本发明属于制药，具体涉及一种环丙胺中基因毒性杂质4-氯丁酰胺的检测方法。
背景技术：
1、环丙胺为含有三元环的脂肪胺，是一种非常重要的化工原料，广泛应用于医药合成及农药领域。作为合成喹诺酮类的起始原料，环丙胺的下游产品主要有：环丙沙星、斯帕沙星、恩氟沙星、盐酸莫西沙星等，其应用前景非常广阔。
2、目前国内主要以γ-丁内酯法作为起始原料，采用氯化亚砜或氯化氢开环得到γ-氯代丁酸或酰氯，再经环合、氨解、霍夫曼重排等反应得到环丙胺。在反应过程中，可能会生成基因毒性杂质4-氯丁酰胺。4-氯丁酰胺虽然在后续操作中可通过蒸馏去除，但由于目前无相关环丙胺中基因毒性杂质4-氯丁酰胺残留的检测方法的报道，因此无法对蒸馏处理后的环丙胺中基因毒性杂质4-氯丁酰胺进行定量分析，不能保证环丙胺下游产品的用药安全性。
技术实现思路
1、本发明的目的在于提供一种环丙胺中基因毒性杂质4-氯丁酰胺的检测方法，本发明方法可以有效得检测环丙胺中的4-氯丁酰胺，该方法具有灵敏度高，检测时间短，操作简便，重复性好的优点。
2、为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
3、本发明提供了一种环丙胺中基因毒性杂质4-氯丁酰胺的检测方法，包括以下步骤：
4、将4-氯丁酰胺对照品溶解于乙腈中，得到对照品溶液；
5、将环丙胺溶解于乙腈中，得到供试品溶液；
6、将所述对照品溶液和供试品溶液分别采用高效液相色谱-质谱联用的方法进行检测，得到对照品溶液液相色谱图和供试品溶液液相色谱图，使用外标法计算得到环丙胺中4-氯丁酰胺的含量；
7、其中，高效液相色谱检测的条件包括：流动相包括流动相a和流动相b，流动相a为甲酸水溶液，所述甲酸水溶液中甲酸的体积百分含量为0.1％，流动相b为乙腈；采用等度洗脱；
8、质谱检测的条件包括：离子源为电喷雾电离源；检测方式为正离子检测；源温度为400±10℃；离子喷雾电压为4500±10v；第一雾化气、第二雾化气与气帘气的流速分别为50±5psi，50±5psi与20±2psi；扫描方式为多反应离子监测模式。
9、优选的，所述高效液相色谱检测的条件还包括：柱温为20～30℃，流动相的流速为0.4～0.6ml·min-1。
10、优选的，所述流动相a和流动相b的体积比为50:50。
11、优选的，所述对照品溶液中4-氯丁酰胺的质量浓度为200～300ng/ml。
12、优选的，所述供试品溶液中环丙胺的质量浓度为1～2mg/ml。
13、优选的，采用高效液相色谱-质谱联用的方法进行检测时，对照品溶液和供试品溶液的进样体积为5～10μl。
14、优选的，所述质谱检测的条件还包括：
15、母离子的荷质比为122，子离子的荷质比为85.9，去簇电压为40v，入口电压为10v，碰撞能为15.94ev，碰撞室出口电压为9v。
16、优选的，所述高效液相色谱使用的色谱柱的填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；填充剂的尺寸为5μm。
17、优选的，所述色谱柱为agilent eclipse xdb-c18，色谱柱的长度为150mm，内径为4.6mm。
18、本发明提供了一种环丙胺中基因毒性杂质4-氯丁酰胺的检测方法，包括以下步骤：将4-氯丁酰胺对照品溶解于乙腈中，得到对照品溶液；将环丙胺溶解于乙腈中，得到供试品溶液；将所述对照品溶液和供试品溶液分别采用高效液相色谱-质谱联用的方法进行检测，得到对照品溶液液相色谱图和供试品溶液液相色谱图，使用外标法计算得到环丙胺中4-氯丁酰胺的含量；其中，高效液相色谱检测的条件包括：流动相包括流动相a和流动相b，流动相a为甲酸水溶液，所述甲酸水溶液中甲酸的体积百分含量为0.1％，流动相b为乙腈；采用等度洗脱；质谱检测的条件包括：离子源为电喷雾电离源；检测方式为正离子检测；源温度为400±10℃；离子喷雾电压为4500±10v；第一雾化气、第二雾化气与气帘气的流速分别为50±5psi，50±5psi与20±2psi；扫描方式为多反应离子监测模式。本发明采用高效液相色谱-质谱联用的方法，以高效液相色谱作为分离系统，质谱为检测系统，能够准确、有效地检测出环丙胺中是否含有残留的4-氯丁酰胺。本发明通过方法学验证证明了本发明提供的检测方法的专属性、灵敏度、线性与范围、准确度、重复性，表明本发明提供的检测方法采用高效液相色谱-质谱联用的方法，通过控制上述检测条件，采用外标的方法能够有效地检测出环丙胺中是否含有残留的4-氯丁酰胺。通过本发明方法有效地控制环丙胺的质量，更有利于生产下游产品。
1.一种环丙胺中基因毒性杂质4-氯丁酰胺的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱检测的条件还包括：柱温为20～30℃，流动相的流速为0.4～0.6ml·min-1。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述流动相a和流动相b的体积比为50:50。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述对照品溶液中4-氯丁酰胺的质量浓度为200～300ng/ml。
5.根据权利要求1或4所述的检测方法，其特征在于，所述供试品溶液中环丙胺的质量浓度为1～2mg/ml。
6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，采用高效液相色谱-质谱联用的方法进行检测时，对照品溶液和供试品溶液的进样体积为5～10μl。
7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述质谱检测的条件还包括：
8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱使用的色谱柱的填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；填充剂的尺寸为5μm。
9.根据权利要求1或8所述的检测方法，其特征在于，所述色谱柱为agilent eclipsexdb-c18，色谱柱的长度为150mm，内径为4.6mm。
