本发明属于医药，具体涉及从薄叶红厚壳植物干燥茎叶中分离得到一种新的黄酮类化合物及其制备方法和应用。
背景技术：
1、cyp1a1酶为一种芳烃羟化酶，属于细胞色素p450 1系酶家族，广泛存在于胎盘、肺、淋巴、胃肠道和皮肤等肝外组织中。cyp1a1酶不仅能够参与多环芳烃、杂环芳香胺等前致癌物或致突变物的代谢活化，且cyp1a1基因多态性与口腔癌、肺癌、乳腺癌、肝癌、结肠癌等密切相关。例如，苯并[a]芘(b[a]p)是国际癌症研究机构确认的人类一类致癌物，cyp1a1在苯并[a]芘的代谢活化中起到关键作用。首先b[a]p经cyp1a1酶氧化转化为b[a]p-7,8-环氧化物，后者在环氧化物水解酶作用下转化生成(+/-)-b[a]p-反式-7,8-二氢二醇(bpd)，bpd经cyp1a1酶代谢活化最终转化为终致癌物b[a]p-反式-7,8-二氢二醇-9,10-环氧化物(bpde)，bpde能够与dna、蛋白质等发生共价结合，形成加合物，导致生物大分子损伤，从而引起细胞癌变。因此，寻找靶向作用于cyp1a1酶的抑制剂是发现新型抗肿瘤药物可行的途径，具有较好的临床应用前景。研究表明，来自药用植物的天然产物化学结构多样、生物契合度高，是发现cyp1a1酶抑制剂重要的来源，其中，黄酮类化合物是主要类型之一。
2、薄叶红厚壳(calophyllum membranaceum gardn.et champ.)又名跌打将军、薄叶胡桐、横经席，为藤黄科(clusiaceae)红厚壳属(calophyllum)灌木至小乔木。薄叶红厚壳的根在民间可以用于治疗跌打损伤，肾虚腰痛，风湿骨痛，能祛瘀止痛，补肾强腰；叶可治外伤出血。现代研究表明，薄叶红厚壳含有黄酮类、香豆素类、萜类等多种类型的化合物。
技术实现思路
1、本发明第一目的是提供一种新的黄酮类化合物的制备方法，第二目的在于提供所述黄酮类化合物在制备cyp1a1酶抑制剂中的应用。
2、本发明从薄叶红厚壳干燥茎叶中分离得到一种新的黄酮类化合物，具有如下结构：
3、
4、本发明一目的在于提供所述新的黄酮类化合物的制备方法，以藤黄科(guttiferae)红厚壳属(calophyllum)植物薄叶红厚壳(calophyllum membranaceumgardn.et champ.)干燥茎叶为原料，经浸膏提取、mci划段脱色、硅胶柱色谱、开放ods柱色谱、sephadex lh-20凝胶柱色谱、半制备hplc色谱分离制备获得。具体包括以下步骤：
5、(1)取薄叶红厚壳干燥茎叶，粉碎后，使用醇或醇水溶液浸泡提取，优选体积百分比为95％乙醇水溶液常温浸泡提取3次，每次24小时，浓缩得到浸膏；
6、(2)将步骤(1)所得的粗提浸膏用水充分溶解后，过滤后通过mci gel chp 20p柱色谱，先使用体积百分比70％甲醇-水溶液洗脱除杂，之后使用体积百分比95％甲醇-水溶液洗脱4～6个柱体积，收集95％甲醇-水溶液洗脱组分，浓缩得到浸膏fr f；
7、(3)将步骤(2)得到的浸膏fr f经硅胶柱层析，使用体积比200:1、100:1、50:1、30:1、15:1、8:1、4:1、2:1、1:1、1:2、1:4、1:8、1:15、0:1的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂梯度洗脱，每个梯度洗脱4～6个柱体积，得到fr 1～18共18个组分段；
8、(4)将步骤(3)中得到的fr.12通过开放ods柱色谱分离，使用体积比30:70、40:60、50:50、60:40、70:30、80:20、90:10、100:0的甲醇-水混合溶剂梯度洗脱，每个梯度洗脱4～6个柱体积，得到fr.12-1～12-14共14个组分段；
9、(5)将步骤(4)中得到的fr.12-8，经sephadex lh-20凝胶柱色谱，使用体积比3:1的二氯甲烷-甲醇混合溶剂等度洗脱2个柱体积，得到fr.12-8-1～12-8-9共9个组分段；
10、(6)步骤(5)中得到的fr.12-8-5组分，经半制备hplc色谱，以体积百分比75％的乙腈-水混合溶液为流动相洗脱，优选色谱柱为zorbax sb-c18(agilent，9.4mm×250mm)，流速为3ml/min，检测波长为254nm，收集保留时间为20.1min的色谱峰得到化合物ⅰ；
11、本发明另一目的在于提供所述黄酮类化合物在制备cyp1a1酶抑制剂中的应用，本发明通过体外cyp1系酶活性抑制实验测定所述化合物对cyp1a1酶、cyp1a2酶和cyp1b1酶的抑制活性，结果显示本发明所述化合物ⅰ对cyp1a1酶抑制率为31.31±3.26％，而其对cyp1a2和cyp1b1酶的抑制作用无统计学意义，因此本发明所述黄酮类化合物ⅰ能够靶向抑制cyp1a1酶，可作为开发cyp1a1酶抑制药物的先导性化合物，也可用于制备预防或治疗前致癌物/致突变物经cyp1a1酶代谢激活引起的dna损伤和癌症的药物。所述前致癌物/致突变物包括多环芳烃、杂环芳香胺，如苯并[a]芘、7h-甲基二苯并咔唑、2-氨基-1-甲基-6-苯基咪唑并[4,5-b]吡啶。所述癌症包括肺癌、乳腺癌、结肠癌。
12、本发明具有如下优点：
13、(1)本发明以藤黄科红厚壳属植物薄叶红厚壳干燥茎叶为原料，经浸膏提取、mci划段脱色、硅胶柱色谱、开放ods柱色谱、sephadex lh-20凝胶柱色谱、半制备hplc色谱分离得到一种新的黄酮类化合物，制备方法操作简单，获得的黄酮类化合物纯度达到98％以上，为黄酮类化合物的制备提供了科学的参考依据。
14、(2)本发明所述黄酮类化合物ⅰ能够靶向抑制cyp1a1酶活性，可作为开发抑制cyp1a1酶活性药物的先导性化合物，有望预防或治疗由多环芳烃、杂环芳香胺等前致癌物/致突变物引起的dna损伤和癌症，在抗肺癌、抗乳腺癌、抗结肠癌等药物开发领域有着潜在的较好的应用前景。
1.一种新的黄酮类化合物，其特征在于所述化合物具有如下结构：
2.如权利要求1所述的黄酮类化合物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
3.如权利要求2所述的黄酮类化合物的制备方法，其特征在于：
4.如权利要求1所述黄酮类化合物在制备cyp1a1酶抑制剂中的应用。
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述cyp1a1酶抑制剂为预防或治疗由前致癌物或致突变物引起的癌症的药物。
6.如权利要求5所述的应用，其特征在于所述前致癌物或致突变物包括多环芳烃、杂环芳香胺。
7.如权利要求5所述的应用，其特征在于所述癌症包括肺癌、乳腺癌或结肠癌。
