本发明涉及生物医学检测领域，具体而言，涉及一种高级别浆液性卵巢癌血浆细胞外囊泡蛋白(vtcn1蛋白)诊断标志物及其筛选方法应用。
背景技术：
1、上皮性卵巢癌是致死率较高的妇科恶性肿瘤。其中，高级别浆液性癌(high-gradeserous ovarian carcinoma，hgsoc)病理类型最为常见，其发病隐匿且扩散迅速，导致多数患者确诊时已处于疾病晚期，5年生存率仅为31％。因此早期诊断是卵巢癌研究的重点。
2、当前高级别浆液性癌常用的筛查包括血清糖类抗原125(carbohydrate antigen125，ca125)和经阴道超声，一些随机前瞻性试验和单臂前瞻性试验结果表明血清ca125和经阴道超声的筛查方法的阳性预测值低，低于50％。而筛查的危害包括在多轮筛查中假阳性率高达44％，这可能造成不必要的压力和高达3.2％的非必要的手术。基于大量人群的研究表明，与癌症无关的疾病可能影响ca125水平，例如ca125可在卵巢良性囊肿的病例中升高，鉴于其低特异性，ca125不被认为是卵巢癌很好的诊断标志物。
3、细胞外囊泡(extracellular vesicle,ev)是纳米级大小的脂质双分子层微囊泡，根据其来源可分为细胞上清、体液和组织来源三大类。组织来源的ev是目前细胞外囊泡领域的最新研究方向，指的是组织细胞间隙空间中的ev。
技术实现思路
1、癌症的非侵入性“液体活检”概念包括患者外周循环中的细胞外囊泡。然而，ev被所有细胞类型释放到细胞外空间，因此，体液中存在的囊泡代表了不同ev亚群的异质混合物。为了探索肿瘤患者与良性疾病患者之间显著差异的血浆中组织来源的ev，本发明通过结合组织来源ev和血浆来源ev的高通量蛋白质组学筛选出潜在的ev蛋白标记用于hgsoc液体活检，并使用验证队列中血浆来源的ev进行初步验证其诊断效能，从而克服现有技术中高级别浆液性癌早期筛查不准确，假阳性率高的缺陷，开发出针对高级别浆液性卵巢癌的诊断试剂。对于诊断为盆腔包块的人群，血浆ev来源的vtcn1是鉴别卵巢癌(尤其是hgsoc)和非恶性肿瘤的潜在诊断标志物，与血清ca125联用可提高诊断特异度。
2、为了解决上述技术问题，本发明提供一种检测vtcn1蛋白表达水平的试剂在制备诊断高级别浆液性卵巢癌产品中的应用，其中，所述vtcn1蛋白为来源于肿瘤组织细胞外囊泡的vtcn1蛋白和/或血浆细胞外囊泡的vtcn1蛋白。
3、本发明采用elisa方法对vtcn1蛋白进行定量分析，需要说明的是，elisa仅为举例，其他可以对vtcn1进行定量的方法应视为同等技术手段的替换。
4、高级别浆液性卵巢癌血浆细胞外囊泡蛋白诊断标志物vtcn1(accession：q7z7d3)是由282个氨基酸组成，包括一个细胞外结构域，一个大的疏水跨膜结构域和一个仅由两个氨基酸残基组成的细胞内结构域，也称为b7h4，b7x或b7s1；来源于肿瘤组织细胞外囊泡和血浆细胞外囊泡。
5、发明人在研究了不同来源ev后，发现肿瘤组织来源的ev显著优势如下：①相比于细胞上清来源，肿瘤组织ev更能真实反映三维微环境中的肿瘤细胞；②相比于体液来源，肿瘤组织ev更能凸显肿瘤细胞的特异性。因此，血浆中的肿瘤组织来源的ev可能作为无创肿瘤诊断或评估预后的“液体活检”。
6、高级别浆液性卵巢癌血浆细胞外囊泡蛋白诊断标志物vtcn1的筛选过程包含以下步骤：1)组织和血浆细胞外囊泡蛋白的提取与鉴定；2)组织细胞外囊泡与血浆细胞外囊泡的蛋白组学分析；3)高级别浆液性癌血浆细胞外囊泡的标记物筛选；4)高级别浆液性癌血浆细胞外囊泡的标记物诊断价值的验证。组织和血浆细胞外囊泡蛋白的提取方法为酶孵育联合超速离心法，可以有效从人的卵巢癌组织中分离具有真正ev物理和生物学特性的高质量ev。组织细胞外囊泡与血浆细胞外囊泡的蛋白组学分析可以辅助高效的筛选出诊断标志物；最后通过验证队列结合elisa方法定量分析血浆细胞外囊泡的vtcn1，验证了筛选出的诊断标记物vtcn1具有在高级别浆液性癌常用的筛查的诊断价值。
7、与现有技术相比，本发明的技术方案具有如下有益效果：
8、1、本申请经由肿瘤组织细胞外囊泡和血浆细胞外囊泡的筛选确定了血浆细胞外囊泡vtcn1蛋白可以作为高级别浆液性癌的诊断标记物，对其进行了检测可以实现对高级别浆液性癌的早期精确诊断。
9、2、本申请的高级别浆液性癌早期诊断方法结合elisa可以对样本血浆细胞外囊泡进行定量分析，并通过与阈值进行比较，判定检测样本的阴性或阳性；检测结果特异度及灵敏度更高。
1.检测vtcn1蛋白表达水平的试剂在制备诊断高级别浆液性卵巢癌产品中的应用，其中，所述vtcn1蛋白为来源于肿瘤组织细胞外囊泡的vtcn1蛋白和/或血浆细胞外囊泡的vtcn1蛋白。
2.一种高级别浆液性卵巢癌的诊断试剂，其特征在于，包含用于对vtcn1蛋白进行定量分析的检测试剂，所述vtcn1蛋白为来源于肿瘤组织细胞外囊泡的vtcn1蛋白和/或血浆细胞外囊泡的vtcn1蛋白。
3.根据权利要求2所述的高级别浆液性卵巢癌的诊断试剂，其特征在于，所述用于对vtcn1蛋白进行定量分析的检测试剂是基于elisa方法的检测试剂。
4.根据权利要求2所述的高级别浆液性卵巢癌的诊断试剂，其特征在于，所述诊断试剂还包含血清糖类抗原ca125的诊断试剂。
