本发明属于生物，涉及一种刺激成熟b细胞分裂的组合物及其应用。
背景技术：
1、慢性b淋巴细胞增殖性疾病(b-clpd)是一组可累及骨髓和外周血的成熟b淋巴细胞克隆增殖性疾病，其中慢性淋巴细胞白血病(cll)是临床最为常见的一类b-clpd。细胞遗传学分析对b-clpd的诊断、危险分层、预后判断及诊疗方案选择均具有重要意义，但由于常规细胞遗传学(cc)获取的成熟b淋巴细胞有丝分裂指数低，进而导致疾病检出率低，且荧光原位杂交(fish)只能检测特异位点的异常，不能全面分析染色体异常，因此，b-clpd的诊断与鉴别诊断一直是国内临床工作的难点。有研究发现，未甲基化胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸寡脱氧核苷酸(cpg-odn)刺激cll细胞增殖，可明显提高染色体核型培养成功率和染色体核型异常检出率，但未对非cll的其他b-clpd进行相关研究。
2、因此，为提高cll及其他b-clpd患者的疾病检出率，亟需提供一种刺激成熟b细胞肿瘤细胞体外培养的组合物，用于提高对cll和非cll的其他b-clpd的染色体核型培养成功率和染色体核型异常检出率的测定。
技术实现思路
1、针对现有技术的不足和实际需求，本发明提供一种刺激成熟b细胞分裂的组合物及其应用，显著提高了b-clpd的染色体核型培养成功率及异常检出率。
2、为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：
3、第一方面，本发明提供了一种刺激成熟b细胞分裂的组合物，所述组合物包括未甲基化胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸寡脱氧核苷酸、白细胞介素2和稳定剂。
4、本发明的刺激成熟b细胞分裂的组合物能够提高b-clpd的染色体核型培养成功率及异常检出率，有助于更加全面地检出b-clpd的遗传学异常。
5、优选地，所述未甲基化胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸寡脱氧核苷酸包括全硫代修饰的未甲基化胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸寡脱氧核苷酸。
6、优选地，所述全硫代修饰的未甲基化胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸寡脱氧核苷酸的序列包括如seq id no.1所示的序列。
7、seq id no.1：tcgtcgctgtctccgcttcttcttgcc。
8、优选地，所述稳定剂包括谷丙氨酸二肽或tris-hcl。
9、优选地，所述未甲基化胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸寡脱氧核苷酸、白细胞介素2和谷丙氨酸二肽的质量比为(800-1000):(20-50):1。
10、上述800-1000中的具体点值可以选择800、850、900、950、1000等。
11、上述20-50中的具体点值可以选择20、25、30、35、40、45、50等。
12、第二方面，本发明提供了一种刺激成熟b细胞分裂的方法，所述方法包括：将第一方面所述的刺激成熟b细胞分裂的组合物使用纯水或tris-hcl缓冲液溶解得到混合液，再将含有成熟b细胞肿瘤细胞的样品、混合液和培养基混合培养。
13、优选地，所述混合液中未甲基化胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸寡脱氧核苷酸的终浓度为10-15cd/ml(例如10cd/ml、12cd/ml、14cd/ml、15cd/ml)。
14、优选地，所述混合液中白细胞介素2的终浓度为20万-40万/ml(例如20万/ml、30万/ml、40万/ml)。
15、优选地，所述混合液中稳定剂的终浓度为1-4mmol/l(例如1mmol/l、2mmol/l、3mmol/l、4mmol/l)。
16、优选地，所述tris-hcl缓冲液的ph为7.2-7.6。
17、优选地，所述混合液和培养基的体积比为1:(50-100)。
18、上述50-100中的具体点值可以选择50、65、80、95、100等。
19、本发明中，培养基可以选择所有本领域适用于培养骨髓细胞的培养基，例如gbico、达辉、乐辰的骨髓培养基。
20、优选地，所述含有成熟b细胞肿瘤细胞的样品包括慢性淋巴细胞增殖性疾病的骨髓或外周血。
21、优选地，所述培养的时间为70-80h(例如70h、72h、75h、80h)。
22、与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
23、(1)本发明的刺激成熟b细胞分裂的组合物能够提高b-clpd的染色体核型培养成功率及异常检出率，有助于更加全面地检出b-clpd的遗传学异常；
24、(2)本发明刺激成熟b细胞分裂的方法操作简单，便捷，大幅度节约成本；
25、(3)本发明刺激成熟b细胞分裂的组合物与同类进口分装产品比较，实验结果一致，刺激培养后，本发明的组合物在中期分裂相数目及异常比例优于同类产品，效果稳定，刺激培养阳性率高。
1.一种刺激成熟b细胞分裂的组合物，其特征在于，所述组合物包括未甲基化胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸寡脱氧核苷酸、白细胞介素2和稳定剂。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述未甲基化胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸寡脱氧核苷酸包括全硫代修饰的未甲基化胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸寡脱氧核苷酸。
3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述全硫代修饰的未甲基化胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸寡脱氧核苷酸的序列包括如seq id no.1所示的序列。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的组合物，其特征在于，所述稳定剂包括谷丙氨酸二肽或tris-hcl。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的组合物，其特征在于，所述未甲基化胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸寡脱氧核苷酸、白细胞介素2和稳定剂的质量比为(800-1000):(20-50):1。
6.一种刺激成熟b细胞分裂的方法，其特征在于，所述方法包括：将权利要求1-5中任一项所述的刺激成熟b细胞分裂的组合物使用纯水或tris-hcl缓冲液溶解得到混合液，再将含有成熟b细胞肿瘤细胞的样品、混合液和培养基混合培养。
7.根据权利要求6所述的刺激成熟b细胞分裂的方法，其特征在于，所述混合液中未甲基化胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸寡脱氧核苷酸的终浓度为10-15cd/ml；
8.根据权利要求6或7所述的刺激成熟b细胞分裂的方法，其特征在于，所述混合液和培养基的体积比为1:(50-100)。
9.根据权利要求6-8中任一项中所述的刺激成熟b细胞分裂的方法，其特征在于，所述含有成熟b细胞肿瘤细胞的样品包括慢性淋巴细胞增殖性疾病的骨髓或外周血。
10.根据权利要求6-9中任一项中所述的刺激成熟b细胞分裂的方法，其特征在于，所述培养的时间为70-80h。
