富含内源性活性肽的nfc橙汁在ace抑制中的应用
技术领域
1.本发明属于食品饮品技术领域，具体涉及一种富含内源性活性肽的nfc橙汁在ace抑制中的应用。
背景技术：2.nfc果汁是以水果为原料，通过机械方法直接制成的100%果汁。who将其列为最少加工食品，是目前提倡消费的健康食品，而当前我国对其消费量仅为欧盟的4.8%，远低于发达国家。橙汁是深受消费者欢迎的果汁之一，具有改善血压、脂质代谢、减少炎症、调节血糖和饱腹感、增强认知、控制尿酸肾结石、改善肠道菌群等作用。特别是，已发表的体外和体内研究报告表明，橙汁具有良好的抗高血压能力。然而，还需要进一步的证据来阐明这些益处是否仅仅与柑橘类黄酮、维生素c或其它化合物有关。
3.肾素-血管紧张素系统是人体重要的内分泌系统，由一系列激素及相应的酶组成，在调节水、电解质平衡及血容量、血管张力和血压方面具有重要作用。其中，血管紧张素转换酶 (angiotensin
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convert enzyme，ace)是肾素-血管紧张素系统的关键酶，催化血管紧张素i转化为血管紧张素ii，并且使得缓激肽失活，升高血压。因此，ace抑制也被认为是抗高血压作用的一个重要靶点之一。
4.ace抑制肽在高蛋白食品中被发现，具有毒性小，ace抑制效率高等优势。我们在低蛋白含量食品橙汁中发现存在大量的肽类，并且在不同加工方式的橙汁中含量差异显著。国内外对于ace抑制肽活性评价主要依赖于体外实验、高血压大鼠模型的动物实验、ace和多肽的分子对接技术等，这些评价方案效率较低，不能实现高通量筛选，而逐渐出现的in silico预测方案有助于高通量的筛选橙汁中的ace抑制肽。
技术实现要素：5.针对现有技术中的上述不足，本发明结合超高压加工技术、肽组学定性定量方法、及in silico预测方案等，提供了一种富含内源性活性肽的nfc橙汁在ace抑制中的应用。
6.为了达到上述发明目的，本发明采用的技术方案为：提供一种富含内源性活性肽的nfc橙汁在ace抑制中的应用。
7.进一步地：富含内源性活性肽的nfc橙汁由超高压非热加工方法制备而成。
8.进一步地：超高压加工方法的超高压压力为450~550 mpa，超高压时间为5~15 min。
9.进一步地：由超高压非热加工方法制备而成的nfc橙汁，其所含的90%的内源性活性肽含量高于传统巴氏热加工的nfc橙汁。
10.本发明的有益效果为：本发明提供了一种富含内源性活性肽的nfc橙汁在ace抑制中的应用，该nfc橙汁由超高压非热加工方法制备而成，与巴氏杀菌橙汁相比，其内源性具有ace抑制活性的肽数量显著增多，ace抑制率显著提高，为通过食品饮品抑制ace提供了新的思路。
附图说明
11.图1为超高压nfc橙汁与巴氏杀菌nfc橙汁ace抑制率对比图。
具体实施方式
12.下面对本发明的具体实施方式进行描述，以便于本技术领域的技术人员理解本发明，但应该清楚，本发明不限于具体实施方式的范围，对本技术领域的普通技术人员来讲，只要各种变化在所附的权利要求限定和确定的本发明的精神和范围内，这些变化是显而易见的，一切利用本发明构思的发明创造均在保护之列。
13.实施例11、样品收集及超高压加工从橙汁榨汁工厂取样，在榨汁流水线取鲜榨橙汁样品。将鲜榨橙汁样品进行超高压处理，超高压压力为500 mpa，超高压时间为10 min。
14.2、橙汁肽类物质提取将超高压橙汁分装于50 ml离心管中，在11000 g，4℃下离心10 min，分别使用0.45 μm和0.22 μm聚醚砜树脂膜过滤，转入1.5 ml进样瓶中。
15.3、lc-qtof ms代谢组学数据采集1）液相条件：色谱柱为acquity uplc hss t3，1.8 μm，2.1
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100 mm。
16.流动相a为0.2%甲酸水，b为乙腈。
17.流动相洗脱梯度，0-11.50 min， 5%-30% b；11.50-11.51 min，30-100% b；11.51-15.00 min，100% b；15.00-15.01 min， 100%-5% b； 15.01-18 min，5% b。
18.进样量，2 μl，流速，0.3 ml/min，柱温，40℃。
19.2）质谱条件：离子源为电喷雾离子源，采集模式为数据依赖型扫描，正离子模式的喷雾电压分别为5500 v，去簇电压分别为80 v，离子源温度500 ℃，雾化器压力（gs1）50 psi，加热辅助气压力（gs2）50 psi，碰撞能35
±
15 ev，数据采集范围为50-1500 da。
20.4、肽类物质定性定量分析橙汁的肽组学分析采用proteinpilot software 5.0.2 (sciex，redwood city，ca，usa)进行。将结果质量设置为0.05% (10%)，并运行错误检测率分析。数据库来自uniprot，物种选择citrus sinensis。在可靠肽的筛选中，去除蛋白汇总和标记为rrrrr的肽类，以及冗余数据，得到定性结果。
21.使用peakview 2.2 (ab sciex，usa)检索和定量可靠肽类。保留时间为0.2 min，ms1/ms2的质量数偏差为0.1 da。筛选得到橙汁样品中检出率大于80%，qc组rsd小于30%的多肽。
22.5、肽类物质活性预测对于步骤4中定性的肽类，采用在线工具https://web.expasy.org/peptide_cutter/ 进行胃蛋白酶和胰蛋白酶模拟消化预测，采用toxinpred (http://crdd.osdd.net/raghava/toxinpred/)、allertop (http://www.ddg-pharmfac.net/allertop)筛选无毒无致敏性肽，采用ace抑制肽预测软件ahtpdb (http://
www.crdd.osdd.net/raghava/ahtpdb/)实现活性预测，确定其中的ace抑制肽。
23.实施例2将鲜榨汁样品进行巴氏杀菌处理，巴氏杀菌温度为90℃，巴氏杀菌时间为15 s。橙汁肽类物质提取、lc-qtof ms代谢组学数据采集、肽类物质定性定量分析、肽类物质活性预测方法同实施例1。
24.实施例3比较实施例1与实施例2橙汁中的内源性具有ace抑制活性的肽数量对肽类物质活性预测中确定的内源性ace抑制肽进行t检验并计算fc值，筛选p 《 0.05，发现有132个肽在超高压橙汁中显著高于巴氏杀菌橙汁，而仅有10个肽在巴氏杀菌橙汁中显著高于超高压橙汁。其中90%以上的内源性活性肽含量显著提高。
25.实施例4富含内源性活性肽的nfc橙汁在ace抑制中的应用本实施例基于ace酶的“硼酸-硼砂缓冲液”模拟系统，采用马尿酸法进行ace抑制活性测定。
26.具体方法如下：1、取0.5 ml橙汁样品用超滤离心管离心，5500 g下离心15 min。
27.2、取30 μl超滤后的样品（空白组加入30 μl水），加入150 μl的1 mm hhl（溶解于ph 7.4的磷酸缓冲液中），加入30 μl ace酶（0.25 unit/ml），于37度保温100 min。
28.3、反应结束后，在体系中加入50 μl ha-d5（10 μg/ml）作为内标，使用oasis-hlb (1 ml, 30 mg)对反应体系进行固相萃取：（1）加入1.0 ml甲醇和1.0 ml 0.1%甲酸水溶液进行固相萃取柱活化；（2）反应体系加入0.8 ml 0.1% 甲酸水稀释样品后，加入固相萃取柱中；（3）用1.0 ml 0.1%甲酸水清洗固相萃取柱；（4）以低流速加入1 ml甲醇，以洗脱保留在其中的分析物，于40℃下氮吹；4、用1 ml甲醇水溶液（50%）溶解氮吹后的物质，上机分析。
29.5、进行液质联用测定物质ha的含量，具体仪器及参数为：分析仪器：uhplc-qqq ms (1290 and 6470, agilent, usa)色谱柱：kinetex f5 column (2.1
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150 mm, 2.6 μm: phenomenex, usa)进样量：2 μl流速：0.3 ml/min流动相及梯度：a-0.1%甲酸水溶液用上述方法对超高压nfc橙汁和巴氏杀菌nfc橙汁检测分析，得到超高压nfc橙汁的ace抑制率为87.47%，巴氏杀菌nfc橙汁的ace抑制率为57.16%。
30.本发明提供了一种富含内源性活性肽的橙汁在ace抑制中的应用，该橙汁由超高压非热加工方法制备而成，与巴氏杀菌橙汁相比，其ace抑制率显著提高，为通过食品饮品抑制ace提供了新的思路。
31.于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利
要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。不应将权利要求中的任何附图标记视为限制所涉及的权利要求。
32.此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。
技术特征：1.一种富含内源性活性肽的nfc橙汁在ace抑制中的应用,所述富含内源性活性肽的nfc橙汁由超高压非热加工方法制备而成，所述超高压非热加工方法的超高压压力为450~550 mpa，超高压时间为5~15 min。2.根据权利要求1所述的富含内源性活性肽的nfc橙汁在ace抑制中的应用，其特征在于：所述由超高压非热加工方法制备而成的nfc橙汁，其所含的90%的内源性活性肽含量高于传统巴氏热加工的nfc橙汁。
技术总结本发明公开了一种富含内源性活性肽的NFC橙汁在ACE抑制中的应用，该NFC橙汁由超高压非热加工方法制备而成，与巴氏杀菌产品相比，其中90%以上的内源性活性肽含量显著提高，ACE抑制率显著提高，为通过食品饮品抑制ACE提供了新的思路。新的思路。新的思路。
技术研发人员：徐贞贞 王珂雯
受保护的技术使用者：中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所
技术研发日：2022.05.06
技术公布日：2022/7/5
