1.本发明属于灵芝开发利用技术领域，具体涉及一种具有改善肺损伤功能的灵芝提取物。
技术背景
2.目前，中药材大健康产业存在功能因子提取低值化、功效不确切、产品低端等问题。因此，建立中药材功能因子高值化提取、功效精准评价关键技术，并以此为基础建立中药材源大健康产品创制关键技术体系，进行高端大健康产品开发，已成为中药材大健康产业的发展趋势。
3.灵芝为安徽省特色道地中药材，药用历史悠久，具有补气安神、止咳平喘、延年益寿等功效。目前，安徽省灵芝种植面积超10万亩，产量达5万吨，产值约40亿元，市场潜力巨大，但灵芝加工产品则以饮片等低端产品为主，极大的限制了灵芝产业发展。
4.为了解决灵芝大健康产业中存在的功能因子提取低值化问题，推进安徽省灵芝产业发展，本发明开发一种具有改善肺损伤功能的灵芝提取物。
技术实现要素：5.本发明提供了一种具有改善肺损伤功能的灵芝提取物，该灵芝提取物由1质量份的灵芝三萜提取物和3质量份的灵芝多糖提取物组成。本发明制备的灵芝提取物经小鼠活体实验验证，对lps诱导的急性肺损伤具有明显的改善作用。
6.本发明的具体实现步骤如下：
7.(1)灵芝三萜提取物的制备：以灵芝子实体超微粉为原料，浓度为95％的乙醇为提取剂，在真空度0.08mpa、超声功率240w、温度60℃、料液比1∶20的条件下，真空耦合超声提取60min，提取液经浓缩、干燥制得灵芝三萜提取物；
8.(2)灵芝多糖提取物的制备：在灵芝子实体超微粉中按1∶15料液比加入95％无水乙醇，浸泡24h，过滤，重复浸泡2～3次，直至浸泡液颜色无明显差异，滤渣自然烘干，得脱脂灵芝子实体超微粉；以脱脂灵芝子实体超微粉为原料，蒸馏水为提取剂，在真空度0.08mpa、超声功率300w、温度50℃、料液比1∶30的条件下，真空耦合超声提取120min，提取液经浓缩、干燥制得灵芝多糖提取物；
9.(3)灵芝提取物的制备：将灵芝三萜提取物和灵芝多糖提取物按照1∶3的质量比混合均匀，制得灵芝提取物。
10.本发明的有益技术效果体现在以下几个方面：
11.1、本发明采用真空耦合超声技术提取灵芝子实体中的灵芝三萜和灵芝多糖，通过工艺参数优化，灵芝三萜提取率达到80％以上，灵芝多糖提取率达到90％以上。
12.2、本发明将灵芝三萜提取物和灵芝多糖提取物合理配伍后，经小鼠活体实验验证，对lps诱导的急性肺损伤具有明显的改善作用。
附图说明
13.图1灵芝提取物对lps诱导的急性肺损伤小鼠的肺组织湿/干重量比的影响试验结果条形图；
14.图2灵芝提取物对lps诱导的急性肺损伤小鼠的肺泡灌洗液中总细胞数量的影响试验结果条形图；
15.图3灵芝提取物对lps诱导的急性肺损伤小鼠的肺组织mpo活性的影响试验结果条形图；
16.图4灵芝提取物对lps诱导的急性肺损伤小鼠的肺组织病理学改变的影响(h&e染色)试验结果图。
具体实施方式
17.下面结合具体的实施例，对本发明做进一步说明。本发明的特点和优点将随着描述而更清楚，但示例性的实施例仅仅用来说明本发明，并不对本发明的范围构成任何限制。
18.实施例1
19.1、灵芝三萜提取物的制备：以灵芝子实体超微粉为原料，浓度为95％的乙醇为提取剂，在真空度0.08mpa、超声功率240w、温度60℃、料液比1∶20的条件下，真空耦合超声提取60min，提取液经浓缩、干燥制得灵芝三萜提取物。
20.2、灵芝多糖提取物的制备：在灵芝子实体超微粉中按1∶15料液比加入95％无水乙醇，浸泡24h，过滤，重复浸泡2～3次，直至浸泡液颜色无明显差异，滤渣自然烘干，得脱脂灵芝子实体超微粉；以脱脂灵芝子实体超微粉为原料，蒸馏水为提取剂，在真空度0.08mpa、超声功率300w、温度50℃、料液比1∶30的条件下，真空耦合超声提取120min，提取液经浓缩、干燥制得灵芝多糖提取物。
21.3、灵芝提取物改善肺损伤活性测定，具体步骤如下：
22.(1)lps诱导的小鼠急性肺损伤模型建立；
23.(2)80只6～8周c57bl/6雄性小鼠适应性饲养1周后，按照表1随机分成8组：
24.表1灵芝提取物改善肺损伤活性测定动物分组表
[0025][0026]
(3)肺组织湿/干重量比。收集小鼠肺组织后称重，记录为湿重，随后将肺组织置于烘箱80℃烘烤48h至恒重，进行称重并记录为干重，计算肺组织湿/干重量比值。
[0027]
(4)mpo活性检测。小鼠肺组织置于预冷的生理盐水中进行匀浆，离心(4℃，3000rpm，10min)取上清，根据mpo检测试剂盒(南京建成生物工程研究所)说明书进行检测。
[0028]
(5)组织病理学分析。肺组织经4％多聚甲醛固定、石蜡包埋、切片，随后进行h&e染色，光学显微镜观察并拍照分析。
[0029]
(6)数据分析。所有实验均重复三次，实验数据均用spss19.0软件处理，数据以均值
±
sd值表示，不同组间比较采用单因素方差分析及最小显著差异法(lsd)法多重比较检验，当p＜0.05时确定为差异显著，p＜0.01时确定为差异极显著。
[0030]
4、灵芝提取物改善肺损伤活性测定结果如下：
[0031]
(1)小鼠肺水肿程度通过测定肺组织湿/干重量比来衡量。结果显示(图1)，与正常对照组小鼠相比，lps刺激导致模型组小鼠的肺组织湿/干重量比显著升高(p＜0.01)，说明lps刺激可导致小鼠肺水肿，而灵芝提取物可以逆转lps诱导的肺水肿，其中三萜∶多糖(1∶3)活性最为显著。##：与正常组相比有显著性差异(p＜0.01)；**：与模型组相比有显著性差异(p＜0.01)。
[0032]
(2)肺部发生感染性损伤后，会有大量免疫细胞被募集到肺泡等肺组织。结果显示(图2)，与正常对照组小鼠相比，lps刺激导致模型组小鼠的肺泡灌洗液中总细胞数量显著升高(p＜0.01)，说明lps刺激可导致小鼠肺损伤，而灵芝提取物可以逆转lps诱导的肺泡中细胞异常升高，其中三萜∶多糖(1∶3)活性最为显著。##：与正常组相比有显著性差异(p＜0.01)；**：与模型组相比有显著性差异(p＜0.01)。
[0033]
(3)mpo活性是反映肺组织中性粒细胞炎性浸润的常用指标。结果显示(图3)，与正常对照组小鼠相比，lps刺激导致模型组小鼠的肺组织mpo活性显著升高(p＜0.01)，说明lps刺激可导致小鼠肺组织中性粒细胞炎性浸润，而灵芝提取物可以逆转lps诱导的肺组织中性粒细胞炎性浸润，其中三萜∶多糖(1∶3)活性最为显著。##：与正常组相比有显著性差异
(p＜0.01)；**：与模型组相比有显著性差异(p＜0.01)。
[0034]
(4)h&e染色用于评价肺组织病理学改变。结果显示(图4)，与正常对照组小鼠相比，lps刺激导致模型组小鼠的肺泡间隔增厚及肺组织损伤，而灵芝提取物可以逆转lps诱导的肺组织病理学改变，其中三萜∶多糖(1∶3)活性最为显著。
[0035]
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，本发明的内容，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和变型，这些改进和变型也应视为本发明的保护范围。
技术特征：1.一种具有改善肺损伤功能的灵芝提取物，其特征在于所述灵芝提取物包括：1份灵芝三萜提取物和3份灵芝多糖提取物，以上份数均为质量份。2.根据权利要求1所述的一种具有改善肺损伤功能的灵芝提取物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：(1)灵芝三萜提取物的制备：以灵芝子实体超微粉为原料，浓度为95％的乙醇为提取剂，在真空度0.08mpa、超声功率240w、温度60℃、料液比1∶20的条件下，真空耦合超声提取60min，提取液经浓缩、干燥制得灵芝三萜提取物；(2)灵芝多糖提取物的制备：在灵芝子实体超微粉中按1∶15料液比加入95％无水乙醇，浸泡24h，过滤，重复浸泡2～3次，直至浸泡液颜色无明显差异，滤渣自然烘干，得脱脂灵芝子实体超微粉；以脱脂灵芝子实体超微粉为原料，蒸馏水为提取剂，在真空度0.08mpa、超声功率300w、温度50℃、料液比1∶30的条件下，真空耦合超声提取120min，提取液经浓缩、干燥制得灵芝多糖提取物；(3)灵芝提取物的制备：将灵芝三萜提取物和灵芝多糖提取物按照1∶3的质量比混合均匀，制得灵芝提取物。
技术总结本发明涉及一种具有改善肺损伤功能的灵芝提取物，该灵芝提取物由1质量份的灵芝三萜提取物和3质量份的灵芝多糖提取物组成。灵芝三萜提取物以灵芝子实体超微粉为原料，浓度为95％的乙醇为提取剂，在真空度0.08Mpa、超声功率240W、温度60℃、料液比1∶20的条件下，真空耦合超声提取60min，提取液经浓缩、干燥制得；灵芝多糖提取物以脱脂灵芝子实体超微粉为原料，蒸馏水为提取剂，在真空度0.08Mpa、超声功率300W、温度50℃、料液比1∶30的条件下，真空耦合超声提取120min，提取液经浓缩、干燥制得。本发明制备的灵芝提取物经小鼠活体实验验证，对LPS诱导的急性肺损伤具有明显的改善作用。LPS诱导的急性肺损伤具有明显的改善作用。LPS诱导的急性肺损伤具有明显的改善作用。
技术研发人员：李强明 许同 王成 彭灿 桂双英 罗建平
受保护的技术使用者：霍山县天下泽雨生物科技发展有限公司 安徽中医药大学
技术研发日：2022.03.28
技术公布日：2022/7/5
