本公开总体上涉及癌症免疫治疗的，并且更具体地涉及用于癌症治疗的钙粘蛋白-17(cdh17)特异性抗体和细胞毒性细胞。
背景技术：
1、除非本文另外指出，否则本部分中描述的材料不是本技术中的权利要求的现有技术，并且不通过包括在本部分中而被认为是现有技术。
2、尽管最近在药物发现和临床成像方面取得了进展，癌症仍然是人类最致命的疾病之一。我们对肿瘤如何产生，如何在应激下生存，如何向远处的器官和部位移植或转移，以及如何对药物产生抗药性的理解仍然是有限的。美国癌症协会(american cancersociety)估计，2014年美国新增癌症病例为160万例，大多数主要癌症类型都没有经过批准的治疗方法。
3、胃肠(gi)癌(结肠直肠癌、胃癌、胰腺癌、食管癌、胆管癌和肝癌)是世界范围内发病率和死亡率的主要原因。单独的结直肠癌(crc)约占所有癌症诊断的10％，是世界范围内癌症死亡的第二个主要原因。肝癌和胃癌是世界范围内最致命的恶性肿瘤之一，超过一半的确诊病例导致全球每年超过142万人死亡，被认为是由于病毒/细菌流行(乙型肝炎病毒[hbv]和幽门螺杆菌感染)、化学中毒、环境污染和食品污染。没有有效的治疗方法。因此，需要用于对于这些进展期癌症的潜在药物开发的新的生物标志物和治疗靶标。已证实的能够消除或抑制这些癌症生长的分子靶向剂将具有重要的临床价值和显著的市场影响。如果早期确诊疾病，通过手术可有效切除肿瘤。不幸的是，通常情况下，在临床出现的大多数gi癌症是无症状的并且在晚期才检测到。在没有有效治疗的情况下，这些患者在诊断后不久便死亡或在挽救疗法后复发。
4、cdh17是一种显著的癌症生物标志物，其特征在于其在肝癌和胃癌中均过表达，但在健康成年人的正常组织中却不表达。抗cdh17单克隆抗体对肝、胃肿瘤细胞有生长抑制作用。cdh17在转移癌中高表达，阻断cdh17的表达和功能可显著降低肝细胞癌(hcc)的肺转移。这些观察结果表明，人源化抗cdh17抗体可开发为抗体治疗剂用于治疗癌症患者，该癌症患者在肿瘤组织和/或血清样本中具有cdh17生物标志物的指征。
5、与以单克隆抗体与癌细胞结合为特征的抗体治疗剂相反，多特异性抗体治疗剂可与t细胞结合并介导对癌细胞的细胞毒性。双特异性抗体对于治疗血液恶性肿瘤是有效的，但是靶向实体肿瘤的治疗效果有限。可能的障碍可能是活化的细胞毒性免疫细胞缺乏合适的生物标志物并且实体瘤细胞不易接近。
技术实现思路
1、本公开提供靶向cdh17的多特异性抗体和细胞毒性细胞的组合物，以及用本文公开的组合物和抗体(或其片段)治疗癌症的方法。
2、在一个方面，本公开涉及靶向胃肠特异性生物标志物和cd3两者的多特异性抗体的组合物。在一些实施方案中，抗体是cdh17xcd3双特异性抗体。这些抗体可活化t细胞并安全靶向cdh17阳性细胞。在一个实施方案中，cdh17xcd3双特异性抗体可在临床上用于治疗患有cdh17阳性癌症的患者。
3、在一个实施方案中，本公开提供对cdh17具有特异性的抗体，包括与选自seq idno：15-33的氨基酸序列具有至少70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％(或其间的任何其它数字)同源性的重链或轻链氨基酸序列。
4、在一些实施方案中，抗体是单克隆抗体。在一个实施方案中，单克隆抗体可以是小鼠抗体、人源化抗体或人抗体。在一些实施方案中，单克隆抗体可以是从噬菌体文库筛选中分离的人抗体。
5、在一些实施方案中，抗体可以包括轻链可变结构域(vl)、重链可变结构域(vh)或其组合。在一个实施方案中，vl可包括与选自seq id no：2、4、6、8、10和12的氨基酸序列具有至少70％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％(或其间的任何其它数字)同源性的氨基酸序列。在一些实施方案中，vh可包括与选自seq id no：1、3、5、7、9和11的氨基酸序列具有至少70％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％(或其间的任何其它数字)同源性的氨基酸序列。
6、在一些实施方案中，抗体可以包括缀合的细胞毒性部分。在一些实施方案中，缀合的细胞毒性部分可包括伊立替康(irinotecan)、奥利斯他汀(auri stat ins)、pbd、美登素(maytansine)、鹅膏蕈碱(amant ins)、剪接体抑制剂或其组合。在一些实施方案中，缀合的细胞毒性部分可以包括化疗剂。
7、在一些实施方案中，抗体是双特异性抗体。
8、在一些实施方案中，抗体可包括对来自细胞毒性t细胞或nk细胞的细胞受体的特异性。在一些实施方案中，抗体是对cdh17和cd3都具有特异性的双特异性抗体。在一些实施方案中，细胞受体可包括kir2d52、kir2d53、kir2d54、kir2d55、kir3d51、cd16a、cd27、cd94、cd96、cd100、cd160、cd244、nkp30、nkp44、nkp46、nkp80、nkg2d、dnam1、crtam、psgl1、ceacam1、ntb-a、slamf7、ox40、cd137、icos、cd28、tim1和tim3，或其衍生物或其组合。
9、在一些实施方案中，抗体可包括对cdh17具有特异性的第一单链可变片段(scfv)和对cd3或trop2具有特异性的第二单链可变片段(scfv)。在一个实施方案中，第一scfv可包括第一vh(可变重链)和第一vl(可变轻链)。在一个实施方案中，第二scfv可以包括第二vh和第二vl。在一些实施方案中，第一vh可包括与选自seq id no：1、3、5、7的氨基酸序列具有至少70％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％(或其间的任何其它数字)同源性的氨基酸序列。在一些实施方案中，第一vl可包括与选自seq id no：2、4、6、8的氨基酸序列具有至少70％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％(或其间的任何其它数字)同源性的氨基酸序列。
10、在一些实施方案中，第二vh可包括与氨基酸seq id no：9、11、13具有至少70％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％(或其间的任何其它数字)同源性的氨基酸序列的相应部分。
11、在一些实施方案中，第二vl可以包括与氨基酸seq id no：10、12、14具有至少70％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％(或其间的任何其它数字)同源性的氨基酸序列的相应部分。
12、在一些实施方案中，抗体可以具有对免疫检查点抑制剂的特异性。在一些实施方案中，检查点抑制剂可以包括pd-1、pd-l1、ctl-a4、tim3、lag3、btla、cd96、tigit、cd226或vista，或其组合。
13、在一些实施方案中，抗体可对血管生成因子具有特异性。在一些实施方案中，血管生成因子可以包括vegf。
14、在一些实施方案中，抗体可以配置为拮抗cdh17结构域6中的rgd位点与整合素的结合。在一些实施方案中，整合素可以包括α2β1。
15、在一些实施方案中，抗体可以配置为结合cdh17胞外域结构域5、结构域6或结构域7以拮抗cdh17脱落。
16、在一些实施方案中，抗体是单克隆抗体。
17、一些实施方案涉及抗体的igg重链。在一个实施方案中，抗体可以具有igg，该igg具有与seq id no：15、16、17、20、21、22、24、25.26、28、29、30、31、32、33具有至少70％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％(或其间的任何其它数字)同源性的链。
18、一些实施方案涉及抗体的轻链。在一个实施方案中，抗体可以具有轻链，该轻链具有与seq id no：18、19、23、27具有至少70％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％(或其间的任何其他数字)的同源性的氨基酸序列。
19、一些实施方案涉及抗体的可变结构域。在一个实施方案中，可变结构域可以具有与seq id no：1-14具有至少70％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％(或其间的任何其它数字)同源性的氨基酸。
20、一些实施方案涉及对cdh17具有特异性的scfv或fab。在一些实施方案中，抗体包括与选自seq id no：34、35、36、37、38、39、40的氨基酸序列具有至少70％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％(或其间的任何其它数字)的同源性的氨基酸序列。
21、在一些实施方案中，scfv或fab可包括对来自细胞毒性t细胞或nk细胞的细胞受体的特异性。在一些实施方案中，scfv或fab可以包括对免疫检查点抑制剂的特异性。在一些实施方案中，scfv或fab可包括对血管生成因子的特异性。
22、一些实施方案涉及对cdh17具有特异性的t或nk细胞。在一个实施方案中，t或nk细胞可以包括嵌合抗原受体。在一个实施方案中，嵌合抗原受体可以包括与选自seq id no：41、42、43、44、45的氨基酸序列具有至少70％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％(或其间的任何其他数字)的同源性的氨基酸序列。
23、一些实施方案涉及编码本文所述的抗体、igg重链、轻链、可变链或scfv或fab的分离的核酸。
24、一些实施方案涉及包括本文公开的分离的核酸的表达载体(vector)。在一些实施方案中，载体(vector)可在细胞中表达。
25、一些实施方案涉及包括如本文所述的核酸的宿主细胞。一些实施方案涉及包括如本文所述的表达载体(vector)的宿主细胞。在一些实施方案中，宿主细胞是原核细胞或真核细胞。
26、在一个方面，本技术提供用于治疗癌症的药物组合物。在一个实施方案中，药物组合物包括抗体和细胞毒类药物。
27、在一些实施方案中，细胞毒类药物可包括顺铂、吉西他滨、伊立替康或抗肿瘤抗体。
28、在一些实施方案中，药物组合物可包括如本文所述的抗体和药学上可接受的载体(carrier)。
29、在另一方面，本技术提供用于治疗患有癌症的受试对象的方法。在一个实施方案中，方法包括向受试对象施用有效量的抗体或t细胞或nk细胞。在一些实施方案中，有效量可以是将治疗癌症、减轻症状、改变生物标记以帮助治疗癌症的量，或其组合。受试对象可以是人或动物。
30、在一些实施方案中，癌症可以是肝癌、胃癌、结肠癌、胰腺癌、肺癌或其组合。
31、本公开的目的和优点可以从以下结合附图对其实施方案的详细描述中变得清楚。
1.一种具有n端和c端的抗体，包括重链和轻链，
2.一种具有n端和c端的抗体，包括重链和轻链，
3.一种具有n端和c端的抗体，其从所述n端到所述c端依次包括第一scfv结构域、第二scfv结构域、铰链、ch2结构域和ch3结构域，
4.一种对第一靶标和第二靶标具有特异性的抗体，其中，所述第一靶标和所述第二靶标独立地选自包括cdh17、cd3、trop2、gpc3和her2的组，并且其中所述抗体是单克隆抗体。
5.根据权利要求1至4所述的抗体，其中，cdh17包括cdh17胞外域d1、d2、d3、d4、d5、d6和d7。
6.根据权利要求1至4所述的抗体，其包括与seq id no 15-33具有至少70％同源性的氨基酸序列。
7.根据权利要求4所述的抗体，其包括对所述第一靶标具有特异性的第一scfv结构域和对所述第二靶标具有特异性的第二scfv结构域。
8.根据权利要求7所述的抗体，其中，所述抗体包括两组所述第一scfv结构域。
9.根据权利要求8所述的抗体，其中，所述抗体包括两组所述第二scfv结构域。
10.根据权利要求9所述的抗体，其具有轻链恒定区，其中所述第一scfv结构域和所述第二scfv结构域均可操作地连接到所述轻链恒定区。
