本发明属于蛋白降解靶向嵌合体(protac)，具体涉及一种靶向核输出蛋白1(xpo1)的protac多肽及其应用。
背景技术：
1、多发性骨髓瘤(mutiple myeloma,mm)属于血液系统第三大常见的恶性肿瘤，其特征是骨髓内浆细胞恶性克隆性增殖，分泌大量单克隆免疫球蛋白，最终导致多器官功能损伤。在血液系统恶性肿瘤中，发病率仅次于白血病和淋巴瘤。mm的治疗方案以化疗为主，一线化疗方案通常需覆盖蛋白酶体抑制剂，现阶段的一线治疗方案以蛋白酶体抑制剂、免疫调节剂、地塞米松的vrd治疗方案为主，在达到完全缓解后寻求自体造血干细胞移植治疗以获得长期生存。自2003年硼替佐米获fda批准用于治疗mm以来，5年相对生存率已提升至51.3％。然而，复发和难治目前仍是mm无法治愈需要面临的主要问题。
2、随着对mm研究的不断深入，新的靶向药物如单克隆抗体(靶向cd38达雷妥优单抗、靶向cs-1埃洛妥珠单抗)、car-t细胞免疫治疗(bcma、gprc5d、cd138等靶点)、核输出蛋白1(exportin 1，xpo1)抑制剂(selinxor)等均为复发难治患者提供了可能。尤其是作为全球首个口服的xpo1抑制剂，selinexor与其他二线药物的联合化疗表现出良好的治疗效果。但该药物在临床上的应用多作为辅助联合用药出现，且具有显著的不良反应事件，如胃肠道反应、骨髓抑制、非特异性副反应等。
3、xpo1是核质转运的重要受体之一。在核输出过程中xpo1与rangtp结合，通过构象变化使xpo1蛋白的nes识别位点打开与货物蛋白结合，形成rangtp-xpo1-cargo protein稳定的三元复合物，与位于核孔上的核孔蛋白复合物结合然后整体转运出核。一旦进入细胞质，rangtp去磷酸化并水解为rangdp，没有结合rangtp的xpo1-cargo protein复合体会释放货物蛋白，达到核输出的目的。xpo1蛋白在肿瘤细胞中高度表达，xpo1介导的特异性蛋白的核质运输与多种肿瘤的发病机制等相关。具有核质穿梭功能的肿瘤相关蛋白有p53、p21、p27、rb、top2a、iκb、brca1/2、foxo3、apc等，这些蛋白定位于细胞核时，能够有效抑制细胞增殖，而当xpo1过量表达时，则由于过度核输出在细胞质中被降解从而失去抑癌功能。
技术实现思路
1、鉴于以上技术问题，本发明设计并合成了针对xpo1的protac，其通过靶向降解xpo1蛋白，阻止核质转运穿梭，导致肿瘤抑制蛋白在细胞核中积累，从而发挥抑癌作用。本发明相较于已经上市的小分子药物塞利尼索(selinexor)具有更强的靶向蛋白降解作用，填补了全球范围内靶向xpo1的protac药物的空白。
2、本发明提供的具体技术方案如下：
3、本发明第一方面，提供一种靶向xpo1的protac多肽，其氨基酸序列为emsefalemdkigggsgggtsfeqfwawlwp。所述protac多肽以xpo1(504～630片段)作为目标靶蛋白，以小鼠双分子2同源物(mdm2)为e3泛素连接酶，以gggsggg为连接子(linker)，该protac多肽具有特异性识别xpo1蛋白及与xpo1、mdm2蛋白结合的能力。
4、本发明第二方面，提供一种所述protac多肽在制备降解xpo1蛋白的产品中的应用。
5、本发明第三方面，提供一种所述protac多肽在制备预防和/或治疗多发性骨髓瘤的药物中的应用。
6、优选地，所述protac多肽或所述纳米递送系统用于制备抑制多发性骨髓瘤细胞增殖的药物。
7、优选地，所述多发性骨髓瘤细胞为nci-h929、mm.1s、rpmi-8226、u226、luc-u266或cd38+的病人骨髓样本原代mm细胞。
8、本发明第四方面，提供一种药物，其包括所述protac多肽及药学上可接受的辅料或载体。该药物在添加适宜的辅料之后可被制备成药学上可接受的药物制剂，如口服制剂或注射制剂。示例性的，口服制剂包括胶囊剂、片剂、颗粒剂或其他液体制剂，如合剂、混悬剂、糖浆剂、芳香水剂等。示例性的，可添加的辅料包括稳定剂、助悬剂、ph调节剂、矫味剂、着色剂、崩解剂、填充剂、增溶剂、赋形剂、保湿剂、增稠剂、润湿剂、渗透剂、稀释剂、絮凝剂等。
9、优选地，所述载体为纳米递送系统。
10、进一步优选地，所述纳米递送系统为纳米硒。
11、优选地，当纳米递送系统为纳米硒时，所述药物是按照以下步骤进行制备的：
12、将所述protac多肽溶解后，加入硒盐溶液、壳聚糖及维生素c，反应，即得。
13、硒作为一种重要的微量元素，具有显著的抗氧化性和抗癌活性。而纳米硒由于其独特的物理化学和生物学特性，使其在药物递送系统中显示出巨大的潜力。本发明中所使用的亚硒酸钠(na2seo3)是一种无机硒化合物，可以作为纳米硒的重要来源，其他含硒物质如亚硒酸钾、硒酸钠等可以替代。
14、壳聚糖属于天然多糖，在酸性环境下容易质子化，形成阳离子型氨基(-nh3+)。这种阳离子特性能够与负电荷的分子或颗粒互相作用形成稳定的复合物。在药物递送系统中，可以增加药物的稳定性和生物利用度，有助于药物的细胞内递送和吸收。在本发明中可被其他阳离子特性物质替代，例如聚乙烯亚胺(pei)、聚二甲基二烯丙基氯化铵，pdadmac)等。
15、维c在药物制剂中可以用作还原剂，模拟生物体内的还原性环境，保护药物不受氧化环境的破坏，延长药物有效期，可被其他还原性物质替代，例如谷胱甘肽(gsh)、醋酸等。
16、优选地，所述protac多肽、硒盐及维生素c的摩尔质量比为1：8～12：70～90。
17、优选地，壳聚糖溶液的质量浓度为0.3～0.8％，壳聚糖溶液与所述多肽的用量比为150μl∶1mg。
18、优选地，所述反应是先将混合物在45～55℃下混合反应15～25min，再在室温下静置3～4h，后经4℃过夜反应。
19、本发明提供一种靶向xpo1的protac多肽，利用该多肽制备得到的纳米载药系统se-xpo1 protac可以被有效递送至mm细胞系，在体外细胞系中有效降解xpo1蛋白，抑制mm细胞的增殖和促进mm细胞凋亡。
20、本发明提供的所述靶向xpo1的protac多肽可以在体内mm小鼠模型中有效降低瘤负荷，并延长mm小鼠的生存时间。
21、所述mm动物模型为注射luc-u266的nsg小鼠尾静脉模型。
22、本发明提供的所述靶向xpo1的protac多肽可以在离体mm患者骨髓样本的cd38+原代细胞中有效促进mm细胞凋亡。
23、本发明提供的所述se-xpo1 protac多肽可以作为用于治疗mm的靶向多肽药物。
1.一种靶向核输出蛋白1的protac多肽，其特征在于，所述protac多肽的氨基酸序列为emsefalemdkigggsgggtsfeqfwawlwp。
2.一种权利要求1所述的protac多肽在制备降解xpo1蛋白的产品中的应用。
3.一种权利要求1所述的protac多肽在制备预防和/或治疗多发性骨髓瘤的药物中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述protac多肽在制备抑制多发性骨髓瘤细胞增殖的药物中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述多发性骨髓瘤细胞为nci-h929、mm.1s、rpmi-8226、u226、luc-u266或cd38+的骨髓样本原代mm细胞。
6.一种预防和/或治疗多发性骨髓瘤的药物，其特征在于，其包括权利要求1所述的protac多肽及药学上可接受的辅料或载体。
7.根据权利要求6所述的药物，其特征在于，所述载体为纳米递送系统。
8.根据权利要求7所述的药物，其特征在于，所述纳米递送系统为纳米硒。
9.根据权利要求8所述的药物，其特征在于，所述药物是按照以下步骤制备得到：
10.根据权利要求9所述的药物，其特征在于，
