维生素h、六水硝酸钴、五水硫酸铜、柠檬酸铁、氯化锰、硫酸锌、诱导剂、水，以磷酸二氢钾和磷酸氢二钾调节ph。5.如权利要求2所述抗氧化消炎雨生红球藻提取物的制备方法，其特征在于：步骤f1中将雨生红球藻藻株接种至扩增培养基中并在红蓝光照与无光联合条件下扩培8-12d，每1kg所述扩增培养基中接种1-2g所述雨生红球藻藻株，培养温度26-27.2℃。6.如权利要求2所述抗氧化消炎雨生红球藻提取物的制备方法，其特征在于：步骤f2中以10000-12000rpm的转速将步骤f1所得完成扩培的扩增培养基离心3-5min，分离出其中的扩培后雨生红球藻并转移至诱导培养基中然后在红蓝光照与无光联合条件下培养8-10d，每1kg所述诱导培养基中接种1-2g所述扩培后雨生红球藻，培养温度为29-31℃，再以10000-12000rpm的转速离心8-12min分离得到雨生红球藻。7.如权利要求5所述抗氧化消炎雨生红球藻提取物的制备方法，其特征在于：步骤f1中所述红蓝光照与无光联合条件具体为，采用功率为100-120w、红蓝比为1:(2-3)、红光波长为645-650nm、蓝光波长为455-460nm的光源，每个红光光源和蓝光光源的光照强度均为2000-2100lx；红蓝光照和无光的时间比为(10-15)h:12h。8.如权利要求4所述抗氧化消炎雨生红球藻提取物的制备方法，其特征在于：所述诱导剂为菜豆提取物、2,6-二叔丁基对(二甲氨甲基)苯酚中的至少一种。9.抗氧化消炎雨生红球藻提取物，其特征在于：由权利要求1-8中任一项所述抗氧化消炎雨生红球藻提取物的制备方法得到。
技术总结本发明公开了一种抗氧化消炎雨生红球藻提取物及制备方法，通过将本发明培育得到的雨生红球藻投入二氧化碳超临界萃取器中进行萃取得到。本发明得到的雨生红球藻提取物活性成分含量高，用于化妆品中具有抗氧化、消炎作用，能及时修复皮肤受损细胞，使皮肤紧致、有弹性。有弹性。
技术研发人员：张露引
受保护的技术使用者：艾苛密（上海）健康科技股份有限公司
技术研发日：2022.04.20
技术公布日：2022/7/5
