本发明属于包埋方法，具体涉及一种类器官包埋方法。
背景技术：
1、类器官是指由胚胎干细胞、诱导多能干细胞、组织前体细胞或者成体细胞，在体外自组装形成的能部分模拟体内组织结构与功能的细胞聚合体，其能够模拟组织器官发生过程，保持相应的生理功能及病理状态，在基础和临床研究等方面具有广阔的应用前景。
2、借助病理学形态分析可以检测类器官的形态结构，目前类器官一般使用以下两种方式进行包埋：第一种方法是直接将类器官固定后进行脱水、透明及浸蜡包埋，由于类器官体积小且结构复杂，该方法容易出现样品丢失、形态结构被破坏等问题，为了解决这些问题，研究者在包埋过程中增加了样本量，但这无疑会加大实验的经济成本。第二种方法是使用琼脂糖进行类器官预包埋后再进行样本的脱水、透明、浸蜡包埋等操作，但该方法仍然存在问题，单独使用琼脂糖作为预包埋材料时，其使用浓度对包埋结果影响较大，一方面琼脂糖使用浓度低，形成的琼脂糖凝胶柔软，容易在转移过程中发生破碎，造成类器官的损失；另一方面使用浓度较高，则影响后续的脱水及透明过程，琼脂糖凝胶在脱水过程中发生皱缩聚集现象明显，在类器官周围出现明显的“胶圈”，影响美观。因此有必要设计一种适用于类器官的包埋方法，解决类器官包埋过程中样本丢失、结构损伤等问题。
技术实现思路
1、针对现有技术的不足，本发明提供一种类器官包埋方法，使用由低熔点琼脂糖配制的琼脂糖溶液作为包埋剂和两个离心管作为预包埋模具，既能减少类器官在操作过程中的损失，又可以维持类器官原有的形态，避免其结构被破坏。
2、本发明提供的技术方案如下所示：
3、本发明提供一种类器官包埋方法，使用两个离心管作为预包埋模具，所述方法包括以下步骤：通过预热移液枪头将琼脂糖溶液加入装有类器官沉淀并染色标记的第一离心管中，使用预热移液枪头吹打进行封闭包裹，再进行凝固处理，类器官和琼脂糖溶液凝固得到含预包埋类器官的类器官胶块；对第一离心管管底剪口，将第二离心管套接在第一离心管下方，推出类器官胶块进入第二离心管内；其中，所述琼脂糖溶液中的琼脂糖采用熔化温度为62~68℃的低熔点琼脂糖。
4、进一步的，所述琼脂糖溶液使用低熔点琼脂糖溶于磷酸盐缓冲溶液pbs配制而成，所述琼脂糖溶液中低熔点琼脂糖的浓度为1~200 mg/ml。
5、进一步的，以1.5ml离心管体积计，琼脂糖溶液的加入量为300~1000 μl。
6、进一步的，所述琼脂糖溶液的温度和对移液枪头进行预热的温度为40~70℃。
7、进一步的，所述染色标记中使用台盼蓝作为染色液。
8、进一步的，所述凝固处理中，温度为2~8℃，时间为15~30min。
9、进一步的，所述方法还包括以下步骤：向第二离心管中的类器官胶块中加入浓度为4wt%多聚甲醛固定2~12h。
10、进一步的，每毫升多聚甲醛中，预包埋类器官的数量为1000~5000个。
11、进一步的，所述方法还包括以下步骤：对经过固定的类器官胶块进行脱水、透明和浸蜡包埋处理。
12、进一步的，所述类器官包括肠类器官、肺类器官和乳腺类器官。
13、有益效果：
14、1.本发明的类器官包埋方法，使用低熔点琼脂糖配制的琼脂糖溶液进行预包埋，降低了因为温度过高对类器官的损伤，避免高浓度琼脂糖粉在脱水透明过程中，因皱缩对染色背景产生影响，减少了类器官在操作过程中的损失，又可以维持类器官原有的形态，避免其结构被破坏。
15、2.本发明所述类器官包埋方法减少了类器官因直接脱水、透明出现样本丢失、结构损伤的情况，且通过套接在第一离心管的第二离心管得到预包埋类器官，避免在转移过程中类器官的损失。
16、3.本发明所述类器官包埋方法在包埋前使用台盼蓝试剂标记类器官，制成石蜡切片后，同一切面上的样本数量更多，便于后续染色观察等病理检测。
17、4.本发明的移液枪头使用前需要预热，避免琼脂糖溶液在转移或混匀过程时，由于低温凝固在移液枪头中，造成类器官的损失。
1.一种类器官包埋方法，其特征在于，使用两个离心管作为预包埋模具，所述方法包括以下步骤：通过预热移液枪头将琼脂糖溶液加入装有类器官沉淀并染色标记的第一离心管中，使用预热移液枪头吹打进行封闭包裹，再进行凝固处理，类器官和琼脂糖溶液凝固得到含预包埋类器官的类器官胶块；对第一离心管管底剪口，将第二离心管套接在第一离心管下方，推出类器官胶块进入第二离心管内；其中，所述琼脂糖溶液中的琼脂糖采用熔化温度为62~68℃的低熔点琼脂糖。
2.根据权利要求1所述的类器官包埋方法，其特征在于，所述琼脂糖溶液使用低熔点琼脂糖溶于磷酸盐缓冲溶液pbs配制而成，所述琼脂糖溶液中低熔点琼脂糖的浓度为1~200mg/ml。
3.根据权利要求1所述的类器官包埋方法，其特征在于，以1.5ml离心管体积计，琼脂糖溶液的加入量为300~1000 μl。
4.根据权利要求1所述的类器官包埋方法，其特征在于，所述琼脂糖溶液的温度和对移液枪头进行预热的温度为40~70℃。
5.根据权利要求1所述的类器官包埋方法，其特征在于，所述染色标记中使用台盼蓝作为染色液。
6.根据权利要求1所述的类器官包埋方法，其特征在于，所述凝固处理中，温度为2~8℃，时间为15~30min。
7.根据权利要求1所述的类器官包埋方法，其特征在于，所述方法还包括以下步骤：向第二离心管中的类器官胶块中加入浓度为4wt%多聚甲醛固定2~12h。
8.根据权利要求7所述的类器官包埋方法，其特征在于，每毫升多聚甲醛中，预包埋类器官的数量为1000~5000个。
9.根据权利要求7所述的类器官包埋方法，其特征在于，所述方法还包括以下步骤：对经过固定的类器官胶块进行脱水、透明和浸蜡包埋处理。
10.根据权利要求1所述的类器官包埋方法，其特征在于，所述类器官包括肠类器官、肺类器官和乳腺类器官。
