1.本发明涉及医药技术领域，具体涉及化合物在制备治疗非酒精性脂肪肝药物中的应用。
背景技术：2.非酒精性脂肪性肝病是遗传-环境-代谢-应激相关性肝脏疾病，以肝实质细胞脂肪变性和脂肪贮积为病理特征。临床上包括单纯性脂肪肝、脂肪性肝炎(nash)和脂肪性肝硬化三种类型。随着人们生活方式及饮食习惯的改变，非酒精性脂肪性肝病(nafld)的发病率正在逐年递增，在世界范围内成为慢性肝病的常见病因。nafld在西方普通人群中的发病率接近20％～30％，其中约10％的病人发展成nash，nash中近30％的病人可进展为肝硬化，甚至发生终末期的肝功能衰竭，需行肝脏移植手术。
3.趋化细胞因子(趋化因子)是一类低分子量的肝素结合蛋白，它与其细胞表面受体一起，介导多种细胞功能，诸如细胞迁移、细胞活化、血管生成等。当ccr2和ccr5受体在kupffer细胞、肝星状细胞、单核细胞和巨噬细胞上表达，并且当被激活时，促进这些细胞向肝脏的募集，诱导炎症和纤维发生。
4.ccr2是cc类趋化因子受体2型，主要在单核细胞和巨噬细胞中表达,参与炎症单核细胞的募集、活化和迁移。ccr2与其特异性配体ccl2结合，诱导单核细胞或巨噬细胞趋化到炎症区域，导致进一步炎症和组织破坏，发生自身免疫性疾病。此外，ccr2与ccl2的结合可激活细胞内信号传导串联反应，与多种重要疾病的发生发展密切相关，如多发性硬化症、非酒精性脂肪性肝炎、动脉粥样硬化、糖尿病甚至肿瘤。因此，阻断ccr2与ccl2相互作用的小分子抑制剂有望成为这些与炎症相关疾病的新机制治疗药物。
5.人体内源mcp-1与ccr2的连接发生在蛋白质与蛋白质界面连接区域的位置，在此区域，ccr2蛋白的残基谷氨酸-291起非常关键作用，因此，该型化学因子拮抗剂主要由一个中心的基本胺，侧面由2个疏水集团结构，很多ccr2拮抗剂都具有类似结构。目前暂无针对ccr2为靶点治疗非酒精性脂肪肝的药物，大多处于临床的药物多为γ-氨基丁酰胺类、甘胺酰胺类、二取代双哌啶醇类和吲哚类结构。
技术实现要素：6.目前以ccr2蛋白为靶点治疗非酒精性脂肪肝的暂无药物上市，仅有几款药物处于临床阶段，多为γ-氨基丁酰胺类、甘胺酰胺类、二取代双哌啶醇类和吲哚类结构。本发明的目的在于提供化合物在制备治疗非酒精性脂肪肝药物中的应用，通过虚拟筛选及活性检测的手段提出来4种具有新型骨架的分子，以解决现有技术中针对ccr2靶标的化合物种类稀少、抑制剂活性和生物利用度仍然有限的问题。
7.为了解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：
8.化合物在制备治疗非酒精性脂肪肝药物中的应用，所述化合物的通式结构如下：
[0009][0010]
其中，r1基团为r2基团为基团为r3基团为基团为上述化合物用于制备治疗非酒精性脂肪肝药物。
[0011]
优选为，所述化合物的结构式如下：
[0012][0013]
化合物在制备治疗非酒精性脂肪肝药物中的应用，所述化合物的通式结构如下：
[0014][0015]
其中，r1基团为基团为r2基团为基团为上述化合物用于制备治疗非酒精性脂肪肝药物。
[0016]
优选为，所述化合物的结构式如下：
[0017][0018]
化合物在制备治疗非酒精性脂肪肝药物中的应用，所述化合物的通式结构如下：
[0019][0020]
其中，r1基团为r2基团为基团为其中，r3基团为基团为上述化合物用于制备治疗非酒精性脂肪肝药物。
[0021]
优选为，所述化合物的结构式如下：
[0022][0023]
化合物在制备治疗非酒精性脂肪肝药物中的应用，所述化合物的通式结构如下：
[0024][0025]
其中，r1基团为基团为r2基团为基团为上述化合物用于制备治疗非酒精性脂肪肝药物。
[0026]
优选为，所述化合物的结构式如下：
[0027][0028]
优选为，以100份重量份计，包含12～20份所述的化合物，或者该化合物在药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物，余量为赋形剂；其中，所述赋形剂包括填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂或助流剂中的一种或多种；所述填充剂包括淀粉、糖粉、微晶纤维素、甘露醇或乳糖；所述粘合剂包括淀粉浆、羟丙基纤维素、甲基纤维素、乙基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮或羧甲基纤维素钠；所述崩解剂包含羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基纤维素、交联羧甲基纤维素钠、交联聚乙烯吡咯烷酮或羟丙基淀粉；所述润滑剂为硬脂酸镁；所述助流剂为滑石粉。其中，本发明粘合剂为0.1～15％的羟丙基纤维素，填充剂为5～70％的微晶纤维素，崩解剂为10～60％的交联聚维酮；所述润滑剂为0.1～5％的硬脂酸镁；所述助流剂为0.1～3％的滑石粉。
[0029]
优选为，所述药物组合物的剂型包括片剂、胶囊剂、丸剂或混悬剂。
[0030]
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
[0031]
本发明提供了如式ⅰ、ⅱ、ⅲ、iv所示的化合物在抑制趋化因子受体2型蛋白(ccr2)活性中的应用及治疗非酒精性脂肪肝症药物组合物，通过体外的酶活性实验，证明其具有明显的趋化因子受体2型蛋白(ccr2)抑制作用，且与目前已上市的药物相比较，本发明提供的这类化合物对人体无毒副作用，对趋化因子受体2型蛋白(ccr2)具有较强的抑制作用。
具体实施方式
[0032]
下面将结合实施例对本发明作进一步说明。
[0033]
一、目标化合物的来源
[0034]
本发明所有化合物均购买于荷兰specs公司(网址：http://www.specs.com，均为specs公司化合物库中的化合物，相应的编号如下：
[0035]
表1：本发明化合物的编号及结构
[0036]
[0037]
二、本发明化合物的体外药理学测试
[0038]
2.1实验原理
[0039]
fluo-4/am是一种钙荧光探针指示剂用来测量钙离子，作为非极性脂溶性的化合物，进入细胞后在细胞脂解酶的作用下，am基团解离，释出fluo-4；由于fluo-4是极性分子，不易通过脂质双分子膜，它可使fluo-4长时间保留在细胞内。最终可以通过测量被激发的荧光强度来反映gα蛋白被激活的水平。如果筛选的化合物能够激动目标受体，则可以使钙流反应大大升高。反之，如果筛选的化合物能够拮抗目标受体，则可以使钙流反应大大降低。
[0040]
2.2实验方法
[0041]
1、接种细胞：将稳定表达ccr2和g
α16
的hek293细胞接种于96孔greiner平板中，培养过夜。
[0042]
2、染色孵育：吸去种有细胞的孔内的培液，加入新鲜配制的fluo-4/am染料40μl/孔，37℃培养箱内恒温孵育45分钟。
[0043]
3、用钙缓冲液(hbss：含5.4mmol/l kcl，0.3mmol/l na2hpo4，0.4mmol/l kh2po4，4.2mmol/l nahco3，1.3mmol/l cacl2，0.5mmol/l mgcl2，0.6mmol/l mgso4，137mmol/l nacl，5.0mmol/l d-glucose，和250umol/l sulfinpyrazone，ph 7.4)将待测的药物稀释并混匀。
[0044]
4、将染料吸尽弃去，用新鲜配制的钙缓冲液洗一遍后，换上50μl钙缓冲液，空白对照组加入1％dmso的hbss，孵育10分钟。
[0045]
5、用flexstation ii仪检测，第15秒开始由仪器自动加入25μl溶解有待测药物的钙缓冲液，最终读取525nm处荧光值。
[0046]
2.3实验结果
[0047]
1)化合物对趋化因子受体2型蛋白(ccr2)抑制作用
[0048]
抑制率(％)可通过样品组及空白组a值的变化，用下列公式计算：抑制率(％)＝(1-a样品/a空白)
×
100％，抑制率结果见下表：
[0049]
表2：化合物对趋化因子受体2型蛋白(ccr2)的抑制率
[0050]
化合物抑制率(样品浓度为25μm)cl-146％cl-271％cl-334％cl-46％
[0051]
从表2可以看出，化合物cf-2对趋化因子受体2型蛋白(ccr2)表现出较高的抑制率。本发明所述化合物在理论上，对趋化因子受体5型蛋白(ccr5)也具有较高的抑制率。
[0052]
2)化合物对hek293细胞的抑制活性ic
50
的测定
[0053]
通过实验测定了化合物对hek293细胞的抑制活性ic
50
的值，具体实验过程同上，结果见表3。
[0054]
表3：化合物对hek293细胞的ic
50
(μm)
[0055][0056]
三、本发明化合物及其在药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物的药物组合物
[0057]
(1)按照下述配方将药物组合物制成片剂
[0058]
表4
[0059][0060]
制法：本法采用干法制粒压片。依次将本发明化合物与微晶纤维素、羟丙甲基纤维素及内加量的交联聚维酮混合，过80目筛三次，干法制粒机制粒，整粒后于80℃干燥，水分小于3％。干燥后的颗粒再加入外加量的交联聚维酮、硬脂酸镁和滑石粉，混合均匀后，压片，包薄膜衣即得。
[0061]
(2)按照下述配方将药物组合物制成胶囊剂
[0062]
表5
[0063]
名称质量/g百分比/％作用本发明化合物1212％主药微晶纤维素4040％填充剂乳糖3030％填充剂低取代羟丙基纤维素77％粘合剂硬脂酸镁22％润滑剂滑石粉11％助流剂
[0064]
制法：将本发明化合物与上述辅料混合，过60目筛，制粒，干燥，整粒，填装胶囊即得。
[0065]
最后需要说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制技术方案，本领域的普通技术人员应当理解，那些对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本技术方案的宗旨和范围，均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。
技术特征：1.化合物在制备治疗非酒精性脂肪肝药物中的应用，其特征在于，所述化合物的通式结构如下：其中，r1基团为r2基团为基团为r3基团为基团为上述化合物用于制备治疗非酒精性脂肪肝药物。2.根据权利要求1所述化合物在制备治疗非酒精性脂肪肝药物中的应用，其特征在于，所述化合物的结构式如下：3.化合物在制备治疗非酒精性脂肪肝药物中的应用，其特征在于，所述化合物的通式结构如下：其中，r1基团为基团为r2基团为基团为上述化合物用于制备治疗非酒精性脂肪肝药物。4.根据权利要求3所述化合物在制备治疗非酒精性脂肪肝药物中的应用，其特征在于，所述化合物的结构式如下：
5.化合物在制备治疗非酒精性脂肪肝药物中的应用，其特征在于，所述化合物的通式结构如下：其中，r1基团为r2基团为基团为其中，r3基团为基团为上述化合物用于制备治疗非酒精性脂肪肝药物。6.根据权利要求5所述化合物在制备治疗非酒精性脂肪肝药物中的应用，其特征在于，所述化合物的结构式如下：7.化合物在制备治疗非酒精性脂肪肝药物中的应用，其特征在于，所述化合物的通式结构如下：其中，r1基团为基团为r2基团为
上述化合物用于制备治疗非酒精性脂肪肝药物。8.根据权利要求7所述化合物在制备治疗非酒精性脂肪肝药物中的应用，其特征在于，所述化合物的结构式如下：9.根据权利要求1～8任一所述化合物在制备治疗非酒精性脂肪肝药物中的应用，其特征在于，以100份重量份计，包含12～20份所述的化合物，或者该化合物在药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物，余量为赋形剂；其中，所述赋形剂包括填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂或助流剂中的一种或多种；所述填充剂包括淀粉、糖粉、微晶纤维素、甘露醇或乳糖；所述粘合剂包括淀粉浆、羟丙基纤维素、甲基纤维素、乙基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮或羧甲基纤维素钠；所述崩解剂包含羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基纤维素、交联羧甲基纤维素钠、交联聚乙烯吡咯烷酮或羟丙基淀粉；所述润滑剂为硬脂酸镁；所述助流剂为滑石粉。10.根据权利要求1～8任一所述化合物在制备治疗非酒精性脂肪肝药物中的应用，其特征在于，所述药物组合物的剂型包括片剂、胶囊剂、丸剂或混悬剂。
技术总结本发明公开了化合物在制备治疗非酒精性脂肪肝药物中的应用，该类化合物具有如式Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ所示的通式结构，能够对趋化因子受体2型蛋白(CCR2)起到抑制作用。本发明所提供的一系列具有CCR2抑制活性的化合物能够用于制备非酒精性脂肪肝症药物，经过体外酶活性实验，证明其有明显的趋化因子受体2型蛋白(CCR2)抑制作用。作用。作用。
技术研发人员：陈良 张利 左之利 刘兴勇 曹峰
受保护的技术使用者：四川轻化工大学
技术研发日：2022.03.15
技术公布日：2022/7/5
