本发明涉及药物评价，具体涉及一种白益母草提取物对痛经动物模型的药效及药效物质基础评价方法。
背景技术：
1、痛经是妇科常见的病症之一，尤其在我国北方地区较为常见，严重影响了女性的生活质量。痛经分为原发性痛经和继发性痛经，其中寒凝血瘀型痛经是原发性痛经的一种常见证型。通常采取药物治疗和非药物治疗的手段，目前，西医治疗痛经主要应用非甾体类抗炎药、钙离子拮抗剂、镇静剂、解痉剂、避孕药等。也采用不同途径给药治疗并对重症和顽固性患者进行手术治疗。但是，这些药物只能短期缓解临床症状，疗效难以持久。手术治疗费用较大，且术后易发生盆腔粘连、复发等并发症。目前，随着人们对化学合成药物的不良反应以及治疗疾病的局限性的深入认识，越来越多的患者倾向于传统医药治疗；中医常用的治疗药物包括温经散寒药、活血化瘀药、调理冲任药等。温经散寒药如当归、川芎、桂枝、干姜等，能够温经散寒，促进血液循环；活血化瘀药如赤芍、丹参、桃仁、红花等，能够活血化瘀，改善血行不畅；调理冲任药如熟地黄、白芍、川芎等，能够调理冲任，缓解痛经。非药物治疗也是治疗寒凝血瘀型原发性痛经的有效方法。其中包括：针灸治疗、拔罐治疗、按摩治疗以及饮食调养。
2、白益母草为蒙古族特有药材，具有活血调经之功效，主治月经不调、产后腹痛、妇科炎症等，被蒙医视为疮疾圣药。然而目前国内外尚无关于白益母草提取物药效及药效物质评价的指导原则。因此，亟需本领域技术人员提出一种白益母草提取物对痛经动物模型的药效及药效物质基础评价方法。
技术实现思路
1、本发明针对上述技术问题，提供了一种白益母草提取物对痛经动物模型的药效及药效物质基础评价方法。
2、为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案如下：
3、本发明的一种白益母草提取物对痛经动物模型的药效评价方法，通过构建动物模型对白益母草提取物在模拟寒凝血瘀型原发性痛经进行药效的分析。
4、进一步地，所述构建动物模型包括：
5、s1:选择生长周期6周，体重150±25g，spf级的雌性sd大鼠若干，采用标准方式进行饲养，保持清洁级的饲养环境，光线12小时明暗自动转换，室内温度22±2℃，相对湿度40%±5%；
6、s2：适应性饲养一周后，从健康的雌性sd大鼠中随机挑选七分之一作为正常对照组，其余的作为实验组，实验组的雌性sd大鼠在0±1℃冰水浴条件下20min结合苯甲酸雌二醇注射液，每天一次，连续12天；正常对照组每日腹腔注射同等剂量生理盐水；
7、s3：注射苯甲酸雌二醇的第7天开始连续6天进行分组干预，分别为模型组、布洛芬阳性对照组、益母草颗粒对照组、白益母草低剂量组、白益母草中剂量组和白益母草高剂量组，从第7天开始对布洛芬阳性对照组和益母草颗粒对照组组内雌性sd大鼠分别按照0.063g/kg/d、3.15g/kg/d剂量灌胃布洛芬，益母草颗粒，对白益母草低剂量组、白益母草中剂量组和白益母草高剂量组组内雌性sd大鼠分别按照1.05g/kg/d、2.10g/kg/d、4.20g/kg/d白益母草剂量灌胃白益母草提取物；模型组每日灌胃蒸馏水5ml/kg；第13天对各实验组雌性sd大鼠腹腔注射催产素1.0ml/kg，构建寒凝血瘀原发性痛经雌性sd大鼠模型；
8、s4：30min内观察指标测定。
9、更进一步地，所述指标测定包括检测全血粘度、血浆粘度及红细胞压积；称取雌性sd大鼠子宫、卵巢及肾脏组织质量，并计算脏器指数；使用酶联免疫吸附试验（elisa）测定雌性sd大鼠血清中pgf2α、β-ep、prog水平。
10、进一步地，所述白益母草提取物的提取包括：将白益母草药材放入粉碎机粉碎过3号筛，取粉末以1：25的比例加入70%乙醇加热回流提取2小时，旋转蒸发乙醇后放入烘箱，所述烘箱温度为60-70℃，烘干时间为24h，48h冻干，冻干后即得白益母草冻干粉。
11、一种白益母草提取物对痛经动物模型的药效物质基础评价方法，通过构建动物模型对白益母草提取物在模拟寒凝血瘀型原发性痛经进行药效物质基础的分析。
12、进一步地，所述构建动物模型包括：
13、s1:选择生长周期为8周，体重180±25g，spf级的雌性sd大鼠，采用标准方式进行饲养，保持清洁级的饲养环境，光线12小时明暗自动转换，室内温度22±2℃，相对湿度40%±5%；
14、s2：制备体外供试品：将白益母草提取物冻干粉精确称取100±5mg样品至2 ml 离心管中，加入一颗直径6mm的研磨珠；加入400µl提取液，所述提取液包含四种内标，所述四种内标包括l-2氯苯丙氨酸、palmitoyl-l-carnitine(n-methy-d3）、cholic acid-d4、l-phenylalanine-d5；冷冻组织研磨仪研磨6min；低温超声提取30 min；将样品静置于-20℃的环境30 min；13000g 4℃离心15min，移取上清液至带内插管的进样小瓶中上机分析；且每个样本分别移取20µl上清液，混合后作为质控样本；
15、s3：采集生物样品：适应性饲养一周后，建立寒凝血瘀型原发性痛经雌性sd大鼠模型，选取二分之一雌性sd大鼠作为给药组，其余的作为空白模型组，给药组在0±1℃冰水浴条件下20min结合苯甲酸雌二醇注射液，每天一次，连续12天，第7天开始每只雌性sd大鼠以4.20g/kg/d白益母草剂量灌胃给药白益母草提取物，连续7天，最后一次给药1h后腹主动脉取血5ml/只；将白益母草冻干粉溶解于纯水中，灌胃给药于雌性sd大鼠，给药60min后经10%水合氯醛麻醉，腹主动脉取血5ml，置肝素钠抗凝管中，于4℃下5000r·min-1离心10min，分离血浆，-80℃冻存备用；空白模型组仅在0±1℃冰水浴条件下20min结合苯甲酸雌二醇注射液，每天一次，连续7天，眼眶取血1ml/只；
16、s4：制备生物样品并检测：分别移取给药组及空白模型组雌性sd大鼠血浆1ml,涡旋混匀，加入9ml甲醇溶液，涡旋混匀4min，于4℃下12000r·min-1离心10min，取上清液置旋转蒸发仪减压蒸干，残渣加0.3ml甲醇复溶，涡旋2min后，将复溶液移至1.5mlep管中，于4℃下12000r·min-1离心10min，取上清液检测分析。
17、更进一步地，所述s2中提取液为体积比为4：1的甲醇和水，研磨条件为-10℃，频率为50hz，超声提取的温度为5℃，频率为40khz。
18、更进一步地，所述s3中给药前12h禁食不禁水。
19、与现有技术相比，本发明的有益效果：
20、本发明通过构建雌性sd大鼠动物模型对白益母草提取物在模拟寒凝血瘀型原发性痛经进行药效及药效物质基础的分析，揭示了白益母草提取物寒凝血瘀型原发性痛经模型雌性sd大鼠血清prog,pgf2α,β-ep含量具有调节作用，也可以改善有关组织病理变化而起到减轻痛经的效果，验证了白益母草给药后的体内药效；并对白益母草提取物原型入血成分进行研究，进一步阐明了其药效物质基础。
1.一种白益母草提取物对痛经动物模型的药效评价方法，其特征在于：构建动物模型对白益母草提取物在模拟寒凝血瘀型原发性痛经进行药效的分析。
2.根据权利要求1所述的一种白益母草提取物对痛经动物模型的药效评价方法，其特征在于：所述构建动物模型包括：
3.根据权利要求2所述的一种白益母草提取物对痛经动物模型的药效评价方法，其特征在于：所述指标测定包括检测全血粘度、血浆粘度及红细胞压积；称取雌性sd大鼠子宫、卵巢及肾脏组织质量，并计算脏器指数；使用elisa测定雌性sd大鼠血清中pgf2α、β-ep、prog水平。
4.根据权利要求1所述的一种白益母草提取物对痛经动物模型的药效评价方法，其特征在于：所述白益母草提取物的提取包括：将白益母草药材放入粉碎机粉碎过3号筛，取粉末以1：25的比例加入70%乙醇加热回流提取2小时，旋转蒸发乙醇后放入烘箱，所述烘箱温度为60-70℃，烘干时间为24h，48h冻干。
5.一种白益母草提取物对痛经动物模型的药效物质基础评价方法，其特征在于：构建动物模型对白益母草提取物在模拟寒凝血瘀型原发性痛经进行药效物质基础的分析。
6.根据权利要求5所述的一种白益母草提取物对痛经动物模型的药效物质基础评价方法，其特征在于：所述构建动物模型包括：
7.根据权利要求6所述的一种白益母草提取物对痛经动物模型的药效物质基础评价方法，其特征在于：所述s2中提取液为体积比为4：1的甲醇和水，研磨条件为-10℃，频率为50hz，超声提取的温度为5℃，频率为40khz。
8.根据权利要求6所述的一种白益母草提取物对痛经动物模型的药效物质基础评价方法，其特征在于：所述s3中给药前12h禁食不禁水。
