一种猪δ冠状病毒中和性单克隆抗体及其应用

allin2025-02-07  74


本发明涉及一种猪δ冠状病毒中和性单克隆抗体及其应用,本发明属于生物。


背景技术:

1、猪δ冠状病毒(porcine deltacoronavirus,pdcov)是近年来新发现的一种冠状病毒,该病毒引起仔猪肠道感染,发生腹泻性疾病。该病的主要表现是感染仔猪体温升高、精神沉郁、呕吐、水样腹泻和严重脱水,感染后死亡率可达30%。pdcov以感染5~14日龄哺乳仔猪为主,发病仔猪主要表现为急性水样腹泻,并出现厌食、精神沉郁、行走蹒跚、呕吐以及脱水,严重者可致死亡。对发病仔猪进行剖检可以观察到胃内充满凝乳呈胀气状,小肠肠壁变薄呈透明样,肠管内部充满黄色液体,肠系膜上出现细小的出血点。有研究发现除了出现肠道病变,pdcov感染还可以引起间质性肺炎,因此推测该病毒可能具有多系统传播的特性。

2、中和抗体在预防和治疗病毒感染过程中扮演着至关重要的角色。它们通过识别并结合病毒表面的特定蛋白,阻止病毒与宿主细胞受体结合,从而防止病毒进入细胞内进行复制和扩散。这一机制不仅减少了病毒感染,还能显著降低感染引起的疾病症状。因此获得一株pdcov中和活性的单克隆抗体,对于pdcov的防治具有重要意义。


技术实现思路

1、本发明的目的在提供一种具有pdcov中和活性的单克隆抗体及其应用。

2、为了达到上述目的,本发明采用了以下技术手段:

3、本发明以纯化的pdcov免疫balb/c小鼠,利用间接elisa筛选得到一株单克隆抗体,命名为3h3。ifa(间接免疫荧光检测)结果显示,3h3与pdcov发生特异性反应,并且能够有效中和pdcov,使其失去感染细胞的能力。经鉴定3h3单抗亚类为igg1,轻链为κ链。利用pcr扩增抗体基因,经测序获得抗体序列。

4、本发明的一种猪δ冠状病毒中和性单克隆抗体,其特征在于,所述的中和抗体包括重链可变区和轻链可变区,所述的重链可变区的氨基酸序列如seq id no.1所示,所述的轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.2所示。

5、一种编码所述的猪δ冠状病毒中和抗体的多核苷酸,所述的多核苷酸包括分别编码重链和轻链可变区的多核苷酸,其中,编码重链可变区的多核苷酸的序列如seq id no.3所示,编码轻链可变区的多核苷酸的序列如seq id no.4所示。

6、包含所述的多核苷酸的表达载体、包含所述的多核苷酸或所述的重组载体的宿主细胞也在本发明的保护范围之内。

7、进一步的,本发明还提出了所述的猪δ冠状病毒中和性单克隆抗体、所述的多核苷酸、所述的重组载体或所述的宿主细胞在制备抗猪δ冠状病毒的药物中的应用。

8、以及所述的猪δ冠状病毒中和性单克隆抗体所述的多核苷酸、所述的重组载体或所述的宿主细胞在制备检测猪δ冠状病毒的试剂中的应用。

9、其中,优选的,所述的试剂为双抗体夹心elisa检测试剂。

10、相较于现有技术,本发明的有益效果是:

11、本发明提出了一种针对pdcov的中和性单克隆抗体,经测序得到抗体可变区的序列,实验证明该抗体能够有效中和pdcov,阻断pdcov感染。鉴于该抗体的生物学特性以及中和pdcov的能力,可根据实际需要利用多种表达系统获得该中和抗体,用于治疗pdcov感染药物制备以及一系列pdcov感染的诊断方法的建立,具有广阔的研究价值和应用价值。



技术特征:

1.一种猪δ冠状病毒中和性单克隆抗体,其特征在于,所述的中和抗体包括重链可变区和轻链可变区,所述的重链可变区的氨基酸序列如seq id no.1所示,所述的轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.2所示。

2.一种编码权利要求1所述的猪δ冠状病毒中和抗体的多核苷酸,其特征在于,所述的多核苷酸包括分别编码重链和轻链可变区的多核苷酸,其中,编码重链可变区的多核苷酸的序列如seq id no.3所示,编码轻链可变区的多核苷酸的序列如seq id no.4所示。

3.一种重组载体,其特征在于,包含权利要求2所述的多核苷酸。

4.一种宿主细胞,其特征在于,包含权利要求2所述的多核苷酸或权利要求3所述的重组载体。

5.权利要求1所述的猪δ冠状病毒中和性单克隆抗体、权利要求2所述的多核苷酸、权利要求3所述的重组载体或权利要求4所述的宿主细胞在制备抗猪δ冠状病毒的药物中的应用。

6.权利要求1所述的猪δ冠状病毒中和性单克隆抗体、权利要求2所述的多核苷酸、权利要求3所述的重组载体或权利要求4所述的宿主细胞在制备检测猪δ冠状病毒的试剂中的应用。

7.如权利要求6所述的应用,其特征在于,所述的试剂为双抗体夹心elisa检测试剂。


技术总结
本发明公开了一种猪δ冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)中和性单克隆抗体及其应用,涉及生物技术领域。本发明利用纯化的PDCoV免疫BALB/c小鼠,筛选得到一株猪δ冠状病毒单克隆抗体,经过体外中和试验证明,所述的单克隆抗体对猪δ冠状病毒具有中和活性,能够阻断猪δ冠状病毒感染。利用RT‑PCR的方法获得了该中和抗体的基因序列,经测序获得了其编码的氨基酸序列,所述的猪δ冠状病毒中和性单克隆抗体的重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示,轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明的提出为预防和治疗PDCoV感染提供了一种有效的新途径。

技术研发人员:王丽,乔薪瑗,姜艳平,李佳璇,王亚楠,李一经
受保护的技术使用者:东北农业大学
技术研发日:
技术公布日:2024/10/31
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