本发明属于抗菌肽应用，具体涉及一种抗菌肽gbugt71b6、表达方法及应用。
背景技术：
1、抗菌肽，英文名称antimicrobial peptides，又称为amps，是由基因编码、核糖体合成的多肽，广泛存在于细菌、真菌、植物、动物体内，是生物体非特异性免疫功能的重要组成部分，具有抗细菌、抗真菌、抗病毒等多种生物学功能。通常有以下几种共同的特征：小肽，分子量约4000道尔顿、pi是8.9～10.7的强阳离子、热稳定性、无抗药性且对真核细胞无影响。
2、尖孢镰刀菌是一种世界性分布的土传病原真菌，寄主范围广泛，是一类既可侵染植物又可在土壤内生存的兼性寄生真菌。和其它植物病原菌一样，存在着种下分化，具有多种专化型，可引起瓜类、茄科、香蕉、棉、豆科及花卉等100多种植物枯萎病的发生。
3、由于病原菌导致植物品质下降和腐烂，严重影响其品质和商品价值。传统抗生素、化学杀菌剂的大量使用不仅存在安全问题，还会使病原菌产生耐药性，且易造成环境污染。近年来，抗菌肽的应用研究得到越来越多的关注，人们期待能找到可替代抗生素和化学杀菌剂的新型药物或防治方法。
技术实现思路
1、本发明的目的是提供一种抗菌肽gbugt71b6、表达方法及应用，找到了一种可替代抗生素和化学杀菌剂的产品。
2、本发明中抗菌肽gbugt71b6的氨基酸序列如seq id no.1所示。seq id no.1：
3、mkkaelvfipfpakghlvstvevakllvdlnsnlsisvlitertvdaestayadsltaastttrikfihlpqpdldtdaanfirsvvqtheplvreavtkivehsnsvpgsprlagfvldlfctsfrdlandfgvpsylfctsgagflgflfftqalhdeqnfefveltdseteftipsyvnsvstklfpsatfkpegfglflsvakqvremkgimvntfleleshavdslsncklppvypvgpilntegcsgvhqnydsimqwldqqprssvvflcfgsrgsfsanqvkeiacaleqsgfrflwslrrapeqvngkmghptdyenmaevlpegfldrtaeigkiigwapqsailghpatggfvshcgwnstlesiwfgvpmatwplyaeqqlnalqlvkelglaveikmdyridgggevelvkaetiergirrlmehdsdvrkrmkemsdrsrkalmdggsshstlcrfinevvdnmp。
4、抗菌肽gbugt71b6的表达方法，包括以下步骤：
5、第一步：合成第一引物对与第二引物对，第一引物对序列如seq id no.2和seq idno.3所示。
6、seq id no.2：gbugt71b6-f，5’-atgaagaaagcggagctagt-3’；
7、seq id no.3：gbugt71b6-r，5’-tcatggcatgttgtccac-3’；
8、第二引物对序列是带有酶切位点not i的引物，引物序列如seq id no.4和seq idno.5所示。
9、seq id no.4：pet-sumo-gbugt71b6-f，
10、5’-ggtggtggatccgaattccggactatgaagaaagcggagctagtgttcat cccattccc-3’；
11、seq id no.5：pet-sumo-gbugt71b6-r，
12、5’-ggtggtggtgctcgagtgcggccttatcatggcatgttgtccacgacttca ttaataaaac-3’；
13、第二步：以抗枯萎病植物材料基因组dna为模板，用第一引物对进行pcr扩增，pcr产物通过t/a克隆法连接至peasy-t5载体，进行转化、测序，获得peasy-t5-gbugt71b6重组载体。
14、以peasy-t5-gbugt71b6重组载体为模板，用第二引物对进行pcr扩增，得到目的基因。
15、对目的基因和原核表达载体用not i进行酶切，随后连接、转化，获得重组原核表达载体pet-sumo-gbugt71b6，对其进行测序。
16、第三步：将原核表达载体pet-sumo-gbugt71b6转化至表达菌株，所得菌株接种至培养基中，诱导表达，得到抗菌肽gbugt71b6。
17、所述抗枯萎病植物材料为海岛棉06-146。
18、所述原核表达载体为pet-sumo。
19、抗菌肽gbugt71b6用于抗枯萎病。
20、抗菌肽gbugt71b6用于抑制枯萎病的尖孢镰刀菌分生孢子萌发。
21、抑制1×107个尖孢镰刀菌分生孢子萌发需要50μg～100μg抗菌肽gbugt71b6。
22、所述抗菌肽gbugt71b6用于抑制枯萎病的尖孢镰刀菌菌丝伸长。
23、抑制1×107个尖孢镰刀菌分生孢子菌丝伸长需要10μg～20μg抗菌肽gbugt71b6。
24、本发明的有益效果是，抗菌肽gbugt71b6通过抑制植物枯萎病的尖孢镰刀菌的孢子萌发和菌丝伸长以此实现抗枯萎病。本发明改善了传统抗生素、化学杀菌剂使用存在的安全问题。
1.抗菌肽gbugt71b6，其特征在于，所述抗菌肽gbugt71b6的氨基酸序列如seq id no.1所示。
2.根据权利要求1所述的抗菌肽gbugt71b6的表达方法，其特征在于，包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的抗菌肽gbugt71b6的表达方法，其特征在于，所述抗枯萎病植物材料为海岛棉06-146。
4.根据权利要求2所述的抗菌肽gbugt71b6的表达方法，其特征在于，所述原核表达载体为pet-sumo。
5.根据权利要求1所述抗菌肽gbugt71b6的应用，其特征在于，所述抗菌肽gbugt71b6用于抗枯萎病。
6.根据权利要求5所述抗菌肽gbugt71b6的应用，其特征在于，所述抗菌肽gbugt71b6用于抑制枯萎病的尖孢镰刀菌分生孢子萌发。
7.根据权利要求6所述抗菌肽gbugt71b6的应用，其特征在于，抑制1×107个尖孢镰刀菌分生孢子萌发需要50μg～100μg抗菌肽gbugt71b6。
8.根据权利要求5所述抗菌肽gbugt71b6的应用，其特征在于，所述抗菌肽gbugt71b6用于抑制枯萎病的尖孢镰刀菌菌丝伸长。
9.根据权利要求8所述抗菌肽gbugt71b6的应用，其特征在于，抑制1×107个尖孢镰刀菌分生孢子菌丝伸长需要10μg～20μg抗菌肽gbugt71b6。
