本发明属于生物工程，具体涉及一种改善骨关节疾病的混悬制剂及其制备方法。
背景技术：
1、膝关节骨性关节炎：骨关节炎(osteoarthritis，oa)是一种严重危害人类健康的慢性骨关节疾病，其在关节病中数量最多，超过类风湿性关节炎、强直性脊柱炎等其他关节炎的总和。在病理水平，骨关节炎表现为关节软骨的破坏及骨赘的异常增生，以致临床上出现关节疼痛、活动受限及关节畸形等表现。同时，骨关节炎是导致青壮年劳动力下降的最主要病因，造成重大经济负担。
2、骨关节炎(osteoarthritis，oa)是一种退行性关节疾病，在中老年群体中发病率极高，主要表现为关节疼痛及功能障碍。其发病率位列非传染性疾病排名的前10位。在中国50岁以上的人群中有8.1％的人为有症状的膝骨关节炎患者，共计3000余万人。软骨细胞是关节软骨中唯一的细胞，关节软骨的稳定依赖于软骨细胞，而软骨细胞又可以维持细胞外基质的平衡，因此，损害软骨细胞的功能和存活将会导致关节软骨的损害。软骨细胞凋亡是关节软骨退行性改变的病理因素之一。
3、膝关节滑膜炎：是由于外伤、感染、风湿性疾病、关节退行性等因素引起的滑膜增生性疾病，以关节疼痛、肿胀、活动受限和关节积液为主要表现的骨科常见疾病。一般以膝关节滑膜炎常见，及时有效治疗一般预后良好，但晚期仍可导致关节炎、关节僵硬、肌肉萎缩等。
技术实现思路
1、基于上述技术背景，本发明的主要目的在于提供一种改善骨关节疾病的混悬制剂及其制备方法，以克服现有技术中的不足。
2、为实现前述发明目的，本发明采用的技术方案包括：
3、本发明第一方面在于提供一种改善骨关节疾病的混悬制剂的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
4、步骤1、将间充质干细胞升温，复苏细胞，然后加入盐溶液依次吹悬、离心，向沉淀中加盐水进行吹悬、离心，随后向沉淀中加入盐溶液将细胞混悬，得到间充质干细胞悬液；
5、步骤2、将聚乙烯醇置于水中，升温后保温，随后搅拌溶解，得到聚乙烯醇水溶液；将壳聚糖置于乙酸溶液中，搅拌溶解，得到壳聚糖溶液；将聚乙烯醇水溶液和壳聚糖溶液混合，得到混合溶液；
6、步骤3、将混合溶液导入孔板中密封，然后冷冻、融化，随后依次加入碱溶液、盐水，得到复合水凝胶溶液；
7、步骤4、将间充质干细胞悬液和复合水凝胶溶液混合，即得改善骨关节疾病的混悬制剂。
8、步骤1中，
9、优选地，将间充质干细胞于35～40℃保温1～5min；
10、优选地，向复苏细胞中加入nacl溶液，吹悬后，于250g～270g离心5～8min，弃上清，向沉淀中加入nacl溶液，吹悬后，于250g～270g离心5～8min，弃上清，向沉淀中加入nacl溶液，将细胞混悬，得到间充质干细胞悬液。
11、步骤2中，
12、优选地，将聚乙烯醇置于水中，升温至55～65℃保温15～25min，然后升温至85～95℃磁力搅拌2～4h，充分溶解，得到质量分数为7～12％的聚乙烯醇水溶液。
13、优选地，按壳聚糖质量与乙酸溶液体积比为1:(40～60)混合，乙酸溶液的质量分数为1％，磁力搅拌0.5～2h，得到壳聚糖溶液。
14、优选地，将聚乙烯醇水溶液和壳聚糖溶液按照质量比为(5～7)：4混合，然后真空干燥0.5～2h，得到混合溶液。
15、步骤3中，
16、优选地，将混合溶液导入无菌12孔板中，每孔不超过2ml混合溶液，密封后，于-30～-10℃冷冻15～25h，随后于室温下融化7～10h，重复冷冻-融化操作6～8次。
17、优选地，向融化后的12孔板中加入质量分数为1％的naoh溶液浸泡10～15h，然后加入生理盐水，调整ph至中性，得到复合水凝胶溶液。
18、步骤4中，
19、优选地，将间充质干细胞悬液和复合水凝胶溶液按照质量比为(3～9)：(1～5)混合，吹悬3～5次，得到改善骨关节疾病的混悬制剂。
20、本发明第二方面在于提供一种根据本发明第一方面所述制备方法制得的改善骨关节疾病的混悬制剂。
21、本发明所具有的有益效果：
22、(1)间充质干细胞具有关节软骨再生潜力，为膝骨关节炎患者提供了有希望的潜在治疗方法；间充质干细胞为中胚层起源的干细胞，能分化为结缔组织，包括骨、软骨、肌腱、韧带和脂肪等，且具有抗炎和免疫调节作用。此外，间充质干细胞无伦理学限制、免疫原性低，同时来源丰富，其组织来源多样化；
23、(2)本发明将间充质干细胞与复合水凝胶按一定比例混合制备成混悬制剂，水凝胶完全包裹间充质干细胞，利用水凝胶具有黏性、生物相容性、生物降解性的特点，可减少间充质干细胞向受损部位以外的组织弥散，并降低间充质干细胞的弥散速度，提高受损部位的干细胞浓度，保证干细胞的分化和修复剂量，提高间充质干细胞对受损部位的抗炎和促修复作用，达到对骨关节疾病的改善、治疗效果。
24、(3)本发明所述混悬制剂中的水凝胶可将其包裹的间充质干细胞递送至受损部位，水凝胶递送细胞通常以组织修复为目标进行，水凝胶能够粘附到受损部位组织上，并且其机械性能类似于天然组织的机械性能。使混悬的间充质干细胞不仅可以在水凝胶中保留更长的时间，而且可以精准停留于靶组织，并停留于靶组织更长的时间，从而提高对骨关节疾病的改善和治疗效果。该混悬制剂在骨关节治疗领域具有良好的应用前景。
1.一种改善骨关节疾病的混悬制剂的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1中，
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤2中，
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤2中，
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤2中，
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤3中，
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤3中，
8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤4中，
9.一种权利要求1至8之一所述的制备方法制得的改善骨关节疾病的混悬制剂。
