1.本发明属于植物栽培技术领域，具体涉及一种葡萄砧木茎段快繁的组培培养基和组培方法。
背景技术：2.葡萄(vitis vinifera l.)为葡萄科葡萄属木质藤本植物，是世界最古老的果树树种之一，原产于亚洲西部，现广泛种植于世界各地，其种植方式主要以枝条自根苗繁殖为主。在19世纪60年代，美国加州发现了一种广普性害虫-葡萄根瘤蚜，这对全世界的葡萄产业造成了严重的影响，导致世界葡萄栽培体系发生根本性转变，由欧亚种自根栽培转为抗性砧木嫁接生产。为此，研究发现选育和利用抗性砧木成为有效解决葡萄生产问题的关键因素。
3.传统的葡萄种植过程多以扦插、压条为主的自根苗繁育方式，无法避免各类土传病害的发生，且在种植过程中周期长、易积累病害。植物组织培养技术具有取材方便、不易污染、繁殖系数高的特点，可通过葡萄试管苗根、茎、叶等器官的发生，实现苗木脱毒，快速繁殖优质苗木，降低生产成本，为葡萄砧木的生产应用等方面起到积极作用。但是当前的葡萄组织培养技术育苗时的增殖系数和生根率不太理想。
技术实现要素：4.本发明的目的提供一种葡萄砧木茎段快繁的组培培养基，应用本发明提供的组培培养基进行葡萄砧木茎段快繁，所得丛生芽的增殖系数高和组培苗的生根率高，能够得到大量的葡萄组培苗，为生产化良种育苗提供技术支撑。
5.为了解决上述问题，本发明提供了以下技术方案：
6.本发明提供了一种葡萄砧木茎段快繁的组培培养基，其特征在于，所述组培培养基包括初代培养基、继代培养基和生根培养基；
7.所述初代培养基以ms培养基为基本培养基，还包括：2.0mg/l 6-ba、0.2mg/l iba和0.2mg/l ga3；
8.所述继代培养基以ms培养基为基本培养基，还包括：1.25～2.5mg/l6-ba、0.2～1.0mg/liba和0.2～0.5mg/l ga3；
9.所述生根培养基以1/2ms培养基为基本培养基，还包括：1.0～1.5mg/l iba和0.1～0.2g/lac。
10.优选的，所述初代培养基、继代培养基和生根培养基均还包括30g/l蔗糖和6～8g/l琼脂。
11.优选的，所述初代培养基、继代培养基和生根培养基的ph值均为5.8。
12.本发明还提供了一种葡萄砧木茎段快繁的组培方法，所述组培方法采用上述技术方案的组培培养基，包括以下步骤：
13.将无菌的外植体接种在初代培养基上进行初代培养，得到长度为5～6cm的初代丛
生芽；
14.将所述初代丛生芽转接于继代培养基中进行继代培养，得到继代丛生芽；
15.将所述继代丛生芽进行生根培养。
16.优选的，所述外植体为单芽茎段。
17.优选的，所述初代培养、继代培养和生根培养的温度分别为24～26℃，湿度分别为20～50％。
18.优选的，所述初代培养、继代培养均是在光照条件下进行的，所述光照的时间分别为12～16h/d，所述光照的强度分别为2000～2500lx。
19.优选的，所述初代培养和继代培养的时间分别为28～32d。
20.优选的，所述生根培养包括暗培养和光照培养，所述暗培养的培养时间为3～7d；所述光照培养的光照强度为2000～2500lx，光照时间为12h/d，所述生根培养的暗培养和光照培养的总时间为28～40d。
21.优选的，所述无菌的外植体接种在初代培养基上之前采用外植体消毒剂进行消毒；所述消毒的方式包括：流水冲洗后，75％乙醇浸泡30s，无菌水冲洗3～5次，再用0.1％升汞溶液浸泡8min，用无菌水冲洗3～5次。
22.本发明的有益效果：本发明提供了一种葡萄砧木茎段快繁的组培培养基，所述组培培养基包括初代培养基、继代培养基和生根培养基；所述初代培养基以ms培养基为基本培养基，还包括：2.0mg/l 6-ba、0.2mg/l iba、0.2mg/l ga3；所述继代培养基以ms培养基为基本培养基，还包括：1.25～2.5mg/l6-ba、0.2～1.0mg/l iba和0.2～0.5mg/l ga3；所述生根培养基以1/2ms培养基为基本培养基，还包括：1.0～1.5mg/l iba和0.1～0.2g/lac；在本发明提供的组培培养基中，iba(吲哚丁酸)促进葡萄砧木茎段细胞分化和分裂，有利于新根生成；ga3(赤霉素)促进茎段萌发，促进植物细胞伸长和细胞分裂；6-ba(6-苄氨基嘌呤)刺激细胞分裂促进植物生长和发育，促进愈伤组织的形成；iba、ga3、6-ba共同作用下利于诱导葡萄砧木茎段外植体的单芽茎段萌发初代丛生芽，提高丛生芽的增殖系数。ac(活性炭)能够在类似土壤条件的培养基中改变ph并提供暗环境，还可能通过吸附作用减少乙烯、酚类等抑制物质从而改善植物发育，生根培养中利用iba，并用ac加以辅助，促进试管苗根系生长，iba和ac共同作用下可提高生根率，生根培养为二次培养，前期黑暗环境利于诱导生根，提升生根率，后期在光照环境中培养，利于试管苗生长。实施例结果表明：葡萄砧木茎段快繁育苗中，继代丛生芽的增殖系数为2.89，继代丛生芽经生根培养获得组培苗的生根率为100％。可见本发明通过所述初代培养基、继代培养基和生根培养基中各个组分的配合、各个组分的用量和相对比例解决了葡萄组织培养育苗时的增殖系数和生根率不太理想的技术问题。
附图说明
23.为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
24.图1为实施例1继代培养所得丛生芽生长情况；
25.图2为实施例1继代丛生芽经生根培养后所得组培苗的生根情况；
26.图3为实施例2继代培养所得丛生芽生长情况；
27.图4为实施例2继代丛生芽经生根培养后所得组培苗的生根情况；
28.图5为实施例3继代培养所得丛生芽生长情况；
29.图6为实施例3继代丛生芽经生根培养后所得组培苗的生根情况；
30.图7为实施例1单芽茎段经初代培养所得丛生芽生长情况；
31.图8为对比例7单芽茎段经初代培养所得丛生芽生长情况；
32.图9为对比例8单芽茎段经初代培养所得丛生芽生长情况；
33.图10为实施例2单芽茎段经初代培养所得丛生芽生长情况；
34.图11为对比例9单芽茎段经初代培养所得丛生芽生长情况；
35.图12为对比例10单芽茎段经初代培养所得丛生芽生长情况；
36.图13为实施例3单芽茎段经初代培养所得丛生芽生长情况；
37.图14为对比例11单芽茎段经初代培养所得丛生芽生长情况；
38.图15为对比例12单芽茎段经初代培养所得丛生芽生长情况。
具体实施方式
39.本发明提供了一种葡萄砧木茎段快繁的组培培养基，所述组培培养基包括初代培养基、继代培养基和生根培养基。
40.在本发明中，所述初代培养基以ms培养基为基本培养基，还包括：2.0mg/l6-ba、0.2mg/l iba和0.2mg/l ga3。进一步优选以ms培养基为基本培养基，还仅含有2.0mg/l 6-ba、0.2mg/l iba和0.2mg/l ga3。
41.在本发明中，所述继代培养基以ms培养基为基本培养基，还包括1.25～2.5mg/l6-ba、0.2～1.0mg/l iba和0.2～0.5mg/l ga3；进一步优选以ms培养基为基本培养基，还仅含有：1.25～2.5mg/l6-ba、0.2～1.0mg/l iba和0.2～0.5mg/l ga3。在本发明中，所述继代培养基以ms培养基为基本培养基，还包括：1.25～2.5mg/l6-ba，优选为1.5～2.5mg/l6-ba，更优选2.0～2.5mg/l6-ba；还包括0.2～1.0mg/l iba，优选为0.3～1.0mg/l iba，更优选为0.5mg/l iba；还包括0.2～0.5mg/l ga3，优选为0.3～0.5mg/l ga3，更优选为0.5mg/l ga3。
42.在本发明中，所述生根培养基以1/2ms培养基为基本培养基，还包括：1.0～1.5mg/l iba和0.1～0.2g/lac；进一步优选以1/2ms培养基为基本培养基，还仅含有：1.0～1.5mg/l iba和0.1～0.2g/lac。在本发明中，所述生根培养基以1/2ms培养基为基本培养基，还包括：1.0～1.5mg/l iba，优选为1.2～1.5mg/l iba，更优选为1.5mg/liba；还包括0.1～0.2g/lac，优选为0.1g/lac。
43.在本发明中，iba(吲哚丁酸)促进葡萄砧木茎段细胞分化和分裂，有利于新根生成；ga3(赤霉素)促进茎段萌发，促进植物细胞伸长和细胞分裂；6-ba(6-苄氨基嘌呤)刺激细胞分裂促进植物生长和发育，促进愈伤组织的形成；iba、ga3、6-ba共同作用下利于诱导葡萄砧木茎段外植体的单芽茎段萌发初代丛生芽，提高继代丛生芽的增殖系数。本发明的继代培养基同时使用6-ba、iba和ga3三种植物生长调节剂。本发明多种生长调节剂共同使用，同时结合各个植物生长调节剂的合理用量是本发明增殖系数提高，生根率较高的关键所在。再加之生根培养基中ac(活性炭)能够在类似土壤条件的培养基中改变ph并提供暗环
境，还可能通过吸附作用减少乙烯、酚类等抑制物质从而改善植物发育，生根培养中利用iba，并用ac加以辅助，促进试管苗根系生长，iba和ac共同作用下可提高组培苗生根率，利于试管苗生长。
44.初代培养基、继代培养基和生根培养基中添加的植物生长调节剂iba、6-ba、ga3相互配合，在特定的用量和相对比例下实现了继代培养后丛生芽增殖系数的提高和生根培养生根率的提高。
45.在本发明中，对所述iba、ga3、6-ba、ac的来源没有特殊的限定，采用常规的市售产品即可。
46.在本发明中，所述初代培养基、继代培养基和生根培养基均优选还包括30g/l蔗糖和6～8g/l琼脂，更优选包括30g/l蔗糖和7g/l琼脂。
47.在本发明中，所述初代培养基更优选以ms培养基为基本培养基，还仅含有2.0mg/l 6-ba、0.2mg/l iba、0.2mg/l ga3、30g/l蔗糖和7g/l琼脂。
48.在本发明中，所述继代培养基更优选以ms培养基为基本培养基，还仅含有2.5mg/l6-ba、0.5mg/l iba和0.5mg/l ga3、30g/l蔗糖和7g/l琼脂。
49.在本发明中，所述生根培养基更优选以ms培养基为基本培养基，还仅含有1.5mg/l iba和0.1g/lac、30g/l蔗糖和7g/l琼脂。
50.本发明对所述蔗糖和琼脂的来源没有特殊的限定，采用常规的市售产品即可。
51.在本发明中，所述初代培养基、继代培养基和生根培养基的ph值均优选为5.8。本发明优选用1mol/l的氢氧化钠和1mol/l盐酸调节培养基的ph值。
52.本发明还提供了一种葡萄砧木茎段快繁的组培方法，所述组培方法采用上述技术方案的组培培养基，包括以下步骤：
53.将无菌的外植体接种在初代培养基上进行初代培养，得到长度为5～6cm的初代丛生芽；
54.将所述初代丛生芽转接于继代培养基中进行继代培养，得到继代丛生芽；
55.将所述继代丛生芽进行生根培养。
56.在本发明中，所述无菌的外植体接种在初代培养基上之前优选采用外植体消毒剂进行消毒。本发明对所述消毒方式没有特殊限定，优选为次氯酸钠、洗衣粉和洗洁精、75％乙醇和0.1％升汞中的一种或几种，进一步优选为次氯酸钠、75％乙醇和0.1％升汞中的一种或几种，更优选为75％乙醇和升汞。在本发明实施例中，所述消毒的方式包括：流水冲洗后，75％乙醇浸泡30s，无菌水冲洗3～5次，再用升汞溶液浸泡8min，用无菌水冲洗3～5次。本发明对无菌水没有特殊限定，优选对蒸馏水灭菌后获得；所述无菌水、75％乙醇和升汞的用量均优选淹没外植体即可。本发明所述0.1％升汞优选以每1g升汞定容至1000ml得到。
57.在本发明中，所述无菌的外植体优选包括单芽茎段、叶片、茎尖和叶柄中的一种或多种，进一步优选为单芽茎段、叶片、茎尖的一种或多种，更优选为单芽茎段。本发明提供组培培养基和组培方法尤其适合单芽茎段为外植体。在本发明的实施例中，所述外植体优选为单芽茎段，所述单芽茎段优选以幼嫩新梢作为外植体，消毒后剪去新梢两端获得单芽茎段。本发明优选在茎段上端保留芽以上2厘米，茎段下端保留在芽以下2～3厘米。
58.在本发明中，所述幼嫩新梢来源于葡萄砧木苗。在本发明中，对所述葡萄砧木品种没有特殊的限定，在本发明实施例中葡萄砧木品种优选选自5bb、1103p和so4三种。
59.在本发明中，所述幼嫩新梢优选于从室内盆栽苗获得。在本发明中从室内盆栽苗获得外植体材料，有效减少了从大田取苗进行茎段快繁的污染率，可培养大量外植体材料，且便于取材。
60.在本发明中，所述幼嫩新梢优选取长至6～10节的新梢，进一步优选长至8～10节的新梢，更优选于长至10节的新梢。在本发明中，选择长至6～10节，粗度为1～2毫米的幼嫩新梢作为外植体，长至10节可以确保得到大量的外植体材料，此时的茎段具有较强的分生能力，自身携带的病毒较少，有利于提高后续培养的成活率，取材的同时还可以保证后续材料可以继续生长。
61.在本发明中，所述初代培养、继代培养和生根培养的温度分别优选为24～26℃，更优选为25℃；湿度分别优选为20～50％，进一步优选为25～45％，更优选为40％。
62.在本发明中，所述初代培养、继代培养均是优选在光照条件下进行的，所述光照的时间分别优选为12～16h/d，进一步优选为13～15h/d，更优选为12h/d；所述光照的强度分别优选为2000～2500lx，进一步优选为2100～2400lx，更优选为2300lx。
63.在本发明中，所述初代培养和继代培养的时间分别优选为28～32d，更优选为30d。
64.在本发明中，所述生根培养包括暗培养和光照培养，所述暗培养的培养时间优选为5～7d，进一步优选为6～7d，更优选为7d；所述光照培养的光照强度优选为2000～2500lx，进一步优选为2100～2400lx，更优选为2300lx；光照时间优选为12h/d，所述生根培养的暗培养和光照培养的总时间优选为28～40d，进一步优选为30～38d，更优选为35d。
65.在本发明中，所述生根培养为二次培养，前期黑暗环境利于诱导生根，提升生根率，后期在光照环境中培养。所述生根培养时是将继代培养的试管苗接种到生根培养基中，整个试管苗都在黑暗的环境中，且生根培养基中还添加了活性炭ac，也可以提供黑暗环境。
66.在本发明中，在组培培养基和培养条件的共同作用下提高了葡萄砧木茎段快繁时的丛生芽的增殖系数和组培苗的生根率，能够得到大量的葡萄组培苗，为生产化良种育苗提供技术支撑。
67.为了进一步说明本发明，下面结合附图和实施例对本发明提供的一种葡萄砧木茎段快繁的组培培养基和组培方法进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。
68.实施例1
69.以来自新疆农业大学三坪教学实践基地的一年生5bb砧木苗为材料，其亲本为冬葡萄
×
河岸葡萄。种植在新疆农业大学园艺学院特色果树研究中心室内阳台，进行盆栽苗培养。约60天后生长至10节，粗度为1～2mm毫米的幼嫩新梢进行实验处理。
70.(1)外植体的消毒：将幼嫩新梢剪成2～3厘米长的单芽茎段，放在烧杯中，盖上纱布，用流水冲洗1h，去除表面污渍。随后在超净工作台上，用75％乙醇浸泡30s，无菌水冲洗5次，再用0.1％升汞溶液消毒8min，用无菌水冲洗5次，置于已灭菌的接种盘中备用。
71.(2)初代培养：剪去单芽茎段两端浸染过消毒剂的部分，留取长1.0cm的单芽茎段，其中以ms培养基为基本培养基，同时添加2.0mg/l 6-ba、0.2mg/l iba、0.2mg/l ga3、30g/l蔗糖和7g/l琼脂。初代培养的温度为25℃，湿度为40％，培养时间为30d，光照强度为2300lx，光照时间为12h/d。
72.(3)继代培养：将初代培养获得的长度为5～6cm的初代丛生芽接种于继代培养基
进行培养，继代培养基以ms培养基为基本培养基，同时添加2.5mg/l6-ba、0.5mg/l iba、0.5mg/l ga3、30g/l蔗糖和7g/l琼脂。继代培养的温度为25℃，湿度为40％。培养时间为30d，光照强度为2300lx，光照时间为12h/d。实施例1继代培养后所得丛生芽生长情况见图1。
73.(4)生根培养：继代培养后，将得到的继代丛生芽进行生根培养，以1/2ms培养基为基本培养基，并添加1.5mg/liba、0.1g/lac、30g/l蔗糖和7g/l琼脂，生根培养的总时间为35d，生根培养暗培养7天，光照培养28d。光照培养时光照时间为12h/d，光照强度均为2300lx。生根培养的温度为25℃，湿度均为40％。继代丛生芽经生根培养之后获得组培苗。实施例1继代丛生芽经生根培养后所得组培苗的生根情况见图2。
74.实施例2
75.以来自新疆农业大学三坪教学实践基地的一年生1103p砧木苗为材料，其亲本为冬葡萄
×
沙地葡萄。种植在新疆农业大学园艺学院特色果树研究中心室内阳台，进行盆栽苗培养。约60天后生长至10节，取幼嫩新梢进行实验处理。
76.按照实施例1的方式培养，区别在于，继代培养中以ms培养基为基本培养基，同时添加30g/l蔗糖、7g/l琼脂、1.25mg/l 6-ba、1.0mg/l iba和0.5mg/l ga3。生根培养中以1/2ms培养基为基本培养基，并添加1.0mg/l iba、0.1g/lac、30g/l蔗糖和7g/l琼脂，暗培养7天。实施例2继代培养后所得丛生芽生长情况见图3。实施例2继代丛生芽经生根培养后所得组培苗的生根情况见图4。
77.实施例3
78.以来自新疆农业大学三坪教学实践基地的一年生so4砧木苗为材料，其亲本为冬葡萄
×
河岸葡萄。种植在新疆农业大学园艺学院特色果树研究中心室内阳台，进行盆栽苗培养。约60天后生长至10节，取幼嫩新梢进行实验处理。
79.按照实施例1的方式进行，区别在于，继代培养中以ms培养基为基本培养基，同时添加30g/l蔗糖、7g/l琼脂、2.0mg/l 6-ba、0.2mg/l iba和0.2mg/l ga330g/l蔗糖和7g/l琼脂。生根培养中以1/2ms培养基为基本培养基，并添加1.5mg/l iba、0.1g/lac、30g/l蔗糖和7g/l琼脂，暗培养7天。实施例3继代培养后所得丛生芽生长情况见图5。实施例3继代丛生芽经生根培养后所得组培苗的生根情况见图6。
80.对比例1
81.按照实施例1的方式培养，区别在于组培培养基不同。
82.(2)初代培养：以ms培养基为基本培养基，同时添加2.0mg/l 6-ba、0.2mg/l iba、0.20mg
·
l-1
ga3、30g/l蔗糖和7g/l琼脂。
83.(3)继代培养：以ms培养基为基本培养基，同时添加1.25mg/l 6-ba、0.5mg/l ga3、30g/l蔗糖和7g/l琼脂。
84.(4)生根培养：以1/2ms培养基为基本培养基，同时添加1.5mg/l iba、30g/l蔗糖和7g/l琼脂，ac的添加量为0，暗培养7天。
85.对比例2
86.按照实施例1的方式培养，区别在于组培培养基不同。
87.(3)继代培养：以ms培养基为基本培养基，添加1.25mg/l 6-ba、0.5mg/l iba、30g/l蔗糖和7g/l琼脂。
88.(4)生根培养：以1/2ms培养基为基本培养基，同时添加1.5mg/l iba、0.1g/lac、30g/l蔗糖和7g/l琼脂，暗培养3天。
89.对比例3
90.按照实施例2的方式培养，区别在于继代培养基和生根培养基不同。
91.(3)继代培养：其中以ms培养基为基本培养基，同时添加1.25mg/l 6-ba、0.5mg/l ga3、30g/l蔗糖和7g/l琼脂；
92.(4)生根培养：将继代培养得到的继代丛生芽进行生根培养，以1/2ms培养基为基本培养基，iba添加量为1.0mg/l，ac的添加量为0，暗培养7天。
93.对比例4-1
94.按照实施例2的方式培养，区别在于继代培养基和生根培养基不同。
95.(3)继代培养：其中以ms培养基为基本培养基，添加1.25mg/l 6-ba、0.5mg/l iba、30g/l蔗糖和7g/l琼脂。
96.(4)生根培养：将继代培养得到的继代丛生芽进行生根培养，以1/2ms培养基为基本培养基，同时添加1.0mg/l iba、0.1g/lac、30g/l蔗糖和7g/l琼脂，暗培养3天。
97.对比例4-2
98.按照对比例4-1的方式培养，区别在于生根培养的暗培养时间为0天。
99.对比例5
100.按照实施例3的方式培养，区别在于继代培养基和生根培养基不同。
101.(3)继代培养：以ms培养基为基本培养基，同时添加1.25mg/l 6-ba、0.5mg/l ga3、30g/l蔗糖和7g/l琼脂；
102.(4)生根培养：以1/2ms培养基为基本培养基，添加1.5mg/l iba，30g/l蔗糖和7g/l琼脂，ac的添加量为0，暗培养7天。
103.对比例6-1
104.按照实施例3的方式培养，区别在于继代培养基和生根培养基不同。
105.(3)继代培养：以ms培养基为基本培养基，添加1.25mg/l 6-ba、0.5mg/l iba、30g/l蔗糖和7g/l琼脂。
106.(4)生根培养：以1/2ms培养基为基本培养基，添加1.5mg/l iba、0.1g/l ac、30g/l蔗糖和7g/l琼脂，暗培养3天。
107.对比例6-2
108.按照对比例6-1的方式培养，区别在于生根培养的暗培养时间为0天。
109.对比例7
110.ms培养基换成b5培养基，其余步骤同实施例1。
111.对比例8
112.ms培养基换成wpm培养基，其余步骤同实施例1。
113.对比例9
114.ms培养基换成b5培养基，其余步骤同实施例2。
115.对比例10
116.ms培养基换成wpm培养基，其余步骤同实施例2。
117.对比例11
118.ms培养基换成b5培养基，其余步骤同实施例3。
119.对比例12
120.ms培养基换成wpm培养基，其余步骤同实施例3。
121.对实施例1～3和对比例7～12的初代培养过程中萌芽率、死亡率、污染率、平均株高进行测定，具体的测定方法如下：结果见表1。
122.污染率(％)＝(外植体污染数/外植体总接种数)
×
100％；
123.死亡率(％)＝(外植体死亡数/外植体接种数)
×
100％；
124.萌芽率(％)＝(外植体萌芽数/外植体总接种数)
×
100％。
125.平均株高：游标卡尺直接测量
126.实施例1单芽茎段经初代培养所得丛生芽生长情况见图7。对比例7单芽茎段经初代培养所得丛生芽生长情况见图8。对比例8单芽茎段经初代培养所得丛生芽生长情况见图9。
127.实施例2单芽茎段经初代培养所得丛生芽生长情况见图10。对比例9单芽茎段经初代培养所得丛生芽生长情况见图11。对比例10单芽茎段经初代培养所得丛生芽生长情况见图12。
128.实施例3单芽茎段经初代培养所得丛生芽生长情况见图13。对比例11单芽茎段经初代培养所得丛生芽生长情况见图14。对比例12单芽茎段经初代培养所得丛生芽生长情况见图15。
129.表1实施例1～3和对比例7～12的萌芽率、死亡率、污染率、平均株高结果
[0130][0131][0132]
对实施例1～3和对比例1～6的继代丛生芽增殖系数和经继代丛生芽获得的组培苗的生根率进行计算，计算公式如下：结果见表2。
[0133]
增殖系数＝总芽数/接种芽数
×
100％
[0134]
生根率＝生根苗数/总接种苗数
×
100％
[0135]
表2实施例1～3和对比例1～6的继代丛生芽增殖系数和组培苗的生根率
[0136]
组别继代丛生芽增殖系数组培苗的生根率(％)实施例12.89100实施例22.22100
实施例32.22100对比例11.78100对比例21.560对比例31.220对比例4-11.67100对比例4-21.6797.67对比例51.1170对比例6-11.78100对比例6-21.7887.67
[0137]
根据表1可知，本发明实施例1～3的继代丛生芽增殖系数和继代丛生芽经生根培养获得的组培苗的生根率高于对比例1～6。实施例1～3的增殖系数为2.22～2.89显著高于对比例1～6的增殖系数1.11～1.78，对比例1、对比例3、对比例5的继代培养基中无iba，对比例2、对比例4、对比例6的继代培养基中无ga3，继代丛生芽的增殖系数有所降低。生根培养中，对比例3、对比例5未添加ac组培苗生根率降低。对比例4-2、对比例6-2添加了ac，未进行暗培养，组培苗生根率降低也降低。
[0138]
可见，本发明的继代培养基和生根培养基可以同时提高葡萄砧木茎段快繁时的继代丛生芽的增殖系数和组培苗的生根率，同时暗培养条件也可以提高组培苗的生根率，能够得到大量的葡萄组培苗，为生产化良种育苗提供技术支撑。
[0139]
尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述，但它仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部实施例，人们还可以根据本实施例在不经创造性前提下获得其他实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。
技术特征：1.一种葡萄砧木茎段快繁的组培培养基，其特征在于，所述组培培养基包括初代培养基、继代培养基和生根培养基；所述初代培养基以ms培养基为基本培养基，还包括：2.0mg/l 6-ba、0.2mg/l iba和0.2mg/l ga3；所述继代培养基以ms培养基为基本培养基，还包括：1.25～2.5mg/l6-ba、0.2～1.0mg/liba和0.2～0.5mg/l ga3；所述生根培养基以1/2ms培养基为基本培养基，还包括：1.0～1.5mg/liba和0.1～0.2g/lac。2.根据权利要求1所述的组培培养基，其特征在于，所述初代培养基、继代培养基和生根培养基均还包括30g/l蔗糖和6～8g/l琼脂。3.根据权利要求2所述的组培培养基，其特征在于，所述初代培养基、继代培养基和生根培养基的ph值均为5.8。4.一种葡萄砧木茎段快繁的组培方法，其特征在于，所述组培方法采用权利要求1～3任一项所述的组培培养基，包括以下步骤：将无菌的外植体接种在初代培养基上进行初代培养，得到长度为5～6cm的初代丛生芽；将所述初代丛生芽转接于继代培养基中进行继代培养，得到继代丛生芽；将所述继代丛生芽进行生根培养。5.根据权利要求4所述的组培方法，其特征在于，所述外植体为单芽茎段。6.根据权利要求4所述的组培方法，其特征在于，所述初代培养、继代培养和生根培养的温度分别为24～26℃，湿度分别为20～50％。7.根据权利要求4所述的组培方法，其特征在于，所述初代培养、继代培养均是在光照条件下进行的，所述光照的时间分别为12～16h/d，所述光照的强度分别为2000～2500lx。8.根据权利要求4所述的组培方法，其特征在于，所述初代培养和继代培养的时间分别为28～32d。9.根据权利要求4所述的组培方法，其特征在于，所述生根培养包括暗培养和光照培养，所述暗培养的培养时间为3～7d；所述光照培养的光照强度为2000～2500lx，光照时间为12h/d，所述生根培养的暗培养和光照培养的总时间为28～40d。10.根据权利要求4所述的组培方法，其特征在于，所述无菌的外植体接种在初代培养基上之前采用外植体消毒剂进行消毒；所述消毒的方式包括：流水冲洗后，75％乙醇浸泡30s，无菌水冲洗3～5次，再用0.1％升汞溶液浸泡8min，用无菌水冲洗3～5次。
技术总结本发明属于植物栽培技术领域，具体涉及一种葡萄砧木茎段快繁的组培培养基和组培方法。本发明提供了一种葡萄砧木茎段快繁的组培培养基，所述组培培养基包括初代培养基、继代培养基和生根培养基；所述初代培养基以MS培养基为基本培养基，还包括：2.0mg/L 6-BA、0.2mg/L IBA、0.2mg/L GA3；所述继代培养基以MS培养基为基本培养基，还包括：1.25～2.5mg/L6-BA、0.2～1.0mg/L IBA和0.2～0.5mg/L GA3。本发明通过初代培养基、继代培养基和生根培养基中各个组分的配合、各个组分的用量和相对比例解决了葡萄组织培养育苗时的增殖系数和生根率不太理想的技术问题。理想的技术问题。理想的技术问题。
技术研发人员：周龙 李志慧 刘春燕 周伟权
受保护的技术使用者：新疆农业大学
技术研发日：2022.04.18
技术公布日：2022/7/4
