1.本发明属于迷迭香纯化领域，尤其涉及一种利用双水相萃取法制备迷迭香提取物的方法。
背景技术：2.迷迭香(rosmarinus oficinalis l.)是一种唇形科鼠尾草属植物，是一种新型天然抗氧化剂，其主要成分是鼠尾草酸和鼠尾草酚。鼠尾草酸和鼠尾草酚被广泛地应用于医药、日化、食品等领域，是技术人员研究的重点。目前关于迷迭香枝叶中鼠尾草酚、鼠尾草酸提取工艺一般是溶剂提取法、二氧化碳超临界提取法、微波萃取法。但是溶剂提取法、超声提取法提取的迷迭香提取物存在稳定性差、含量低的问题。二氧化碳超临界提取方法适合迷迭香抗氧化成分的提取，但是产量低，目前工业开发难度大。
技术实现要素：3.本发明提供了一种利用双水相萃取法制备迷迭香提取物的方法，利用双水相体系富集迷迭香提取物，得到高含量的鼠尾草酸、鼠尾草酚，此方法简单、绿色环保、成本低，产率明显高于传统提取方法。
4.为实现以上目的，本发明采用以下技术方案：
5.一种利用双水相萃取法制备迷迭香提取物的方法，包括以下步骤：
6.步骤1：原料前处理
7.将迷迭香干燥至恒重粉碎，25-90℃用乙醇回流0.5-5h合并浸提液，浓缩蒸干，去除叶绿素后得到迷迭香提取物浸膏；
8.步骤2：双水相体系的制备
9.采用无机盐溶液和有机溶剂配制双水相萃取体系；
10.步骤3：双水相提取
11.将步骤1获得的迷迭香提取物浸膏加入到步骤2获得的双水相萃取体系中，25-50℃下搅拌5-40min，静置分液，保留上相；
12.步骤4：鼠尾草酚、鼠尾草酸浓缩
13.取步骤3得到的上相，对其进行减压蒸馏和真空干燥，得到迷迭香提取物中的鼠尾草酚、鼠尾草酸。
14.以上所述步骤中，步骤1的具体操作为：将迷迭香干燥至恒重粉碎至0.5厘米左右，用乙醇回流，滤出浸提液，残渣用乙醇继续回流提取两次；合并乙醇浸提液，浓缩蒸干，用滴水沉降法除叶绿素，得迷迭香提取物浸膏；所述回流温度优选为50-90℃；所述回流时间优选为1-4h；
15.步骤2中所述无机盐溶液为硫酸铵水溶液、碳酸钠水溶液或磷酸氢二钾水溶液的一种或多种，优选的无机盐溶液为硫酸铵水溶液，优选的硫酸铵水溶液中所含无机盐质量百分比为20％-45％；
16.步骤2中所述有机溶剂为乙醇或甲醇，优选的机溶剂为乙醇，优选的乙醇质量百分比为25％-40％，优选的双水相体系中乙醇与硫酸铵水溶液的体积比为1:1-1:3；
17.步骤4减压蒸馏的温度为50-90℃，压力为0.1mpa，真空干燥温度为60-120℃。
18.有益效果：本发明提供了一种利用双水相萃取法制备迷迭香提取物的方法，利用无机盐溶液和有机溶剂配制双水相萃取体系富集迷迭香提取物，得到高含量的鼠尾草酸、鼠尾草酚；所述双水相萃取技术利用组分在两相间分配的差异而进行组分的分离与提纯，具有操作简单、条件温和易于放大等优点。本发明方法绿色环保、成本低、方法简单、制备条件温和、提取专一性强、提取得率高，产率明显高于传统提取法，为鼠尾草酸、鼠尾草酚的提取提供了新的制备方法，适合工业化生产。
具体实施方式
19.下面结合具体实施例对本发明进行详细说明：
20.实施例1
21.一种利用双水相萃取法制备迷迭香提取物的方法，包括以下步骤：
22.(1)原料前处理
23.将迷迭香干燥至恒重粉碎至0.5厘米，在65℃用乙醇回流3h，滤出浸提液，残渣用乙醇继续回流提取两次，合并乙醇浸提液，浓缩蒸干，用滴水沉降法除叶绿素，得迷迭香提取物浸膏；
24.(2)双水相体系的制备
25.将质量百分数为25％的乙醇和质量百分数为25％的硫酸铵溶液体积比1:1混合，所制备混合液为双水相体系；
26.(3)双水相提取
27.取10g步骤(1)制备的迷迭香提取物浸膏，加入50ml步骤(2)制备的双水相体系。在30℃条件下搅拌20min，静置分液，保留上相；
28.(4)鼠尾草酚、鼠尾草酸浓缩
29.步骤(3)得到的上相，对其进行减压浓缩和真空干燥，减压蒸馏的温度为60℃，压力为0.1mpa，真空干燥温度为80℃，得到迷迭香提取物中的鼠尾草酚、鼠尾草酸；
30.(5)含量检测
31.通过高效液相色谱法检测迷迭香提取物中目标成分鼠尾草酚、鼠尾草酸的纯度，并计算提取物中目标成分的收率，结果见表1。高效液相色谱条件：色谱柱为agilent tc-c18柱(4.6mm
×
250mm，5μm)；流动相：a为乙腈，b为4％甲酸水溶液，体积比a∶b＝(70％∶30％)；柱温30℃，流速0.8ml/min，进样量0-25μl，检测波长330nm。
32.实施例2
33.一种利用双水相萃取法制备迷迭香提取物的方法，包括以下步骤：
34.(1)原料前处理
35.将迷迭香干燥至恒重粉碎至0.5厘米，在65℃用乙醇回流3h，滤出浸提液，残渣用乙醇继续回流提取两次，合并乙醇浸提液，浓缩蒸干，用滴水沉降法除叶绿素，得迷迭香提取物浸膏；
36.(2)双水相体系的制备
37.将质量百分数为30％的乙醇和质量百分数为30％的硫酸铵溶液体积比1:1混合，所制备混合液为双水相体系；
38.(3)双水相提取
39.取10g步骤(1)制备的迷迭香提取物浸膏，加入50ml步骤(2)制备的双水相体系。在30℃条件下搅拌20min，静置分液，保留上相；
40.(4)鼠尾草酚、鼠尾草酸浓缩
41.步骤(3)得到的上相，对其进行减压浓缩和真空干燥，减压蒸馏的温度为60℃，压力为0.1mpa，真空干燥温度为80℃，得到迷迭香提取物中的鼠尾草酚、鼠尾草酸；
42.(5)含量检测
43.通过高效液相色谱法检测迷迭香提取物中目标成分鼠尾草酚、鼠尾草酸的纯度，并计算提取物中目标成分的收率，结果见表1。高效液相色谱条件：色谱柱为agilent tc-c18柱(4.6mm
×
250mm，5μm)；流动相：a为乙腈，b为4％甲酸水溶液，体积比a∶b＝(70％∶30％)；柱温30℃，流速0.8ml/min，进样量0-25μl，检测波长330nm。
44.实施例3
45.一种利用双水相萃取法制备迷迭香提取物的方法，包括以下步骤：
46.(1)原料前处理
47.将迷迭香干燥至恒重粉碎至0.5厘米，在65℃用乙醇回流3h，滤出浸提液，残渣用乙醇继续回流提取两次，合并乙醇浸提液，浓缩蒸干，用滴水沉降法除叶绿素，得迷迭香提取物浸膏；
48.(2)双水相体系的制备
49.将质量百分数30％的乙醇和质量百分数25％的硫酸铵溶液体积比1:2混合，所制备混合液为双水相体系；
50.(3)双水相提取
51.取10g步骤(1)制备的迷迭香提取物浸膏，加入50ml步骤(2)制备的双水相体系。在30℃条件下搅拌20min，静置分液，保留上相；
52.(4)鼠尾草酚、鼠尾草酸浓缩
53.步骤(3)得到的上相，对其进行减压浓缩和真空干燥，减压蒸馏的温度为60℃，压力为0.1mpa，真空干燥温度为80℃，得到迷迭香提取物中的鼠尾草酚、鼠尾草酸；
54.(5)含量检测
55.通过高效液相色谱法检测迷迭香提取物中目标成分鼠尾草酚、鼠尾草酸的纯度，并计算提取物中目标成分的收率，结果见表1。高效液相色谱条件：色谱柱为agilent tc-c18柱(4.6mm
×
250mm，5μm)；流动相：a为乙腈，b为4％甲酸水溶液，体积比a∶b＝(70％∶30％)；柱温30℃，流速0.8ml/min，进样量0-25μl，检测波长330nm。
56.表1实施例1-3中得到的提取物中鼠尾草酚和鼠尾草酸的纯度和收率
[0057][0058]
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出对于本领域的技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以对部分技术特征做不同程度的修改，应当指出，这些修改，也应在本发明的保护范围内。
技术特征：1.一种利用双水相萃取法制备迷迭香提取物的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：原料前处理将迷迭香干燥至恒重粉碎，25-90℃用乙醇回流0.5-5h合并浸提液，浓缩蒸干，去除叶绿素后得到迷迭香提取物浸膏；步骤2：双水相体系的制备采用无机盐溶液和有机溶剂配制双水相萃取体系；步骤3：双水相提取将步骤1获得的迷迭香提取物浸膏加入到步骤2获得的双水相萃取体系中，25-50℃下搅拌5-40min，静置分液，保留上相；步骤4：鼠尾草酚、鼠尾草酸浓缩取步骤3得到的上相，对其进行减压蒸馏和真空干燥，得到迷迭香提取物中的鼠尾草酚、鼠尾草酸。2.根据权利要求1所述的利用双水相萃取法制备迷迭香提取物的方法，其特征在于，步骤1的具体操作为：将迷迭香干燥至恒重粉碎至0.5厘米左右，用乙醇回流，滤出浸提液，残渣用乙醇继续回流提取两次；合并乙醇浸提液，浓缩蒸干，用滴水沉降法除叶绿素，得迷迭香提取物浸膏。3.根据权利要求1或2所述的利用双水相萃取法制备迷迭香提取物的方法，其特征在于，步骤1中所述回流温度为50-90℃；所述回流时间为1-4h。4.根据权利要求1所述的利用双水相萃取法制备迷迭香提取物的方法，其特征在于，步骤2中所述无机盐溶液为硫酸铵水溶液、碳酸钠水溶液或磷酸氢二钾水溶液的一种或多种；所述有机溶剂为乙醇或甲醇。5.根据权利要求1或4所述的利用双水相萃取法制备迷迭香提取物的方法，其特征在于，步骤2中所述无机盐溶液为硫酸铵水溶液，所述有机溶剂为乙醇。6.根据权利要求5所述的利用双水相萃取法制备迷迭香提取物的方法，其特征在于，所述硫酸铵水溶液质量百分比为20％-45％；所述乙醇质量百分比为25％-40％。7.根据权利要求6所述的利用双水相萃取法制备迷迭香提取物的方法，其特征在于，所述双水相萃取体系中乙醇与硫酸铵水溶液的体积比为1:1-1:3。8.根据权利要求1所述的利用双水相萃取法制备迷迭香提取物的方法，其特征在于，步骤4减压蒸馏的温度为50-90℃，压力为0.1mpa。9.根据权利要求1或8所述的利用双水相萃取法制备迷迭香提取物的方法，其特征在于，步骤4真空干燥温度为60-120℃。
技术总结本发明公开了一种利用双水相萃取法制备迷迭香提取物的方法，属于迷迭香纯化领域，利用无机盐溶液和有机溶剂配制双水相萃取体系富集迷迭香提取物，得到高含量的鼠尾草酸、鼠尾草酚；本发明所述双水相萃取技术利用组分在两相间分配的差异而进行组分的分离与提纯，具有操作简单、条件温和易于放大等优点，方法简单、绿色环保、成本低，产率明显高于传统提取法。法。
技术研发人员：郭玲 华寿虎 刘传涛 李佟
受保护的技术使用者：南京泛成生物科技有限公司
技术研发日：2022.05.10
技术公布日：2022/7/5
