本发明属于生物发酵，具体涉及一种降低新霉素发酵中有害杂质的培养基及培养方法。
背景技术：
1、新霉素是由弗氏链霉菌（streptomycesy fradiae）发酵产生的一种氨基糖苷类抗生素,其主要成分有新霉素a、新霉素b、新霉素c三种，其中以新霉素b为主要有效成分，新霉素c、新霉素a为杂质。药典中对新霉素的各个成分含量进行了要求，其中新霉素a的含量要求不大于2%，新霉素c的含量不大于15%。目前的发酵工艺得到的新霉素产品中，新霉素a的含量基本都不会超过标准范围，但是由于新霉素b和新霉素c二者互为立体异构体，且新霉素b是新霉素b合成的必须前体，无法通过技术手段绕过新霉素c。而目前生产新霉素的发酵液中新霉素b的含量一般在70-80%,新霉素c的含量一般在20-25%，超过了药典的规定。
2、检测发现，新霉素b的抗菌活性是新霉素c的60倍，新霉素c几乎无抗菌活性，但其毒性却是新霉素b的300倍，因此，新霉素c被列为主要的受控杂质，因此如何降低新霉素c的含量已经成为目前生产高质量新霉素生产中亟待解决的问题。
3、中国专利cn104558068b公开了一种提取高质量新霉素的方法及所用装置，其通过测量新霉素解析液不同阶段的新霉素b和c的含量，分段收集解析液，然后将新霉素c含量较低的部分进行高质量成品的制备，新霉素c含量偏高的部分制备低质量成品的制备。但工艺较为复杂，且易超声生产成本的增加。
4、中国专利cn107557413b公开了一种提高硫酸新霉素生产质量的方法，其主要是通过在发酵培养过程中添加酵母粉和/或半胱氨酸和/或s-腺苷-l-蛋氨酸和/或硫酸铵和/或硫酸亚铁和/或硫酸镁和/或硫酸锰，得到了新霉素c含量比较低的发酵液，但该方法无形之中增加了硫酸新霉素的生产成本。
5、中国专利cn111394412a公开了一种降低新霉素发酵过程中新霉素c含量的方法，其提供了一种发酵培养基，配方为籼米粉65-75g/l、淀粉酶0.25-0.35g/l、花生饼粉26-30g/l，黄豆饼粉4-6g/l，大豆蛋白胨8-12g/l，葡萄糖15-25g/l，酵母粉6-10g/l，磷酸二氢钾0.3-0.5g/l，硫酸铵5-7g/l，碳酸钙3.5-4.5g/l，消泡剂0.4-0.6g/l，并且在发酵培养过程中分阶段控制溶氧降低新霉素c含量的方法，从而得到效价高、新霉素c含量低的发酵液。但是其对溶氧的控制要求高，且相比较统一控制溶氧量，分阶段控制溶氧得到的发酵液中放罐效价和新霉素b的含量均有所降低，新霉素的含量也保持在10%左右。
6、因此有必要开发一种能在发酵合成过程中直接完成降低新霉素c含量的发酵培养基及培养方法，从而提高新霉素b的收率和产品的质量，降低工艺的成本和复杂程度。
技术实现思路
1、针对上述技术问题，本发明提供一种降低新霉素发酵中有害杂质的培养基及培养方法，在发酵培养基中添加植物蛋白胨，并在发酵培养的中后期采用流加的方式继续补充植物蛋白胨，在保持高效价的同时有效降低了有害杂质——新霉素b的合成，提高了新霉素的生产质量。
2、为了实现上述目的，本发明提供一种降低新霉素发酵中有害杂质的培养基，所述培养基的配方包括以下重量百分数原料：黄豆饼粉3-5%，米粉5-10%，酵母粉0.1-0.5%，氯化钠0.1-1%，碳酸钙0.05-0.5%，硫酸铵0.1-1%，磷酸氢二钠0.01-0.1%，磷酸二氢钾0.003-0.03%，消泡剂0.1-1%，α-淀粉酶0.01-0.1%，玉米浆0.1-1%，植物蛋白胨0.1-1%，余量为水。
3、优选的，所述培养基的配方包括以下重量百分数原料：黄豆饼粉3%，米粉5%，酵母粉0.1%，氯化钠0.3%，碳酸钙0.35%，硫酸铵0.4%，磷酸氢二钠0.05%，磷酸二氢钾0.015%，消泡剂0.1%，α-淀粉酶0.02%，玉米浆0.4%，植物蛋白胨0.1%。
4、进一步优选的，所述植物蛋白胨为小麦蛋白胨。
5、进一步优选的，所述消泡剂为有机硅消泡剂；更进一步的，有机硅消泡剂为硅油。
6、本发明还提供一种降低新霉素发酵中有害杂质的培养方法，包括以下步骤：
7、（1）孢子悬浮液培养：将砂土孢子经密封、干燥、培养后制得斜面孢子悬浮液；
8、（2）种子液培养：将斜面孢子悬浮液置于种子罐中，培养28-48h得到种子液；
9、（3）初期发酵培养：将种子液置于上述发酵培养基中，发酵培养；
10、（4）中后期发酵培养：发酵培养60h后流加植物蛋白胨，培养至100-160h得到发酵液；
11、优选的，步骤（2）中的培养温度为35±1℃。
12、优选的，步骤（3）所述的发酵温度为35±1℃，罐压为0.02-0.06mpa；发酵过程中根据还原糖浓度不断上述的培养基保持还原糖的浓度为0.8-1.2g/100ml，从而保证发酵的碳源供给。
13、优选的，步骤（4）所述的流加水解植物蛋白胨的浓度为0.5-2%，流加速度为200l/h。
14、进一步优选的，所述的植物蛋白胨为小麦蛋白胨。
15、本发明的有益效果在于：
16、1、在发酵培养基中添加了植物蛋白胨——小麦蛋白胨，并在发酵的中后期采用流加的方式进一步补充小麦蛋白胨，有效的促进了新霉素b的合成，在发酵合成阶段直接完成了降低新霉素c含量，提高了新霉素发酵液的质量，从而减轻了后续提取、精制工艺过程的压力、成本和工艺要求，提高了新霉素产品的收率和质量。
17、2、本发明仅通过植物蛋白胨用法用量的调控实现了对新霉素c和新霉素b含量的调控，既能保证有充足的新霉素c作为前体供给新霉素b的合成，又能保证在发酵结束时新霉素c的含量保持在10%以下，处于一个较低的水平，突破了现有认知中难以通过单因素变量的改造而同时实现新霉素b产量的升高和新霉素c含量的降低的观点。
18、3、本发明的培养基及培养方法可以与高产菌株、高效提取工艺相结合，进一步提高新霉素产品的质量。
19、4、本发明的培养基配方简单、培养方法简单易控，且产品效价高、新霉素b含量高，可以进行大规模的推广应用。
1.一种降低新霉素发酵中有害杂质的培养基，其特征在于：所述培养基的配方包括以下重量百分数原料：黄豆饼粉3-5%，米粉5-10%，酵母粉0.1-0.5%，氯化钠0.1-1%，碳酸钙0.05-0.5%，硫酸铵0.1-1%，磷酸氢二钠0.01-0.1%，磷酸二氢钾0.003-0.03%，消泡剂0.1-1%，α-淀粉酶0.01-0.1%，玉米浆0.1-1%，植物蛋白胨0.1-1%，余量为水。
2.根据权利要求1所述的一种降低新霉素发酵中有害杂质的培养基，其特征在于：所述培养基的配方包括以下重量百分数原料：黄豆饼粉3%，米粉5%，酵母粉0.1%，氯化钠0.3%，碳酸钙0.35%，硫酸铵0.4%，磷酸氢二钠0.05%，磷酸二氢钾0.015%，消泡剂0.1%，α-淀粉酶0.02%，玉米浆0.4%，植物蛋白胨0.1%。
3.根据权利要求1或2所述的一种降低新霉素发酵中有害杂质的培养基，其特征在于：所述植物蛋白胨为小麦蛋白胨。
4.根据权利要求1或2所述的一种降低新霉素发酵中有害杂质的培养基，其特征在于：所述消泡剂为有机硅消泡剂。
5.一种降低新霉素发酵中有害杂质的培养方法，其特征在于：包括以下步骤：
6.根据权利要求5所述的一种降低新霉素发酵中有害杂质的培养方法，其特征在于：步骤（2）中的培养温度为35±1℃。
7.根据权利要求4所述的一种降低新霉素发酵中有害杂质的培养方法，其特征在于：步骤（3）所述的发酵温度为35±1℃，罐压为0.02-0.06mpa；发酵过程中根据还原糖浓度不断补充如权利要求1-3任一项所述的培养基。
8.根据权利要求5所述的一种降低新霉素发酵中有害杂质的培养方法，其特征在于：步骤（4）所述的流加水解植物蛋白胨的浓度为0.5-2%，流加速度为200l/h。
