本发明涉及动物组织蛋白提取优化，具体为一种动物组织蛋白提取优化方法。
背景技术：
1、动物组织形态功能类似的细胞和细胞间质组成的多细胞动物的基本结构；分为上皮组织、结缔组织、肌肉组织和神经组织4种；它们以不同的比例互相联系、相互依存，形成动物的各种器官和系统，以完成各种生理活动。动物组织是在胚胎期有原始的内、中、外三个胚胎层分化而来的；动物组织可根据其起源、形态结构和功能上的共同特性，分为上皮组织、结缔组织、肌组织和神经组织四大类。
2、动物的身体组织中含有大量的动物蛋白，这些动物蛋白可以被人体很好的吸收，同时这些动物蛋白对动物身体状况的研究也有一定的帮助，在动物蛋白从动物组织中提取后，通常以western blot方式对动物组织蛋白样品中的某种蛋白进行检测。
3、western blot在日常实验中广泛使用，且普遍存在一个问题：动物组织提取蛋白做wb时，显影条带不理想，甚至模糊，如何提高动物组织提取蛋白做wb时的显影带的效果，成为现今亟需解决的问题，为此，我们提出一种动物组织蛋白提取优化方法。
技术实现思路
1、(一)解决的技术问题
2、针对现有技术的不足，本发明提供了一种动物组织蛋白提取优化方法，具备通过对提取后的动物组织蛋白初液进行纯化和浓缩，从而使获取到的动物组织蛋白中的杂物更少；对检测步骤进行优化，从而使所提取的动物组织蛋白检测显影条更加的清晰，有助于快速对目标蛋白情况进行了解分析，提高检测效果的准确性等优点，解决了动物组织提取蛋白做wb时，显影条带不理想，甚至模糊的问题。
3、(二)技术方案
4、为实现上述通过对提取后的动物组织蛋白初液进行纯化和浓缩，从而使获取到的动物组织蛋白中的杂物更少；对检测步骤进行优化，从而使所提取的动物组织蛋白检测显影条更加的清晰，有助于快速对目标蛋白情况进行了解分析，提高检测效果的准确性目的，本发明提供如下技术方案：
5、一种动物组织蛋白提取优化方法，包括以下步骤：
6、s1、取一小块所需动物组织置于蛋白裂解液中；
7、s2、使用剪刀充分剪碎，后冰水浴超声裂解；
8、s3、将裂后的组织液放入到离心设备离心操作，取上层清液；
9、s4、重复步骤s3中的操作，直到获得蛋白混合物；
10、s5、对获取到的蛋白混合物分别进行纯化和浓缩处理，获得最终的动物组织蛋白提取物；
11、s6、从步骤s5中获取到的动物组织蛋白提取物中抽取部分，进行检测、分析；
12、s7、将剩余获取到的动物组织蛋白提取物进行低温存储
13、优选的，所述选取的动物组织样品不易过少，甚至可以轻度饱和，通过剪刀剪成小块，再进行冰水浴超声裂解。
14、优选的，所述取适当量的ripa裂解液，在使用前数分钟内加入pmsf，两者比例为ripa：pmsf＝100：1，蛋白酶加双倍或者每间隔一小时补充一倍的pmsf。
15、优选的，所述冰水浴超声裂解功率：85w-100w，并且每4s-6s暂停2s-3s，裂解8-11min。
16、优选的，所述离心机的转速为10000-12000r/min，离心机内温度为2-4℃，离心5-25min。
17、优选的，所述重复离心取上清液，直到离心后几乎无肉眼可见沉淀作为判断标准。
18、优选的，所述在蛋白质提取时，可以使用沉淀剂沉淀蛋白质，或使用柱层析或其他技术提取目标蛋白质。
19、优选的，所述沉淀剂具体为氨磺酸和三氟乙酸其中的一种，最优选择为氨磺酸；
20、在对动物组织蛋白进行存储时，存储环境为零下70-90摄氏度。
21、优选的，所述蛋白质样品检测和分析的步骤如下所示：
22、a、通过凝胶电泳的过程，根据蛋白质的大小将其分离；
23、b、分离后，将蛋白质从凝胶转移到固体支持膜上，通常是硝酸纤维素、聚偏氟乙和二氟乙烯其中的一种；
24、c、在阻断溶液中孵育膜，以防止检测试剂和抗体与膜表面的非特异性结合；
25、d、将膜与特定的一抗抗体一起孵育，这些抗体可以结合到感兴趣的靶标蛋白质；
26、e、在一抗抗体孵育后，用洗涤液洗涤膜，以去除任何未结合的抗体；
27、f、将膜与结合到酶或荧光素的二抗抗体孵育；
28、g、通过添加与结合到二抗抗体的酶相关的底物或直接检测荧光来可视化目标蛋白质的存在；
29、h、膜上的结果条带代表原始样本中目标蛋白质的存在和相对丰度。
30、优选的，所述凝胶电泳所使用的凝胶，其孔洞直径通常约为10纳米至数十纳米；凝胶浓度范围是8％-15％。
31、(三)有益效果
32、与现有技术相比，本发明提供了一种动物组织蛋白提取优化方法，具备以下有益效果：
33、该动物组织蛋白提取优化方法，通过对提取后的动物组织蛋白初液进行纯化和浓缩，从而使获取到的动物组织蛋白中的杂物更少，使其方便动物组织提取蛋白做wb的进行，并且在进行动物组织蛋白检测时，通过在凝胶电泳过程中使用特殊设定的凝胶，并且对检测步骤进行优化，从而使所提取的动物组织蛋白检测显影条更加的清晰，有助于快速对目标蛋白情况进行了解分析，提高检测效果的准确性。
1.一种动物组织蛋白提取优化方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种动物组织蛋白提取优化方法，其特征在于，所述选取的动物组织样品不易过少，甚至可以轻度饱和，通过剪刀剪成小块，再进行冰水浴超声裂解。
3.根据权利要求1所述的一种动物组织蛋白提取优化方法，其特征在于，所述取适当量的ripa裂解液，在使用前数分钟内加入pmsf，两者比例为ripa：pmsf＝100：1，蛋白酶加双倍或者每间隔一小时补充一倍的pmsf。
4.根据权利要求1所述的一种动物组织蛋白提取优化方法，其特征在于，所述冰水浴超声裂解功率：85w-100w，并且每4s-6s暂停2s-3s，裂解8-11min。
5.根据权利要求1所述的一种动物组织蛋白提取优化方法，其特征在于，所述离心机的转速为10000-12000r/min，离心机内温度为2-4℃，离心5-25min。
6.根据权利要求1所述的一种动物组织蛋白提取优化方法，其特征在于，所述重复离心取上清液，直到离心后几乎无肉眼可见沉淀作为判断标准。
7.根据权利要求1所述的一种动物组织蛋白提取优化方法，其特征在于，所述在蛋白质提取时，可以使用沉淀剂沉淀蛋白质，或使用柱层析或其他技术提取目标蛋白质。
8.根据权利要求1所述的一种动物组织蛋白提取优化方法，其特征在于，所述沉淀剂具体为氨磺酸和三氟乙酸其中的一种，最优选择为氨磺酸；
9.根据权利要求1所述的一种动物组织蛋白提取优化方法，其特征在于，所述蛋白质样品检测和分析的步骤如下所示：
10.根据权利要求1所述的一种动物组织蛋白提取优化方法，其特征在于，所述凝胶电泳所使用的凝胶，其孔洞直径通常约为10纳米至数十纳米；凝胶浓度范围是8％-15％。
