本申请涉及免疫检测试剂，例如涉及一种高灵敏度游离前列腺特异性抗原检测试剂盒及其制备方法。
背景技术：
1、前列腺特异抗原(prostate specific antigenpsa)是由前列腺上皮细胞分泌产生，其分子量约34000，大多数可随精液排出属激肽酶家族蛋白存在于前列腺组织和精液中正常人血清中含量极微。前列腺特异抗原在血清中主要以三种形式存在：①游离前列腺特异抗原(fpsa)占总前列腺特异抗原(tpsa)的10％～30％；②前列腺特异抗原与α1-抗糜蛋白酶结合形成的复合物(psa-act)；③前列腺特异抗原与α2-巨球蛋白酶结合形成的复合物(psa-α2m)。后两者又称复合前列腺特异抗原(cpsa)。前列腺特异抗原的主要生理功能是可防止精液凝固，具有极高的组织器官特异性是目前诊断前列腺癌的首选标志物。
2、通常情况下，tpsa在血清中水平极低。发生前列腺疾病时，tpsa分泌量显著增加。前列腺癌或炎症等导致前列腺管原有的完整性遭到破坏，大量tpsa进入到血液中，故tpsa在血清中水平越高提示患前列腺癌的风险越大。但tpsa无肿瘤特异性，其血清水平可受到前列腺穿刺、导尿管刺激、前列腺按摩等因素的影响，单纯检测血清tpsa水平容易出现假阳性结果，且无法有效区分前列腺良性病变与前列腺癌。血清tpsa水平处于4-10ng/ml的诊断灰区时诊断性不强，但多数患者血清tpsa水平处于该范围内，而此时fpsa/tpsa值能有效鉴别前列腺癌与前列腺良性疾病。fpsa/tpsa值可以提高tpsa诊断前列腺癌的特异度，尤其对血清tpsa水平处于4-10ng/ml时的意义重大。因此准确测定样本中fpsa浓度尤为重要。
3、目前市面上检测fpsa主要为化学发光法和免疫荧光法试剂盒，只有少部分为胶乳免疫比浊法试剂盒，原因是该项目参考范围为正常人血清中＜0.94ng/ml，这样的灵敏度在胶乳免疫比浊法这种方法学试剂盒上已接近理论极限，往往会出现灵敏度不足，导致低值样本测量准确度不高的问题，影响对tpsa诊断灰区fpsa/tpsa比值判断的准确性。
技术实现思路
1、为了对披露的实施例的一些方面有基本的理解，下面给出了简单的概括。所述概括不是泛泛评述，也不是要确定关键/重要组成元素或描绘这些实施例的保护范围，而是作为后面的详细说明的序言。
2、本公开实施例提供了一种高灵敏度游离前列腺特异性抗原检测试剂盒及其制备方法，以提高试剂在检测低浓度样本时的灵敏度和精密度。
3、一种高灵敏度游离前列腺特异性抗原检测试剂盒，包括试剂r1和试剂r2，其特征在于，所述试剂r1包括：第一缓冲液、促凝剂、第一表面活性剂、第二表面活性剂、第三表面活性剂、抗干扰剂和抗腐蚀剂；所述试剂r2包括：第二缓冲液、包被有鼠抗人fpsa单克隆抗体的胶乳颗粒、稳定剂和抗腐蚀剂。
4、在一个实施例中，所述第一缓冲液包括十二水合磷酸氢二钠和二水合磷酸二氢钠；所述促凝剂包括氯化钠和peg8000；所述抗干扰剂包括吐温20和阻断剂；所述抗腐蚀剂包括proclin 300。
5、在一个实施例中，所述第二缓冲液包括甘氨酸；所述稳定剂包括bsa和蔗糖。
6、在一个实施例中，所述第一表面活性剂为非离子表面活性剂，包括脂肪醇聚氧乙烯醚、乙基苯基聚乙二醇、烷基酚聚氧乙烯醚中的一种；所述第二表面活性剂为阳离子表面活性剂，包括十六烷基二甲基氯化铵，十八烷基三甲基氯化铵、阳离子瓜尔胶、阳离子泛醇、阳离子硅油、十二烷基二甲基氧化胺中的一种；所述第三表面活性剂为阴离子表面活性剂，包括十二烷基硫酸钠、十六烷基硫酸钠、十八烷基硫酸钠、二辛基琥珀酸磺酸钠、十二烷基苯磺酸钠中的一种。
7、在一个实施例中，每1000毫升试剂r1中含十二水合磷酸氢二钠17.49g，二水合磷酸二氢钠4.87g，氯化钠2g，第一表面活性剂3g，第二表面活性剂1g，第三表面活性剂1g，peg8000共15g，阻断剂5mg，proclin3001ml，其余为超纯水。
8、在一个实施例中，每1000毫升试剂r2中含甘氨酸1.88g，包被有鼠抗人fpsa单克隆抗体的胶乳颗粒0.8g，bsa共2g，蔗糖30g，proclin300共1ml，其余为超纯水。
9、一种高灵敏度游离前列腺特异性抗原检测试剂盒的制备方法，包括试剂r1和试剂r2的制备步骤，所述试剂r1的制备步骤包括：向纯水中加入十二水合磷酸氢二钠17.49g，二水合磷酸二氢钠4.87g，氯化钠2g，第一表面活性剂3g，第二表面活性剂1g，第三表面活性剂1g，peg8000共15g，阻断剂5mg，proclin3001ml后充分搅拌并用纯水定容至1000ml。
10、一种高灵敏度游离前列腺特异性抗原检测试剂盒的制备方法，包括试剂r1和试剂r2的制备步骤，所述试剂r2的制备步骤包括：将胶乳微球与mes缓冲液混合后加入edc混匀进行活化，再加入fpsa抗体进行偶联后加入bsa封闭，封闭结束后离心换液为储存液并超声分散。
11、本公开实施例提供的一种高灵敏度游离前列腺特异性抗原检测试剂盒及其制备方法，可以实现以下技术效果：
12、在试剂r1中添加组合的第一表面活性剂、第二表面活性剂和第三表面活性剂，降低样本自身的脂肪颗粒、乳糜带来的干扰，提高了试剂在检测低浓度样本时的灵敏度和精密度。
13、以上的总体描述和下文中的描述仅是示例性和解释性的，不用于限制本申请。
1.一种高灵敏度游离前列腺特异性抗原检测试剂盒，包括试剂r1和试剂r2，其特征在于，所述试剂r1包括：第一缓冲液、促凝剂、第一表面活性剂、第二表面活性剂、第三表面活性剂、抗干扰剂和抗腐蚀剂；所述试剂r2包括：第二缓冲液、包被有鼠抗人fpsa单克隆抗体的胶乳颗粒、稳定剂和抗腐蚀剂。
2.根据权利要求1所述的高灵敏度游离前列腺特异性抗原检测试剂盒，其特征在于，所述第一缓冲液包括十二水合磷酸氢二钠和二水合磷酸二氢钠；所述促凝剂包括氯化钠和peg8000；所述抗干扰剂包括吐温20和阻断剂；所述抗腐蚀剂包括proclin 300。
3.根据权利要求1所述的高灵敏度游离前列腺特异性抗原检测试剂盒，其特征在于，所述第二缓冲液包括甘氨酸；所述稳定剂包括bsa和蔗糖。
4.根据权利要求1所述的高灵敏度游离前列腺特异性抗原检测试剂盒，其特征在于，所述第一表面活性剂为非离子表面活性剂，包括脂肪醇聚氧乙烯醚、乙基苯基聚乙二醇、烷基酚聚氧乙烯醚中的一种；所述第二表面活性剂为阳离子表面活性剂，包括十六烷基二甲基氯化铵，十八烷基三甲基氯化铵、阳离子瓜尔胶、阳离子泛醇、阳离子硅油、十二烷基二甲基氧化胺中的一种；所述第三表面活性剂为阴离子表面活性剂，包括十二烷基硫酸钠、十六烷基硫酸钠、十八烷基硫酸钠、二辛基琥珀酸磺酸钠、十二烷基苯磺酸钠中的一种。
5.根据权利要求2所述的高灵敏度游离前列腺特异性抗原检测试剂盒，其特征在于，每1000毫升试剂r1中含十二水合磷酸氢二钠17.49g，二水合磷酸二氢钠4.87g，氯化钠2g，第一表面活性剂3g，第二表面活性剂1g，第三表面活性剂1g，peg8000共15g，阻断剂5mg，proclin3001ml，其余为超纯水。
6.根据权利要求3所述的高灵敏度游离前列腺特异性抗原检测试剂盒，其特征在于，每1000毫升试剂r2中含甘氨酸1.88g，包被有鼠抗人fpsa单克隆抗体的胶乳颗粒0.8g，bsa共2g，蔗糖30g，proclin300共1ml，其余为超纯水。
7.一种高灵敏度游离前列腺特异性抗原检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述试剂r1的制备步骤包括：向纯水中加入十二水合磷酸氢二钠17.49g，二水合磷酸二氢钠4.87g，氯化钠2g，第一表面活性剂3g，第二表面活性剂1g，第三表面活性剂1g，peg8000共15g，阻断剂5mg，proclin3001ml后充分搅拌并用纯水定容至1000ml。
8.一种高灵敏度游离前列腺特异性抗原检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述试剂r2的制备步骤包括：将胶乳微球与mes缓冲液混合后加入edc混匀进行活化，再加入fpsa抗体进行偶联后加入bsa封闭，封闭结束后离心换液为储存液并超声分散。
