本发明涉及细胞制剂，具体为一种含免疫细胞活性因子的雾化剂及其在治疗肺部疾病的应用。
背景技术：
1、使用雾化剂来治疗肺部疾病时，药物在经过雾化器雾化后可通过肺泡快速吸收而直接进入血液循环，使得药物可直接到达靶部位，然而现有的雾化剂中并不携带有免疫细胞活性因子，因此本申请将免疫细胞活性因子加入到雾化肺部给药系统中，雾化给药，使得免疫细胞活性因子通过肺泡进入使用者血液，活性因子通过循环系统达到身体不同部位发挥作用，激活使用者的免疫系统，提高免疫力，从而增加免疫系统对肿瘤细胞、病毒等抗原的杀伤作用。
2、现有的雾化剂存在的缺陷是：
3、在申请文件cn110314200a中，通过将中药组合物制备成雾化剂来提高由风热外袭或素体阴虚，感受外邪引起的急、慢性咽炎，症见咽痛、咽干、咽痒、咳嗽、咽部异物感等症状，并没有考虑到现有的雾化剂在治疗肺部疾病时并不能提高使用者的免疫力。
技术实现思路
1、本发明的目的在于提供一种含免疫细胞活性因子的雾化剂及其在治疗肺部疾病的应用，以解决上述背景技术中提出的问题。
2、为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种含免疫细胞活性因子的雾化剂，包括细胞培养、活性因子提取、溶液制备、真空冷冻干燥以及雾化剂制备，雾化剂原料包括如下组分：免疫细胞活性因子、聚山梨酯、聚乙二醇、生理盐水、去离子水、银耳多糖和金银花提取物；
3、雾化剂的制备方法如下：
4、s1、从人外周血中分离出外周血单个核细胞，在体外分离为dc细胞组、t细胞组和nk细胞组，在不同的时间点分别培养；
5、s2、收集不同细胞组中培养好的细胞，进行细胞裂解，提取包含免疫细胞分泌因子的溶液；
6、s3、将提取的免疫细胞活性因子与生理盐水或去离子水混合，并添加聚山梨酯、聚乙二醇和金银花提取物，形成均匀的细胞因子混合溶液；
7、s4、对细胞因子混合溶液进行过滤除菌操作；
8、s5、密封灌装，每瓶细胞因子混合溶液3毫升，并在0～10℃下冷藏保存，有效期2年，-18℃以下冷冻保存有效期3年；
9、s6、取1支冷冻的细胞因子混合溶液，解冻至液体状态，将液态细胞因子混合溶液加入雾化仪的药液杯中，并加入1支5ml生理盐水稀释，戴好面罩，启动雾化器，将液体转化为细小的雾滴，形成含免疫细胞活性因子的雾化剂。
10、优选的，在s1中，还包括：首先从外周血单个核细胞中分离出树突状细胞即dc细胞、t细胞和nk细胞；
11、dc细胞：在合适的培养条件下，富集培养未成熟的dc细胞，添加银耳多糖，并在dc细胞成熟后使用单表位多聚抗原肽刺激，获取更长的抗原肽链，使成熟后的dc细胞携带有抗原信息；
12、t细胞：在合适的培养条件下培养t细胞，待其增殖后与携带有抗原信息的dc细胞共培养，dc细胞能够将抗原信息传导给t细胞，使t细胞被激活后大量分泌t细胞淋巴因子；
13、nk细胞：在合适的培养条件下培养nk细胞，加入自然杀伤细胞刺激因子来刺激活化nk细胞，使nk细胞大量分泌细胞因子。
14、优选的，在s2中，还包括：在净化环境下，将激活的t细胞和nk细胞通过离心法得到细胞培养液，然后通过离心和超滤的方法富集纯化细胞培养液中的活性因子，并在保证免疫细胞活性因子活性的前提下提纯免疫细胞活性因子。
15、优选的，在s3中，免疫细胞活性因子、生理盐水或去离子水、聚山梨酯、聚乙二醇和金银花提取物的比例为1：1：0.3：0.2:0.5。
16、优选的，在s4中，还包括：使用无菌的过滤器进行过滤，过滤器的孔径为0.1～0.45μm。
17、优选的，在s6中，雾滴粒径为0.5～5μm。
18、优选的，所述自然杀伤细胞刺激因子包括il-2、il-12、il-15pro、il-18、ifn-α和tnf-α。
19、优选的，所述外周血单个核细胞分离提取的操作方法如下：
20、步骤一：用无菌稀释液将血样稀释2-4倍；
21、步骤二：在50ml锥底离心管中先加入15～20ml分离液，然后缓慢加入20～30ml经稀释的血样至分离液液面之上；
22、步骤三：室温400g将离心管放入离心机内离心15～30min；
23、步骤四：将离心管从离心机中取出，缓缓地吸去最上层，避免接触单个核细胞层；
24、步骤五：然后将单个核细胞层缓慢转移到另一支50ml锥底离心管中；
25、步骤六：往步骤五中的锥底离心管内加入无菌洗涤液，并在混匀后，室温下300g离心10min，离心结束后弃掉上清液，得到目标细胞；
26、步骤七：将目标细胞重悬于30～50ml的无菌洗涤液中，室温200g离心10～15min，离心结束后弃掉上清液，去除残余血小板；
27、步骤八：将步骤七中去除残余血小板的目标细胞用缓冲液或培养基重悬后进行培养。
28、优选的，所述治疗肺部疾病的应用，包括使用雾化剂补充免疫细胞活性因子。
29、与现有技术相比，本发明的有益效果是：
30、1、本发明通过在制备雾化剂时添加免疫细胞活性因子，将其制备成制剂随雾化器雾化后吸入肺部，补充人体内免疫细胞活性因子，提高免疫力，清除病原微生物感染，预防重大慢性病，还能够调节免疫系统，抑制肿瘤生长、复发和转移。
31、2、本发明通过在培养未成熟的dc细胞时添加银耳多糖，帮助dc细胞摄取更多的抗原肽，延长dc细胞的抗原肽链，从而促进dc细胞的成熟与细胞因子的分泌，进而能够使用dc细胞激活t细胞并加强t细胞的杀伤效果。
32、3、本发明通过聚山梨酯和聚乙二醇的添加，增加制备雾化剂时混合溶液的蛋白质或其他生物活性分子的溶解度，防止它们聚集或沉淀，同时还能够减少混合溶液的表面张力，使溶液更加均匀，有助于雾化过程中形成细小的雾滴，提高雾化剂的使用效果。
33、4、本发明在培养nk细胞时通过添加自然杀伤细胞刺激因子来刺激激活nk细胞的增殖与活化，提高nk细胞的增殖能力。
1.一种含免疫细胞活性因子的雾化剂，其特征在于，包括细胞培养、活性因子提取、溶液制备、真空冷冻干燥以及雾化剂制备，雾化剂原料包括如下组分：免疫细胞活性因子、聚山梨酯、聚乙二醇、生理盐水、去离子水、银耳多糖和金银花提取物；
2.根据权利要求1所述的一种含免疫细胞活性因子的雾化剂，其特征在于，在s1中，还包括：首先从外周血单个核细胞中分离出树突状细胞即dc细胞、t细胞和nk细胞；
3.根据权利要求1所述的一种含免疫细胞活性因子的雾化剂，其特征在于，在s2中，还包括：在净化环境下，将激活的t细胞和nk细胞通过离心法得到细胞培养液，然后通过离心和超滤的方法富集纯化细胞培养液中的活性因子，并在保证免疫细胞活性因子活性的前提下提纯免疫细胞活性因子。
4.根据权利要求1所述的一种含免疫细胞活性因子的雾化剂，其特征在于，在s3中，免疫细胞活性因子、生理盐水或去离子水、聚山梨酯、聚乙二醇和金银花提取物的比例为1：1：0.3：0.2:0.5。
5.根据权利要求1所述的一种含免疫细胞活性因子的雾化剂，其特征在于：在s4中，还包括：使用无菌的过滤器进行过滤，过滤器的孔径为0.1～0.45μm。
6.根据权利要求1所述的一种含免疫细胞活性因子的雾化剂，其特征在于：在s6中，雾滴粒径为0.5～5μm。
7.根据权利要求2所述的一种含免疫细胞活性因子的雾化剂，其特征在于：所述自然杀伤细胞刺激因子包括il-2、il-12、il-15pro、il-18、ifn-α和tnf-α。
8.根据权利要求1所述的一种含免疫细胞活性因子的雾化剂，其特征在于，所述外周血单个核细胞分离提取的操作方法如下：
9.一种含免疫细胞活性因子的雾化剂在治疗肺部疾病的应用，适用于权利要求1-8任一项所述的一种含免疫细胞活性因子的雾化剂，其特征在于：所述治疗肺部疾病的应用，包括使用雾化剂补充免疫细胞活性因子。
