本发明属于发酵工程领域,本发明涉及一种尿酸氧化酶生产菌株的发酵培养基及发酵方法。
背景技术:
1、尿酸氧化酶是(urate oxidase,uox)是尿酸代谢途径中的重要功能酶,能够氧化尿酸转化为尿囊素和过氧化氢。但是由于人类进化过程中的多次基因突变,导致人体内缺乏具有生物活性的尿酸氧化酶,因此只能以尿酸作为嘌呤代谢的终产物。尿酸(uric acid)是生物体内嘌呤代谢的产物,微溶于水。若因饮食不当造成人体内尿酸水平过高,则易在关节等组织处沉积形成晶体,进而引发高尿酸血症、痛风等一系列疾病。尿酸氧化酶能够高效降低血液中尿酸水平,是治疗高尿酸血症、痛风等疾病的重要临床药物。除此之外,尿酸氧化酶还可以通过尿酸氧化酶-过氧化物酶偶联法测定血尿酸含量,达到检测、预防相关疾病的效果。
2、目前我国对于尿酸氧化酶类的药物完全依赖于进口,相关药物价格昂贵,且国内研究尚不成熟。因此,开发新的尿酸氧化酶的菌种资源,优化其生产条件,能为国产尿酸氧化酶产业化生产的实现奠定坚实基础,具有广阔的应用前景与经济效益。
技术实现思路
1、为了克服现有技术的不足,本发明提供一种尿酸氧化酶生产菌株的发酵培养基及发酵方法,本发明提供的发酵培养基及发酵方法对尿酸氧化酶生产菌株进行发酵培养,使尿酸氧化酶的酶活力达到约48.7u/ml,比现有尿酸氧化酶发酵培养基发酵所得的酶活力提高了89.5%。
2、本发明的上述目的是通过以下技术方案实现的:
3、一种尿酸氧化酶生产菌株的发酵培养基,按重量百分比计,包括:尿酸0.5%~1%,酵母膏0.5%~1.5%,k2hpo40.1%~0.2%,kh2po40.02%~0.04%,mgso40.03%~0.06%。
4、具体的,上述发酵培养基配置后需使用盐酸溶液调节ph至7~9。
5、具体的,本发明所述的尿酸氧化酶生产菌株为迈索尔谷氨酸杆菌(arthrobactermysorens)。购买于辽宁省海洋微生物工程技术研究中心。
6、本发明还提供了一种发酵培养基应用在尿酸氧化酶生产菌株的发酵方法,包含如下步骤:
7、①制备发酵培养基;
8、②将尿酸氧化酶生产菌株接种于种子培养基中,在15℃~25℃条件下培养24h~36h,得到种子液;
9、所述种子培养基与发酵培养基相同;
10、③取种子液按1%~3%接种量接种于100ml发酵培养基中,在15°c~25℃条件下培养36h~48h;
11、④取发酵液在冰浴条件下超声波破碎并离心,得到初步纯化的粗酶液;
12、⑤按产物生成法测定粗酶液的酶活力。
13、通过发酵培养基和发酵方法,尿酸氧化酶发酵所得粗酶液的酶活力约为45u/ml~50u/ml。
14、本发明与现有技术相比的有益效果是:
15、本发明提供的发酵培养基与发酵方法能够有效提高迈索尔谷氨酸杆菌产尿酸氧化酶的能力,比现有发酵培养基发酵所得尿酸氧化酶活性约提升了75%~94%。
16、本发明提供的发酵培养基及发酵方法对尿酸氧化酶生产菌株进行发酵培养,使尿酸氧化酶的酶活力达到约48.7u/ml,比现有尿酸氧化酶发酵培养基发酵所得的酶活力提高了89.5%。
1.一种尿酸氧化酶生产菌株的发酵培养基,其特征是,按重量百分比计,包括:尿酸0.5%~1%,酵母膏0.5%~1.5%,k2hpo40.1%~0.2%,kh2po40.02%~0.04%,mgso40.03%~0.06%。
2.如权利要求1所述的一种尿酸氧化酶生产菌株的发酵培养基,其特征是,发酵培养基配置后需使用盐酸溶液调节ph至7~9。
3.如权利要求1所述的一种尿酸氧化酶生产菌株的发酵培养基,其特征是,尿酸氧化酶生产菌株为迈索尔谷氨酸杆菌arthrobacter mysorens。
4.如权利要求1-3任一项所述的发酵培养基应用在尿酸氧化酶生产菌株的发酵方法,其特征是,包含如下步骤:
5.如权利要求4所述的发酵方法,其特征是,所述种子培养基与发酵培养基相同。