本发明属于分子检测，具体涉及一种用于检测利什曼原虫的分子标记和试剂盒以及应用。
背景技术：
1、利什曼原虫通过媒介昆虫的叮咬感染啮齿目、蹄兔目、爬行类、犬科和人类，从而引起利什曼原虫病，其主要的传播媒介为白蛉。利什曼原虫虫种多样，主要包括杜氏利什曼原虫(leishmania donovani)、硕大利什曼原虫(leishmania major)、婴儿利什曼原虫(leishmania infantum)、巴西利什曼原虫(leishmania araziliensis vianna)、热带利什曼原虫(leishmania tropic)、墨西哥利什曼原虫(leishmania mexicana)和蜥蜴利什曼原虫(leishmania tarentolae)等。利什曼原虫的生活史有两期，即无鞭毛体和前鞭毛体，无鞭毛体见于前者的细胞内，而前鞭毛体见于后者的体腔内。原虫主要寄生于病人体内的巨噬细胞里，临床特征主要表现为长期不规则的发热、脾脏肿大、贫血、消瘦、白细胞减少和血清球蛋白的增加，如不予合适的治疗，患者大都在得病后1－2年内因并发其它疾病而死亡。
2、目前利什曼病的诊断方法众多，主要有病原学检测、免疫学检测以及分子生物学检测方法。显微检测技术是一种传统的检测寄生虫的方法，虽然结果直观，但主要依靠肉眼识别，不仅工作量大而且容易出现漏诊的情况。免疫学检测方法包括酶联免疫吸附试验(elisa)、间接血凝试验(iha)、间接荧光免疫试验(ifa)、染色试验(dt)等。这些检测方法操作简便，稳定性好，但敏感性不高。
技术实现思路
1、本发明的目的是为了提高检测墨西哥利什曼原虫和亚马逊利什曼原虫的敏感性和稳定性。
2、本发明提供一种cpb基因在作为鉴定利什曼原虫(leishmania spp)的标志物的应用。
3、本发明提供一种cpb基因在作为特异性定量利什曼原虫(leishmania spp)的标志物的应用。
4、本发明提供一种cpb基因在作为检测利什曼原虫(leishmania spp)的标志物的应用。
5、进一步地限定，所述cpb基因的序列如seq id no.1所示。
6、本发明提供一种用于检测利什曼原虫的试剂盒，所述试剂盒包括seq id no.2和seq id no.3所示的引物对、grna的核苷酸序列如seq id no.12所示；所述引物对可以扩增seq id no.8所示的基因序列。
7、进一步地限定，所述试剂盒还包括crispr/cas12a体系和rpa检测体系。
8、进一步地限定，所述crispr/cas12a反应体系包括针对待测核酸样品的特异性crrna、lb cas12a蛋白和fq探针；所述rpa反应体系包括针对待测dna样品的特异性扩增引物、冻干反应颗粒和靶标。
9、本发明提供一种非治疗和诊断为目的的检测利什曼原虫的方法，所述方法的具体步骤如下：
10、步骤1：准备crispr/cas12a体系和rpa检测体系；
11、步骤2：将crispr/cas12a体系与rpa检测体系按照1:1体积比例混合，加入待检测的核酸的样品；
12、步骤3：在37℃的pcr管中孵育60min，用实时pcr检测系统监测荧光信号。
13、本发明提供一种rpa-crispr可视化检测利什曼原虫的检测系统，所述系统包括上述的检测试剂盒。
14、本发明提供一种上述的试剂盒或上述的核酸检测系统非诊断为目的检测利什曼原虫中的应用。
15、有益效果：使用利什曼原虫质粒进行敏感性检测，将质粒按照106拷贝数/ul-100拷贝数/ul的梯度稀释，并将其作为rpa反应的模板，在温度为39℃的金属浴中反应20min，得到反应产物，结果可见，荧光检测方法的灵敏度为101拷贝/ul，试纸条检测方法的灵敏度为102拷贝/ul，说明所述检测方法能够诊断极微量的利什曼原虫dna。
1.cpb基因在作为鉴定利什曼原虫(leishmania spp)的标志物的应用。
2.cpb基因在作为特异性定量利什曼原虫(leishmania spp)的标志物的应用。
3.cpb基因在作为检测利什曼原虫(leishmania spp)的标志物的应用。
4.根据权利要求1-3任一项所述的应用，其特征在于，所述cpb基因的序列如seq idno.1所示。
5.一种用于检测利什曼原虫的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括seq id no.2和seq id no.3所示的引物对、grna的核苷酸序列如seq id no.12所示；所述引物对可以扩增seq id no.8所示的基因序列。
6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括crispr/cas12a体系和rpa检测体系。
7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述crispr/cas12a反应体系包括针对待测核酸样品的特异性crrna、lb cas12a蛋白和fq探针；所述rpa反应体系包括针对待测dna样品的特异性扩增引物、冻干反应颗粒和靶标。
8.一种非治疗和诊断为目的的检测利什曼原虫的方法，其特征在于，所述方法的具体步骤如下：
9.一种rpa-crispr可视化检测利什曼原虫的检测系统，其特征在于，所述系统包括权利要求1-7任一项所述的检测试剂盒。
10.权利要求1-7任一项所述的试剂盒或权利要求9所述的核酸检测系统非诊断为目的检测利什曼原虫中的应用。
