本发明涉及蛋白质工程技术和基因工程，尤其是涉及一种β-半乳糖苷酶突变体及其制备方法和应用。
背景技术：
1、如下陈述仅提供与本发明有关的背景信息，而不必然地构成现有技术。
2、β-半乳糖苷酶(β-gal)在食品行业有着广泛的应用，根据食品添加剂使用卫生标准gb 2760，黑曲酶来源的β-半乳糖苷酶可以作为食品添加剂进行使用。β-半乳糖苷酶的主要作用包括：
3、(1)缓解乳糖不耐症问题。
4、(2)生产低聚半乳糖：低聚半乳糖作为一种益生因子调理肠胃功能、可被肠道内青春双歧杆菌等八种益生菌所利用，抑制有害菌的生长、维持肠道菌群生态平衡、减少肠易激综合症的发生，起到提高人体免疫力的作用。
5、(3)改良乳制品：改善了风味口感，拓宽乳清的使用范围。
6、基于硝基苯-β-d-半乳糖苷作为底物的分光光度法是目前使用最广泛且最权威的β-半乳糖苷酶活性测定方法。aoac发布的方法(aoac official method 998.04)规定在30℃、ph 6.5时每分钟催化转化一个微摩尔邻硝基苯-β-d-半乳糖苷(onpg)的酶量为一个活力单位。gb/t33409—2016β-半乳糖苷酶活性检测方法分光光度法规定了β-半乳糖苷酶活性单位为在规定的反应条件下，每分钟催化转化一个微摩尔邻硝基苯-β-d-半乳糖苷的酶量。如果能将β-半乳糖苷酶催化转化onpg的酶活性提升几倍甚至数十倍，则说明β-半乳糖苷酶酶活显著提高。获得酶活更高的β-半乳糖苷酶能够显著降低生产原料包括β-半乳糖苷酶的产品的生产成本。
7、有鉴于此，特提出本发明。
技术实现思路
1、本发明的目的在于提供一种活性显著提高的β-半乳糖苷酶突变体。
2、为解决上述技术问题，本发明特采用如下技术方案：
3、第一方面，提供了一种β-半乳糖苷酶突变体，该β-半乳糖苷酶突变体包含如下突变位点：f359m、i260v、m280l、f66y和n377d。
4、第二方面，提供了第一方面β-半乳糖苷酶突变体的制备方法，包括使用细胞表达编码所述β-半乳糖苷酶突变体的基因。
5、第三方面，还提供了第一方面的β-半乳糖苷酶突变体，或第二方面的制备方法在(ⅰ)～(ⅲ)任一项中的应用：
6、(ⅰ)制备用于减轻、缓解和/或治疗乳糖不耐症的药物；
7、(ⅱ)生产低聚半乳糖；
8、(ⅲ)制备乳制品。
9、第四方面，还提供了一种用于减轻、缓解和/或治疗乳糖不耐症的药物，所述药物含有第一方面的β-半乳糖苷酶突变体。
10、与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
11、本发明通过对β-半乳糖苷酶进行多点突变改造得到其突变体，较改造前，β-半乳糖苷酶的活性提升可达4.48倍，vmax可提升至3.62倍，km可提升至1.44倍。为制备用于减轻、缓解和/或治疗乳糖不耐症的药物，生产低聚半乳糖和制备乳制品提供了更为高效的β-半乳糖苷酶。
1.一种β-半乳糖苷酶突变体，其特征在于，包含如下突变位点：f359m、i260v、m280l、f66y和n377d。
2.根据权利要求1所述的β-半乳糖苷酶突变体，其特征在于，所述β-半乳糖苷酶突变体由saccharolobus solfataricus来源的β-半乳糖苷酶突变得到；
3.根据权利要求2所述的β-半乳糖苷酶突变体，其特征在于，所述β-半乳糖苷酶突变体由氨基酸序列如seq id no.1所示的β-半乳糖苷酶突变得到。
4.根据权利要求1～3任一项所述的β-半乳糖苷酶突变体，其特征在于，所述β-半乳糖苷酶突变体以邻硝基苯-β-d-半乳糖苷为反应底物，vmax至少为1.5nmol/min；和/或，km至少为1.5mm。
5.根据权利要求1～3任一项所述的β-半乳糖苷酶突变体，其特征在于，氨基酸序列如seq id no.2所示。
6.根据权利要求1～3任一项所述的β-半乳糖苷酶突变体，其特征在于，由原核表达系统表达或由真核表达系统表达；
7.权利要求1～6任一项所述的β-半乳糖苷酶突变体的制备方法，其特征在于，包括使用细胞表达编码所述β-半乳糖苷酶突变体的基因。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，由原核表达系统或由真核表达系统表达编码所述β-半乳糖苷酶突变体的基因；
9.权利要求1～6任一项所述的β-半乳糖苷酶突变体，或权利要求7或8所述的制备方法在(ⅰ)～(ⅲ)任一项中的应用：
10.用于减轻、缓解和/或治疗乳糖不耐症的药物，其特征在于，含有权利要求1～6任一项所述的β-半乳糖苷酶突变体。
