本发明涉及生物医药领域。具体地说，本发明涉及lrrc25基因缺失的巨噬细胞及其制备和应用。
背景技术：
1、肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophage,tam)是肿瘤微环境(tumormicroenvironment,tme)的重要组成细胞。作为炎症和癌症之间联系的桥梁，tam在肿瘤的发展中表现出多样性和可塑性的特征，近年来针对tam的靶向干预策略是癌症免疫治疗领域的研究热点。然而，目前关于tam如何影响tme并促进肿瘤进展的机制仍存在诸多未知，深入探索影响tam极化的调控因子，将有助于发现新型免疫治疗靶点，恢复机体自身免疫系统对癌细胞的监控，从而为广泛癌症患者提供更持久且有效的抗肿瘤免疫效应。
2、因此，本领域需要开发一种抗肿瘤效应增强的肿瘤相关巨噬细胞及其改造方法。
技术实现思路
1、本发明的目的就是提供一种抗肿瘤效应增强的肿瘤相关巨噬细胞及其改造方法。
2、在本发明的第一方面，提供了一种基因工程化的巨噬细胞，所述基因工程化的巨噬细胞中基因lrrc25被敲除或敲低。
3、在另一优选例中，所述的巨噬细胞为肿瘤相关巨噬细胞(tam)。
4、在另一优选例中，所述的巨噬细胞为cd11b+f4/80+tam。
5、在另一优选例中，所述的巨噬细胞为cd45+cd11b+f4/80+tam。
6、在另一优选例中，与未进行lrrc25基因敲低的巨噬细胞相比，所述基因工程化的巨噬细胞具有以下一个或多个特征：
7、(1)高表达选自下组的蛋白或其mrna：促炎相关分子、抗原加工呈递分子、趋化因子、或其组合；
8、(2)高表达m1型促炎巨噬细胞标志性蛋白或其mrna；
9、(3)低表达m2型抗炎巨噬细胞标志性蛋白或其mrna；
10、(4)高表达炎性介质ros和/或抑癌基因p53或其mrna。
11、在另一优选例中，所述的“高表达”是指：基因工程化的巨噬细胞中所述蛋白或其mrna的表达水平(f1)与未经基因敲低的巨噬细胞的表达水平(f2)的比值(f1/f2)≥2,较佳地≥3，更佳地≥4。
12、在另一优选例中，所述的抗原加工呈递分子选自下组：mhci类分子、mhcii类分子、或其组合。
13、在另一优选例中，所述的抗原加工呈递分子选自下组：h2k1、h2d1、h2aa、h2eb1、或其组合。
14、在另一优选例中，所述的趋化因子选自下组：cxcl9、cxcl10、ccl3、ccl5或其组合。
15、在另一优选例中，所述的促炎相关分子为选自下组的促炎信号通路的相关分子：il6 jak stat3信号、经nfκb的tnfa信号、toll样信号、或其组合。
16、在另一优选例中，所述的促炎相关分子选自下组：il1b、il6、或其组合。
17、在另一优选例中，所述的m1型促炎巨噬细胞标志性蛋白选自：cd86、inos、或其组合。
18、在另一优选例中，所述的m2型抗炎巨噬细胞标志性蛋白选自：cd163、cd206、或其组合。
19、在另一优选例中，与未进行lrrc25基因敲低的巨噬细胞相比，所述基因工程化的巨噬细胞的促炎因子分泌量显著提高。
20、在另一优选例中，所述的促炎因子选自下组：il1β、tnf-α、或其组合。
21、在另一优选例中，所述基因工程化的巨噬细胞通过用sgrna进行lrrc25基因敲除获得。
22、在另一优选例中，所述基因工程化的巨噬细胞来源于人或非人哺乳动物(例如啮齿类动物)。
23、在本发明的第二方面，提供了一种用于制备如本发明第一方面所述基因工程化的巨噬细胞的基因编辑试剂，所述基因编辑试剂包括：
24、(a)基因编辑蛋白或其表达载体，所述基因编辑蛋白选自下组：casrx、cpf1、cas9、cas13a、cas13b、cas13c、或其组合；和
25、(b)grna或其表达载体，其中所述grna是引导所述基因编辑蛋白特异性结合lrrc25基因的核苷酸序列。
26、在另一优选例中，所述grna的靶向位点序列选自下组：seq id no:1、seq id no:2、或其组合。
27、在本发明的第三方面，提供了一种制备如本发明第一方面所述的基因工程化巨噬细胞的方法，所述方法包括步骤：
28、(a)提供待编辑的巨噬细胞；和
29、(b)对所述巨噬细胞进行lrrc25基因敲除，从而获得如本发明第一方面所述的基因工程化的巨噬细胞。
30、在另一优选例中，在步骤(b)中，将如本发明第二方面所述的基因编辑试剂导入所述巨噬细胞，从而进行lrrc25基因敲除。
31、在另一优选例中，还包括对基因工程化的巨噬细胞进行稳定传代，从而获得稳定的基因工程化的巨噬细胞系。
32、在另一优选例中，所述的待编辑的巨噬细胞为人源细胞。
33、在另一优选例中，所述的待编辑的巨噬细胞为人源thp-1来源巨噬细胞。
34、在本发明的第四方面，提供了如本发明第一方面所述的基因工程化巨噬细胞、或如本发明第二方面所述的基因编辑试剂在制备预防和/或治疗疾病的药物中的用途。
35、在另一优选例中，所述的疾病为癌症或肿瘤。
36、在另一优选例中，所述癌症选自下组：小肠癌、黑色素瘤、结直肠癌、胃癌、胰腺癌、食管癌、卵巢癌、肺癌、乳腺癌、恶性脑胶质瘤、肝癌、肾癌、膀胱癌、前列腺癌、子宫内膜癌、宫颈癌、白血病、骨髓癌、血管肉瘤、或其组合。
37、在另一优选例中，所述的癌症选自下组：黑色素瘤、结直肠癌、肺癌、乳腺癌、或其组合。
38、在本发明的第五方面，提供了一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物含有：
39、(1)治疗有效量的活性成分，所述活性成分为如本发明第一方面所述的基因工程化的巨噬细胞、或如本发明第二方面所述的基因编辑试剂；
40、(2)药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
41、在另一优选例中，所述药物组合物的剂型选自下组：冻干制剂、液体制剂、或其组合。
42、在另一优选例中，所述药物组合物的剂型为液体制剂。
43、在另一优选例中，所述药物组合物的剂型为注射剂型。
44、在另一优选例中，所述的药物组合物还包含其他生物活性物质，如治疗肿瘤的药物。
45、在本发明的第六方面，提供了一种治疗肿瘤的方法，所述方法包括步骤：向有需要的对象施用治疗有效量的如本发明第一方面所述的基因工程化巨噬细胞、或如本发明第二方面所述的基因编辑试剂、或如本发明第五方面所述的药物组合物。
46、应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
1.一种基因工程化的巨噬细胞，其特征在于，所述基因工程化的巨噬细胞中基因lrrc25被敲除或敲低。
2.如权利要求1所述的巨噬细胞，其特征在于，所述的巨噬细胞为肿瘤相关巨噬细胞(tam)。
3.如权利要求1所述的巨噬细胞，其特征在于，与未进行lrrc25基因敲低的巨噬细胞相比，所述基因工程化的巨噬细胞具有以下一个或多个特征：
4.如权利要求3所述的巨噬细胞，其特征在于，所述的抗原加工呈递分子选自下组：mhci类分子、mhcii类分子、或其组合；和/或
5.如权利要求3所述的巨噬细胞，其特征在于，所述的m1型促炎巨噬细胞标志性蛋白选自：cd86、inos、或其组合；和/或
6.如权利要求1所述的巨噬细胞，其特征在于，所述基因工程化的巨噬细胞来源于人或非人哺乳动物。
7.一种用于制备如权利要求1所述基因工程化的巨噬细胞的基因编辑试剂，所述基因编辑试剂包括：
8.一种制备如权利要求1所述的基因工程化巨噬细胞的方法，所述方法包括步骤：
9.如权利要求1所述的基因工程化巨噬细胞、或如权利要求7所述的基因编辑试剂在制备预防和/或治疗疾病的药物中的用途。
10.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物含有：
