本发明涉及中草药,尤其是涉及一种人参块茎外泌体样囊泡及其制备方法与应用。
背景技术:
1、根据国际癌症研究机构最新数据(globocan 2020)报告,2020年全世界有接近1930万新发癌症病例和近1000万癌症死亡病例。其中肺癌仍然是癌症性死亡的主要原因,估计有180万人死亡(18%)。目前临床最有效的肺癌治疗手段仍是手术和术后放、化疗。在长期的化疗药研究过程中,也发现了包括奥希替尼、吉非替尼、布格替尼、赛沃替尼等在内的大量化疗药,且大大提高了肺癌患者生存期,并降低了患者复发和死亡的风险。但化疗耐药和多药耐药仍是严重影响患者预后的关键,因此,寻求新的治疗肺癌的药物是我们研究的热点,也是具有重要临床意义。
2、随着传统中医药的发展,人们发现中草药在改善肿瘤微环境中发挥重要作用,其中包括百草之王的人参。人参为五加科人参属植物人参panax ginseng c.a.mey.的根,具有大补元气,补脾益肺,生津,安神益智的功效。但如何在传统中药炮制的基础上提高药效和安全性一直是人们关注的热点。
3、《神农本草经》将人参誉为“百草之王”、“百药之长”,《本草经疏》记载:人参,本补五脏真阳之气者也,对于真阳衰少、肾气乏绝、阳道不举诸症尤有良效;《神农百草经》记载:人参有“补五脏、安精神、定魂魄、止惊悸、除邪气、明目开心益智”的功效,“久服轻身延年”。几千年来,中草药中人参都被列为“上品”;《本经》这样描述人参:补五脏,安精神,止惊悸,除邪气,明目,开心益智。人参主要活性成分为人参皂苷,包括人参皂苷rh2、rb1、rb2、rc等。人们也对人参中的主要成分进行了大量研究,结果证实人参皂苷同时具有驱邪和扶正的功效,低浓度可改善微环境(包括免疫微环境),高浓度可抑制甚至杀死肿瘤细胞。但是人参皂苷的水溶解性较差,在使用时较为繁琐,且其安全性还有待进一步确定。
技术实现思路
1、本发明的目的就是为了克服人参皂苷水溶性差、安全性不稳定等问题而提供一种人参块茎外泌体样囊泡及其制备方法与应用。
2、本发明的目的可以通过以下技术方案来实现:
3、本发明的技术方案之一为提供一种人参块茎外泌体样囊泡的制备方法,包括如下步骤:
4、s1、将人参块茎榨汁,过滤后收集滤液;
5、s2、将s1步骤得到的滤液离心,收集沉淀,得到人参块茎外泌体样囊泡。
6、在一些具体实施方式中,于s1步骤,将人参块茎与pbs溶液按照1g:1ml比例混合后榨汁。
7、作为优选的,pbs溶液为经4℃预冷后的pbs溶液。
8、在一些具体实施方式中,于s1步骤,将人参块茎榨汁后经0.45μm滤膜过滤,收集滤液。
9、在一些具体实施方式中,于s2步骤,将滤液于4℃、2000-120000g转速下离心多次,每次离心时间为15-135min。
10、在一些具体实施方式中,于s2步骤,将滤液于4℃、2000g转速下离心15min,收集上清液i;将上清液i于4℃,10000g离心30min,收集上清液ii;将上清液ii于4℃,120000g离心90min,收集沉淀。
11、本发明的技术方案之二为提供一种人参块茎外泌体样囊泡,基于上述技术方案之一所述的制备方法得到。
12、本发明的技术方案之三为提供一种人参块茎外泌体样囊泡溶液的制备方法,该方法包括:将如上述技术方案之二所述的人参块茎外泌体样囊泡溶于生理盐水得到。
13、本发明的技术方案之四为提供一种人参块茎外泌体样囊泡的应用,所述人参块茎外泌体样囊泡在制备抗癌药物中的应用。
14、在一些具体实施方式中,所述抗癌药物为抑制肺癌细胞增殖和/或迁移的药物。
15、在一些具体实施方式中,所述抗癌药物为抑制肿瘤生长和/或转移的药物。
16、在一些具体实施方式中,所述抗癌药物为降低ki67表达的药物。
17、与现有技术相比,本发明具有以下有益效果:
18、(1)本发明以中草药植物为对象,成功分离制备出一种人参外泌体囊泡,制备工艺简单,容易大量获取。
19、(2)本发明制备得到的人参块茎外泌体样囊泡能够溶解于生理盐水,可作为传递人参皂苷等活性成分的载体,克服了人参皂苷等其它活性成分溶解性差的问题。
20、(3)本发明制备得到的人参块茎外泌体样囊泡可被肿瘤细胞摄取并抑制肿瘤细胞生长以及转移,有效抑制了肿瘤的恶性进展。
21、(4)本发明制备得到的人参块茎外泌体样囊泡能结合应用于传统中药领域,具有足够的安全性、有效药物成分的稳定性、低毒性和可溶性,应用前景广泛。
22、(5)本发明提供的人参块茎外泌体样囊泡能很好的避免中药有效成分的活性丧失,在肿瘤治疗中具有广阔的应用前景。
1.一种人参块茎外泌体样囊泡的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
2.根据权利要求1所述的人参块茎外泌体样囊泡的制备方法,其特征在于,于s1步骤,将人参块茎与pbs溶液按照1g:1ml比例混合后榨汁;
3.根据权利要求1所述的人参块茎外泌体样囊泡的制备方法,其特征在于,于s2步骤,将滤液于4℃、2000-120000g转速下离心多次,每次离心时间为15-135min。
4.根据权利要求3所述的人参块茎外泌体样囊泡的制备方法,其特征在于,于s2步骤,将滤液于4℃、2000g转速下离心15min,收集上清液i;将上清液i于4℃,10000g离心30min,收集上清液ii;将上清液ii于4℃,120000g离心90min,收集沉淀。
5.一种基于权利要求1-4任一所述的制备方法得到的人参块茎外泌体样囊泡。
6.一种人参块茎外泌体样囊泡溶液的制备方法,其特征在于,该方法包括:将如权利要求5所述的人参块茎外泌体样囊泡溶于生理盐水得到。
7.一种如权利要求5所述的人参块茎外泌体样囊泡的应用,其特征在于,所述人参块茎外泌体样囊泡在制备抗癌药物中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用,其特征在于,所述抗癌药物为抑制肺癌细胞增殖和/或迁移的药物。
9.根据权利要求7所述的应用,其特征在于,所述抗癌药物为抑制肿瘤生长和/或转移的药物。
10.根据权利要求7所述的应用,其特征在于,所述抗癌药物为降低ki67表达的药物。