本发明涉及石蜡切片的，尤其涉及一种砂仁根状茎石蜡切片制作方法。
背景技术：
1、砂仁(amomum villosum lour.)是姜科(zingiberaceae)豆冠属(amomum l)多年生耐荫常绿草本药用植物，原产于热带、亚热带地区，广泛种植于我国云南、广西和广东等地；所产果实是我国传统的“四大”南药品种之一，具有化湿开胃，温脾止泻，理气安胎的功效，具有悠久的药用历史和极高的药用价值。
2、砂仁根状茎是植株分生、根系生育和开花结实的部位，也是水分、养分和代谢物等运输的枢纽，是植株的核心器官，决定着砂仁的群体生育和产量特征。然而，砂仁根状茎的研究一直未受到关注，仅在药用化学成分方面有所涉及，其形态与微观结构特征了解较少，制约了对植株生长发育的研究。
技术实现思路
1、有鉴于此，本发明的目的是提供一种砂仁根状茎石蜡切片制作方法，能够保证得到的切片组织结构清晰完整，便于观察砂仁根状茎的微观结构。
2、为实现上述目的，本发明的技术方案如下：
3、一种砂仁根状茎石蜡切片制作方法，包括以下步骤：
4、(1)取材：选取砂仁根状茎，清洗干净后，将材料横切成小段，得到切断材料；
5、(2)固定：将切断材料用faa固定液固定，得到固定材料；所述faa固定液的浓度为65～75％，优选为70％；
6、其中，当步骤(1)中，砂仁根状茎为幼嫩根状茎时，步骤(2)中，faa固定液固定时间为45～50h，优选为48h，中间更换一次faa固定液，具体的，先在faa固定液中固定24h，倒掉第一次固定液，再加入新配置固定液，固定24h；
7、当步骤(1)中，砂仁根状茎为老的根状茎时，步骤(2)中，faa固定液固定时间为20～28h，优选为24h，且固定后再转移至无水乙醇与丙三醇混合液中软化5-7天，所述无水乙醇与丙三醇的体积比为1:1；
8、(3)脱水与透明：逐渐提高酒精溶液的体积浓度对固定材料进行脱水处理，得到脱水材料，其中，酒精溶液的体积浓度最低为50％，最高为100％；
9、(4)对脱水材料依次采用以下步骤进行浸蜡与包埋：
10、(4.1)置于装有石蜡与二甲苯体积比为3:1的容器中，放入58～62℃烘箱处理40min-1h；
11、(4.2)转移至装有石蜡与二甲苯体积比为2：1的容器中，放入58～62℃烘箱处理40min-1h；
12、(4.3)转移至装有纯二甲苯的容器中，放入58～62℃烘箱处理40min-1h；
13、(4.4)转移至装有纯石蜡的容器中，放入58～62℃烘箱处理10h-14h；
14、(4.5)将融化的石蜡倒入一次性包埋盒中，用镊子将步骤(4.2)处理后的材料移至融化的石蜡中，室温冷却凝固，得到蜡块；
15、(5)对所得蜡块进行切片得到蜡带；
16、(6)将切好的蜡带转移至水中，将其在水面上展开，然后放到洁净的载玻片上，做好标记或贴上标签置于切片架上，得到展开后的材料；
17、(7)染色：将所得展开后的材料先置于二甲苯中处理15-30min，然后依次置于酒精与二甲苯体积比1:1的混合液、100％酒精、95％酒精、80％酒精、70％酒精、50％酒精中各浸泡2min-3min；然后置于甲苯胺蓝中浸泡30s～50s；再置于水中洗涤3min-5min；再依次置于50％酒精、70％酒精、80％酒精、95％酒精、100％酒精、100％酒精中各浸泡2min-3min；最后置于二甲苯中浸泡10-20min；
18、(8)采用中性树胶封片，得到砂仁根状茎石蜡切片。
19、进一步地，当步骤(1)中，砂仁根状茎为幼嫩根状茎时，步骤(3)中，脱水依次为：50％乙醇脱水1h、75％乙醇脱水1h、80％乙醇脱水1h、95％乙醇脱水1h、无水乙醇脱水2h；
20、当步骤(1)中，砂仁根状茎为老的根状茎时，步骤(3)中，脱水依次为：50％乙醇脱水1.5h、75％乙醇脱水1.5h、80％乙醇脱水1.5h、95％乙醇脱水1.5h、无水乙醇脱水2h。
21、进一步地，步骤(4.1)至步骤(4.4)中，烘箱的温度均设置为60℃；步骤(4.1)至步骤(4.3)中，烘箱的处理时间均为1h；步骤(4.4)中，烘箱的处理时间为12h。
22、进一步地，步骤(5)中，所述蜡带的厚度为10-15um。
23、进一步地，步骤(6)中，水的温度为40～55℃。
24、进一步地，步骤(7)中，将所得展开后的材料先置于二甲苯中处理15min，再置于新的二甲苯中处理15min，然后依次置于酒精与二甲苯体积比1:1的混合液、100％酒精、95％酒精、80％酒精、70％酒精、50％酒精中各浸泡2min；然后置于甲苯胺蓝中浸泡40s；然后置于水中洗涤2min，再置于新的水中洗涤2min；再依次置于50％酒精、70％酒精、80％酒精、95％酒精、100％酒精、100％酒精中各浸泡2min-3min；最后先置于二甲苯中浸泡10min，再置于新的二甲苯中浸泡10min。
25、本发明有益效果至少包括：
26、本发明通过使用特定浓度的faa固定液对根状茎进行初步处理后再使用混合体积比为1:1的无水乙醇与丙三醇混合液对老的根状茎进行软化处理，可防止其切片褶皱或破损，并通过调整后续的脱水、浸蜡和染色等步骤的时间和部分步骤中的温度等，保证了切片效果，可切出组织结构完整清晰、染色清晰分明的切片，从而便于观察砂仁根状茎的微观结构，可为砂仁根状茎的解剖学研究和功能性状之间关系和机理的揭示提供可靠的技术支持。
27、即本发明可提高切片的质量和清晰度，更好地展示砂仁根状茎的细胞结构和组织形态；减少组织损伤和变性的可能性，保持样本的完整性和准确性；提升观察和分析研究的效率和准确度，为进一步的研究提供更准确的数据和信息。
1.一种砂仁根状茎石蜡切片制作方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的制作方法，其特征在于，
3.根据权利要求1所述的的制作方法，其特征在于，步骤(4.1)至步骤(4.4)中，烘箱的温度均设置为60℃；步骤(4.1)至步骤(4.3)中，烘箱的处理时间均为1h；步骤(4.4)中，烘箱的处理时间为12h。
4.根据权利要求1所述的的制作方法，其特征在于，步骤(5)中，所述蜡带的厚度为10-15um。
5.根据权利要求1所述的的制作方法，其特征在于，步骤(6)中，水的温度为40～55℃。
6.根据权利要求1所述的的制作方法，其特征在于，步骤(7)中，将所得展开后的材料先置于二甲苯中处理15min，再置于新的二甲苯中处理15min，然后依次置于酒精与二甲苯体积比1:1的混合液、100％酒精、95％酒精、80％酒精、70％酒精、50％酒精中各浸泡2min；然后置于甲苯胺蓝中浸泡40s；然后置于水中洗涤2min，再置于新的水中洗涤2min；再依次置于50％酒精、70％酒精、80％酒精、95％酒精、100％酒精、100％酒精中各浸泡2min-3min；最后先置于二甲苯中浸泡10min，再置于新的二甲苯中浸泡10min。
