本发明属于农产品加工、蛋白提取及药物活性应用领域,具体涉及一种油菜籽蛋白质的提取方法及应用。
背景技术:
1、油菜(brassica napus l.)为十字花科植物。油菜中蛋白质含量约为25%,油菜籽加工后得到的菜籽饼中粗蛋白含量十分丰富,可达35%-45%,且蛋白质质量很高。油菜籽蛋白的生物活性表现为增加免疫活性等。但是粗提物蛋白质在提取过程中容易受到温度以及酸碱度的影响,很难被提取和纯化,进而限制了对其生物活性方面的研究。现有技术中油菜籽蛋白提取主要采取碱提酸沉法,通过蛋白质等电点析出的原理,控制ph的大小得到目的蛋白,但目前的提取方式获得的蛋白溶解性较差,部分活性丧失。
2、因此,开发一种针对油菜籽蛋白的高效提取方法及其生物活性的研究,具有极大的药用价值和社会价值。
技术实现思路
1、针对现有技术的不足,本发明提供了一种油菜籽蛋白质的提取方法及应用。
2、本发明的技术方案如下:
3、一种油菜籽蛋白质的提取方法,包括如下步骤:
4、(1)将油菜籽饼或粕粉碎,然后与去离子水按体积比1:(3-5)混合,搅拌5-10min,超声5-10min,固液分离,保留液体;
5、(2)将步骤(1)保留的液体经(nh4)2so4盐析,固液分离,保留沉淀;
6、(3)将步骤(2)保留的沉淀复溶2~3次,固液分离,保留液体,合并保留的溶液;
7、(4)将步骤(3)保留的溶液进行透析,得油菜籽蛋白溶液;
8、(5)将步骤(4)得到的油菜籽蛋白溶液干燥后得油菜籽蛋白质。
9、根据本发明优选的,步骤(1)中,油菜籽饼或粕通过常温物理压榨获得。
10、根据本发明优选的,步骤(1)中,将油菜籽饼或粕粉碎过80目筛。
11、根据本发明优选的,步骤(1)中,固液分离的方式为经过纱布过滤,然后将滤液离心4000~8000rpm,10~30min,保留上清液。
12、根据本发明优选的,步骤(1)中,油菜籽品种为青杂5号、青油21号。
13、进一步优选的,油菜籽品种为青油21号。
14、根据本发明优选的,步骤(2)中,盐析使用(nh4)2so4沉淀,终浓度为60%,离心条件为8000~10000rpm,10~30min,保留沉淀。
15、进一步优选的,盐析沉淀时冰水浴搅拌,离心条件温度设定4℃。
16、根据本发明优选的,步骤(3)中,复溶采用0.5m ph7.5的磷酸缓冲液溶解,离心条件为6000~10000rpm,10~30min,保留上清。
17、进一步优选的,离心条件温度设定4℃。
18、根据本发明优选的,步骤(4)中,透析操作采用截留分子量10kda的透析袋。
19、进一步优选的,透析时2.5h以上换一次0.5m ph7.5的磷酸缓冲液,透析2次以上。
20、根据本发明优选的,步骤(5)中,利用真空冷冻干燥方式干燥油菜籽蛋白质。
21、上述方法提取的油菜籽蛋白质在制备抗肿瘤药物中的应用。
22、根据本发明优选的,所述肿瘤为乳腺癌。
23、进一步优选的,所述乳腺癌细胞为mda-mb-231细胞。
24、有益效果至少包括如下:
25、1、本发明提供的油菜籽蛋白质提取方法操作简单,适合工业化生产,提取的蛋白质纯度高,抗肿瘤活性明显,无细胞毒性;且青油21号油菜籽蛋白质提取物的抗肿瘤活性更优。
26、2、本发明提供的方法绿色与可持续,提取溶剂主要为水,辅助以硫酸铵盐溶液,硫酸铵常用作肥料以及皮革、医疗领域,且可以回收,符合绿色环保的原则。
1.一种油菜籽蛋白质的提取方法,其特征在于,包括如下步骤:
2.如权利要求1所的方法,其特征在于,步骤(1)中,油菜籽饼或粕通过常温物理压榨获得;
3.如权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(1)中,固液分离的方式为经过纱布过滤,然后将滤液离心4000~8000rpm,10~30min,保留上清液。
4.如权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(1)中,油菜籽品种为青杂5号、青油21号;
5.如权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(2)中,盐析使用(nh4)2so4沉淀,终浓度为60%,离心条件为8000~10000rpm,10~30min,保留沉淀;
6.如权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(3)中,复溶采用0.5m ph7.5的磷酸缓冲液溶解,离心条件为6000~10000rpm,10~30min,保留上清;
7.如权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(4)中,透析操作采用截留分子量10kda的透析袋;
8.如权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(5)中,利用真空冷冻干燥方式干燥油菜籽蛋白质。
9.权利要求1-8任一项所述方法提取的油菜籽蛋白质在制备抗肿瘤药物中的应用。
10.如权利要求9所述的应用,其特征在于,所述肿瘤为乳腺癌;