1.本发明属于萃取技术领域，具体涉及一种利用顶空固相微萃取技术测定苹果中香气物质的方法。
背景技术：2.香气是决定食品风味的关键因子，直接影响消费者接受度和产品竞争力。农产品中香气物质含量较低，且难以提取，易受天气和病虫草害等负面影响，其成本可达化学合成香气的10倍以上。农产品因品种、产地等影响相互之间品质和销售利润差异较大。农产品以次充好、以假乱真的现象屡见不鲜，进而导致消费者抵制心理，造成经济受损；食品质量安全也难以保证，对消费者健康形成巨大威胁。作为代谢组学的一部分，香气物质的研究在食品质量鉴定和产品溯源领域有较大贡献。农产品中香气物质组分分析不仅可以促进农产品风味品质的提升，也可用于食品溯源研究，而搜集农产品中香气物质信息，并建立数据库是此研究的基础。苹果和梨均易发生褐变，切块和匀浆等样品前处理过程中尤其严重，造成香气物质的种类和含量发生变化。然而，现有研究中鲜有关注前处理过程中褐变对香气物质组分的影响，不利于香气物质的准确测定，阻碍我国苹果和梨产业的健康发展。
技术实现要素：3.本发明旨在解决背景技术中记载的问题，提供一种利用顶空固相微萃取技术测定苹果中香气物质的方法。
4.为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：一种利用顶空固相微萃取技术测定苹果中香气物质的方法，包括如下步骤：
5.步骤1，苹果去核切成1-2cm左右的块状，并将切块与nacl混合匀浆；
6.步骤2，称取匀浆样品至spme进样瓶；
7.步骤3，加入环己酮内标，拧紧spme进样瓶瓶盖；
8.步骤4，使用spme方法：dvb/car/pdms复合材料萃取头，进入gc-ms进样口，200℃下解吸附1min。
9.在本发明的一种优选实施方式，切块苹果与nacl的混合比值为1:1m/m。
10.在本发明的一种优选实施方式，spme萃取头在250℃下老化10min；spme进样瓶在80℃下孵化15min之后萃取15min。
11.在本发明的一种优选实施方式，步骤4中，设置gc-ms的参数：升温程序初始温度50℃保持1min，以2℃/min升温至180℃保持1min，然后以10℃/min升温至230℃且保持10min，载气为氦气(99.999％纯度)，流速为1.0ml/min；质谱采用全扫模；离子源能量为70ev温度为230℃，香气匹配采用nist 17s数据库。
12.在本发明的一种优选实施方式，spme进样瓶的瓶盖上设置有ptfe隔垫。
13.在本发明的一种优选实施方式，用于测定梨的香气物质。
14.本发明的原理及其有益效果：1、本方法将切块苹果或梨与nacl混合(1:1，m/m)匀
浆，不仅抑制褐变且能促进香气物质挥发；
15.2、本方法采用dvb/car/pdms复合材料萃取头，优化后的前处理条件，适用于广普性测定香气物质。
16.3、利用环己酮作为内标线性关系良好，在0.02
–
200.0mg/kg fw(fw,鲜重)范围内r2大于0.99，可对香气物质进行半定量分析。
17.综上所述，本方法将果实切块与nacl混合(1:1，m/m)，而后匀浆，不仅抑制褐变，避免香气组分发生变化，且能促进香气物质挥发，提高萃取效率；本方法利用环己酮作为内标线性关系良好，可对香气物质进行半定量分析。
18.本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
附图说明
19.本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：
20.图1是本发明苹果匀浆前、后加入nacl褐变现象的照片对比。
21.图2是本发明苹果匀浆前、后加入nacl苹果香气gc-ms色谱图对比。
具体实施方式
22.下面详细描述本发明的实施例，实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
23.本技术提供一种利用顶空固相微萃取技术测定苹果中香气物质的方法，包括如下步骤：
24.步骤1，苹果去核切成1-2cm左右的块状，切块苹果与nacl混合(1:1，m/m)匀浆；
25.步骤2，称取10g匀浆样品至spme进样瓶；
26.步骤3，加入环己酮内标，拧紧spme进样瓶瓶盖(带有ptfe隔垫)
27.步骤4，使用spme方法：dvb/car/pdms复合材料萃取头，萃取利用aoc 6000(shimadazu,japan)自动进样器，进样之前spme萃取头在250℃下老化10min；spme在80℃下孵化15min之后萃取15min(振荡器转速300rpm)。最后，萃取头进入gc进样口，200℃下解吸附1min。调节gc-ms的参数：gc-ms为shimadazu gc-2010气相联用qp 2010质谱仪(shimadazu,japan)，色谱柱为hp-innowax(60m
×
0.25mm
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0.25μm,agilent technologies)。升温程序初始温度50℃保持1min，以2℃/min升温至180℃保持1min，然后以10℃/min升温至230℃(保持10min)。载气为氦气(99.999％纯度)，流速为1.0ml/min；质谱采用全扫模式(full scan mode，m/z 50
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500)；离子源(ei)能量为70ev温度为230℃，香气匹配采用nist 17s数据库(筛选匹配度在90％及以上的化合物)。
28.nacl可促进香气从样品基质中挥发，常规用法是在苹果匀浆后加入，然而匀浆过程中苹果果浆褐变严重，产生“烂果”气味，表明果实香气物质组分发生变化，而现有研究中鲜有关注前处理过程中褐变对香气组分的影响。
29.本实施例中，如图1a所示，样品在匀浆之后迅速发生严重褐变，主要是因为多酚氧
化酶(ppo)等酶促反应产生大量褐色物质。文献表明，大量盐存在的情况下蛋白质构型发生变化，酶活性降低。匀浆之前加入与样品质量1:1(m/m)的nacl，从果浆颜色上看几乎无褐变发生(图1b)，且果香更加浓郁。图2是苹果匀浆前后加入nacl的苹果香气gc-ms色谱图对比(注：图2中，a，未加nacl果浆，5g；b，果浆5g+nacl 5g；c，匀浆前加入样品等量nacl，10g)，除nacl加入时间不同外，其它测定条件相同。由图2b与图2a对比可知，nacl加入后gc-ms检测到的香气化合物数量和响应值均明显升高，说明nacl可促进香气物质的挥发，因此常规用法是在匀浆后加入nacl；与之相比，匀浆之前加入nacl，香气物质的数量和响应值明显进一步提升，结合图1说明匀浆之前加入nacl可抑制褐变，保存果实原有香气，因此本发明将切块苹果与nacl混合后匀浆。另外，梨也是一种易褐变果实。经探究，梨切块后与样品质量1:1(m/m)的nacl混合，能成功抑制梨果实在匀浆过程中的褐变，nacl对gc-ms检测到的梨果实中香气化合物数量和响应值的影响与苹果相近。
30.目前研究中采用的香气测定内标不一致，且很少有人做线性分析。本实施例中，采用环己酮作为内标，在0.02
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200.0mg/kg fw(fw,鲜重)范围内r2大于0.99，表明其线性关系较好，可有效校正前处理和仪器状态造成的误差，适用于对苹果和梨中香气物质进行半定量分析。
31.在本说明书的描述中，参考术语“优选的实施方式”、“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
32.尽管已经示出和描述了本发明的实施例，本领域的普通技术人员可以理解：在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限定。
技术特征：1.一种利用顶空固相微萃取技术测定苹果中香气物质的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1，苹果去核切成1-2cm左右的块状，并将切块与nacl混合匀浆；步骤2，称取匀浆样品至spme进样瓶；步骤3，加入环己酮内标，拧紧spme进样瓶瓶盖；步骤4，使用spme方法：dvb/car/pdms复合材料萃取头，进入gc-ms进样口200℃下解吸附1min。2.如权利要求1所述的利用顶空固相微萃取技术测定苹果中香气物质的方法，其特征在于，切块与nacl的混合比例为1:1m/m。3.如权利要求2所述的利用顶空固相微萃取技术测定苹果中香气物质的方法，其特征在于，spme萃取头在250℃下老化10min；spme进样瓶在80℃下孵化15min，之后萃取15min。4.如权利要求3所述的利用顶空固相微萃取技术测定苹果中香气物质的方法，其特征在于，步骤4中，设置gc-ms的参数：升温程序初始温度50℃保持1min，以2℃/min升温至180℃保持1min，然后以10℃/min升温至230℃且保持10min，载气为氦气，流速为1.0ml/min；质谱采用全扫模式；离子源能量为70ev，温度为230℃，香气匹配采用nist 17s数据库。5.如权利要求4所述的利用顶空固相微萃取技术测定苹果中香气物质的方法，其特征在于，spme进样瓶的瓶盖上设置有ptfe隔垫。6.如权利要求1-4任意一项所述的方法，其特征在于，用于测定梨的香气物质。
技术总结本发明属于萃取技术领域，提出了一种利用顶空固相微萃取技术测定苹果中香气物质的方法，包括如下步骤：步骤1，苹果去核切成1-2cm左右的块状，将切块与氯化钠(NaCl，1:1，m/m)混合匀浆；步骤2，称取匀浆样品至SPME进样瓶；步骤3，加入环己酮内标，拧紧SPME进样瓶瓶盖；步骤4，SPME方法：采用DVB/CAR/PDMS复合材料萃取头，80℃下孵化15min，之后萃取15min，萃取头进入气相色谱-质谱联用(GC-MS)进样口，200℃下解吸附1min。使用本发明的方法，不仅抑制果浆褐变，避免香气物质组分发生改变，且能促进香气物质挥发；通过优化萃取条件，适用于广普性测定香气物质。测定香气物质。测定香气物质。
技术研发人员：高贯威 张鑫楠 刘明雨 匡立学 程杨 李静 徐国锋
受保护的技术使用者：中国农业科学院果树研究所
技术研发日：2022.03.28
技术公布日：2022/7/5
