本发明涉及核苷酸生产，尤其涉及一种生产呈味核苷酸二钠的方法及其应用。
背景技术：
1、食品的滋味是由食品中的水溶性成分构成，其中包括核苷酸、氨基酸、缩氨酸、有机酸、有机碱以及无机离子。上述各种成分至少带有咸、甜、酸、苦、鲜五种滋味中的一种味道。其中呈味核苷酸包括肌苷酸、鸟苷酸、胞苷酸、尿苷酸和黄苷酸等。呈味核苷酸对甜味、肉味、醇厚感有增效作用，对酸味、苦味、腥味、焦味等不良风味有消除或抑制作用。从而能够减少添加量，降低成本，而且鲜味更圆润。所以呈味核苷酸常被广泛地添加到各类调味品如鸡精、鸡粉、增鲜味精、酱油、调味包、汤料、番茄酱、蛋黄酱等中，强化滋味，改善口感。
2、呈味核苷酸二钠，又名5’-呈味核苷酸二钠，包含5’-肌苷酸二钠(imp)和5’-鸟苷酸二钠(gmp)，是新一代的核苷酸类食品增鲜剂，可直接加入到食品中，起增鲜作用。是方便面调味包、调味品如鸡精、鸡粉和增鲜酱油等的主要呈味成分之一。呈味核苷酸二钠还具有辅助抗肿瘤、提高机体免疫力以及调节机体营养代谢等作用，在食品、医药、农业行业领域中有广泛的用途。
3、目前呈味核苷酸二钠的制备方法主要有以下几种：
4、(1)微生物发酵法：利用生产菌株进行生物发酵直接获得产物。该方法副产物少，成本低，但此法的应用受到微生物特性的限制较大。
5、(2)化学合成法：肌苷或鸟苷在磷酸三乙酯与三氯氧磷的作用下，通过化学反应合成5’-肌苷酸二钠(imp)与5’-鸟苷酸二钠(gmp)。该方法专一性强，副产物少，但化学原料等有机溶剂毒性强，对人员及环境危害较大，工艺条件恶劣，且后续提取工艺复杂，成本较高。
6、(3)生物催化法：肌苷或鸟苷与磷酸供体在磷酸转移酶的作用下合成5’-肌苷酸二钠(imp)与5’-鸟苷酸二钠(gmp)。生物催化法具有专一性强，磷酸供体来源广泛，价格低廉，提取工艺简单易操作，原料对环境友好等优势。
7、但现有生物催化法制备5’-肌苷酸二钠(imp)与5’-鸟苷酸二钠(gmp)存在转化效率低问题。而且提取技术也有瓶颈，制备的呈味核苷酸二钠纯度低，或纯度与收率不能兼顾。
技术实现思路
1、本发明提供一种生产呈味核苷酸二钠的方法及其应用。
2、第一方面，本发明提供一种生产呈味核苷酸二钠的方法，包括：肌苷或鸟苷与磷酸供体加水混匀形成悬浮溶液，加入磷酸转移酶进行酶催化反应，降温析磷、脱色、降温结晶，获得高纯度的呈味核苷酸二钠；
3、所述降温析磷分为两步，第二步中，ph控制在9.2-10.5之间，梯度降温至5-8℃。
4、本发明提供的一种生产呈味核苷酸二钠的方法中，所述降温析磷为：
5、(1)收集酶催化反应液的ph控制在8.9-9.2之间，梯度降温至8-15℃，温度下降速度为每小时降4-5℃，离心收集得到的清液和副产磷酸盐1；
6、(2)将步骤(1)得到的清液的ph控制在9.2-10.5之间，梯度降温至5-8℃，温度下降速度为每小时降3-4℃，离心收集得到的清液和副产磷酸盐2。
7、本发明提供的一种生产呈味核苷酸二钠的方法中，编码所述磷酸转移酶的核苷酸序列如seq id no.1、seq id no.2或seq id no.3所示。
8、本发明提供的一种生产呈味核苷酸二钠的方法中，所述磷酸供体为酸式焦磷酸、焦磷酸盐、三聚磷酸、三聚磷酸盐、四聚磷酸、四聚磷酸盐、六偏磷酸盐的至少一种；
9、本发明提供的一种生产呈味核苷酸二钠的方法中，所述焦磷酸盐、三聚磷酸盐、四聚磷酸盐、六偏磷酸盐为钠盐和钾盐。
10、本发明提供的一种生产呈味核苷酸二钠的方法中，所述磷酸供体与所述肌苷或鸟苷的摩尔比为(0.5～2.5)：1.0。
11、本发明提供的一种生产呈味核苷酸二钠的方法中，所述磷酸转移酶与肌苷的质量比为(0.5～2.0):1.0；磷酸转移酶与鸟苷的质量比为(1.0～4.0):1.0。
12、本发明提供的一种生产呈味核苷酸二钠的方法中，所述酶催化反应的ph维持在4.1-4.9，酶催化反应的温度为31℃-39℃之间，反应时间为2-8小时。
13、本发明提供的一种生产呈味核苷酸二钠的方法中，所述脱色具体为降温析磷得到的清液加热到60-80℃，添加0.2-0.5wt％的活性炭，搅拌20-60分钟后离心分离，收集得到的脱色清液。
14、本发明提供的一种生产呈味核苷酸二钠的方法中，所述降温结晶具体为ph控制在6.5-8.5，梯度降温至5-15℃，温度下降速度为每小时降3-5℃，收集呈味核苷酸二钠的固体结晶。
15、由上述技术方案可知，本发明提供了一种呈味核苷酸二钠的制备方法。肌苷或鸟苷与磷酸供体加水混匀形成悬浮溶液，加入磷酸转移酶进行酶催化反应，收集酶催化反应液两步调ph降温析磷、脱色、降温结晶，获得高纯度的呈味核苷酸二钠。本发明所述制备方法生物催化专一性强，操作简单，可快速的获得呈味核苷酸二钠。本发明所述制备方法制得的呈味核苷酸二钠产品5’-肌苷酸二钠和5’-鸟苷酸二钠纯度高，纯度可达到98.0％以上，达到食品级要求。本发明所述制备方法原材料简单易获得，反应条件温和，能耗低，可快速放大应用到工业化生产上，同时实现绿色生产的理念。
16、本发明的有益效果在于：
17、(1)本发明降温析磷的ph控制分为两阶段，第一阶段ph8.9-9.2，副产磷酸盐1(主要为磷酸二氢钠)，第二阶段ph9.2-10.5，副产磷酸盐2(主要为磷酸氢二钠和磷酸三钠)；这种两阶段控ph和分离的方法为首次报道，可大大减少调ph的氢氧化钠用量，并减少呈味核苷酸二钠在析磷过程中的损失，既提高了产品的纯度，又提高了收率，同时减少了氢氧化钠物料消耗，降低了生产成本。
18、(2)本发明采用自制的磷酸转移酶，酶催化反应时间大幅缩短，专利cn111286521a的反应时间为8-24h，本发明的反应时间为2-8h。本发明发现，缩短了酶催化反应时间后，针对所获得的酶反应液可以采用两步调ph降温析磷的方法获得高纯度的产品。
1.一种生产呈味核苷酸二钠的方法，其特征在于，包括：肌苷或鸟苷与磷酸供体加水混匀形成悬浮溶液，加入磷酸转移酶进行酶催化反应，降温析磷、脱色、降温结晶，获得高纯度的呈味核苷酸二钠；
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述降温析磷为：
3.根据权利要求1-2任一项所述的方法，其特征在于，编码所述磷酸转移酶的核苷酸序列如seq id no.1、seq id no.2或seq idno.3所示。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述磷酸供体为酸式焦磷酸、焦磷酸盐、三聚磷酸、三聚磷酸盐、四聚磷酸、四聚磷酸盐、六偏磷酸盐的至少一种。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述焦磷酸盐、三聚磷酸盐、四聚磷酸盐、六偏磷酸盐为钠盐和钾盐。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述磷酸供体与所述肌苷或鸟苷的摩尔比为(0.5～2.5)：1.0。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述磷酸转移酶与肌苷的质量比为(0.5～2.0):1.0；磷酸转移酶与鸟苷的质量比为(1.0～4.0):1.0。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述酶催化反应的ph维持在4.1-4.9，酶催化反应的温度为31℃-39℃之间，反应时间为2-8小时。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述脱色具体为降温析磷得到的清液加热到60-80℃，添加0.2-0.5wt％的活性炭，搅拌20-60分钟后离心分离，收集得到的脱色清液。
10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述降温结晶具体为ph控制在6.5-8.5，梯度降温至5-15℃，温度下降速度为每小时降3-5℃，收集呈味核苷酸二钠的固体结晶。
