本发明涉及一种组合物，其包含荧光团标记的受体靶向组分，优选地荧光团标记的受体靶向肽缀合物，更优选地荧光团标记的upar(尿激酶型纤溶酶原激活剂受体)靶向肽缀合物。
背景技术：
1、现有的组合物包含一种或多种荧光团标记的受体靶向肽缀合物，其中受体为upar。例如，在wo2016/041558中公开了结合到细胞表面受体upa(upar)的缀合物。缀合物基于可用作表达upar的细胞表面的诊断探针的荧光标记肽。缀合物能够携带合适的可检测和可成像标记，该标记将允许定性检测并且还允许在体外和体内对upar水平进行定量。这更优化肿瘤的手术切除。此外，在wo2016/041558中描述了缀合物的不同替代方案，例如包含icg-glu-glu-ae105的缀合物，其中icg是吲哚菁绿，glu-glu是充当接头的两个谷氨酸，并且ae105是upar靶向肽。
技术实现思路
1、本发明涉及提供一种制剂，其包含荧光团标记的upar靶向肽缀合物，例如icg-glu-glu-ae105或其他替代形式。根据本发明的制剂提供了荧光团标记的upar靶向肽缀合物的改善的溶解度，以及整个制剂和其中所包含的荧光团标记的upar靶向肽缀合物的增加的稳定性。
2、上文后者所述的目的通过一种组合物来实现，该组合物包含荧光团标记的受体靶向组分、缓冲液和表面活性剂，其中荧光团标记的受体靶向组分通过存在的表面活性剂在组合物中增溶，并且其中组合物包含最多10重量％的水，优选地最多5重量％的水。如从上文应当理解的，本发明具体地讲涉及一种组合物，其包含荧光团标记的受体靶向肽缀合物，更具体地讲，荧光团标记的upar靶向肽缀合物，诸如与以下文献的表4所示的肽具有80％的序列同一性的肽缀合物：“peptide-derived antagonists of the urokinasereceptor.affinity maturation by combinatorial chemistry,identification offunctional epitopes,and inhibitory effect on cancer cell intravasation”，inbiochemstry 2001，40，12157-12168，michael ploug等人。然而，应当注意，在具有受体靶向组分的情况下，这可包括小分子、蛋白质、抗体、frab或当然肽，或其任何类型的组合。
3、根据本发明的组合物表现出若干优点。最重要的两点是对荧光团标记的受体靶向肽缀合物的完全增溶和整个组合物的高稳定性。稳定性主要由缺乏水的存在来驱动。例如，作为根据本发明的一种目标产物类型的冻干产物是其中存在低水含量的一个示例。然而，为了具有适当的制剂，还应具有良好的冻干饼外观的产物，该产物可容易地增溶，因此荧光团标记的受体靶向肽缀合物的增溶是非常重要的。此外，应注意，呈不同的制剂形式的根据本发明的组合物可具有远低于5重量％，例如在1重量％-3重量％的范围内的水含量。在这方面，还应注意，水含量也可在例如3年的架藏寿命期间增加。
4、如上所述，根据本发明的组合物还包含缓冲液和表面活性剂。表面活性剂是确保将荧光团标记的受体靶向肽缀合物增溶在组合物中的组分。不同类型的表面活性剂以及它们的组合可掺入根据本发明的组合物中。
5、此外，根据本发明，缓冲液组分也可具有不同类型。下面提供一些可能的示例。
6、本技术提供了以下内容：
7、1)一种组合物，所述组合物包含荧光团标记的受体靶向组分、缓冲液和表面活性剂，其中所述荧光团标记的受体靶向组分通过存在的表面活性剂在所述组合物中增溶，并且其中所述组合物包含最多10重量％的水，优选地最多5重量％的水。
8、2)根据1)所述的组合物，其中所述组合物包含荧光团标记的受体靶向肽缀合物。
9、3)根据1)或2)所述的组合物，其中所述荧光团标记的受体靶向组分以对应于当测量所述组合物在700nm-825nm的波长区域中吸收光谱时具有约800nm的最大吸收的单个峰的含量在所述组合物中增溶。
10、4)根据1)至3)中任一项所述的组合物，其中所述荧光团标记的受体靶向组分以对应于具有最大约800nm的吸收光谱峰的含量在所述组合物中增溶，并且其中在600nm-900nm的给定波长区域中，所述吸收光谱峰的面积为所述吸收光谱总面积的至少50％、优选地至少60％、甚至更优选地至少65％。
11、5)根据1)至4)中任一项所述的组合物，其中所述组合物包含冻干保护剂，优选地，选自蔗糖、海藻糖、甘露醇、甘氨酸或它们的组合的冻干保护剂、更优选地甘露醇或甘露醇与一种或多种其他组分的组合、更优选地甘露醇和甘氨酸的组合或甘露醇和蔗糖的组合。
12、6)根据1)至5)中任一项所述的组合物，其中所述组合物包含非离子表面活性剂。
13、7)根据1)至6)中任一项所述的组合物，其中提供所述缓冲液，使得所述组合物具有生理ph或基本上生理ph，优选地在7.3-7.5范围内的ph。
14、8)根据1)至7)中任一项所述的组合物，其中所述荧光团标记的受体靶向组分包含荧光团、与所述受体结合的肽和接头基团，其中所述荧光团、所述与受体结合的肽和所述接头基团通过共价键连接。
15、9)根据8)所述的组合物，其中所述荧光团选自吲哚菁绿(icg)、亚甲蓝、5-ala、原卟啉ix、irdye800cw、zw800-1、cy5、cy7、cy5.5、cy7.5、irdye700dx、alexa fluor 488、异硫氰酸荧光素、flav7、ch1055、q1、q4、h1、ir-fep、ir-bbep、ir-e1、ir-fgp或ir-ftap中的任一种，优选地其中所述荧光团为吲哚菁绿(icg)。
16、10)根据8)或9)所述的组合物，其中所述肽选自：ae101、ae105、ae106、ae110、ae112、ae113、ae116、ae133、ae133*、ae134、ae135、ae136、ae137、ae138、ae139、ae145、ae140、ae141、ae142、ae143、ae144、ae164、ae164*、ae120、ae120*或ae151，其中适用以下内容：ae101为d-cha-f-s-r-y-l-w-s，ae105为d-cha-f-s-r-y-l-w-s，ae106为d-cha-f-s-r-y-l-w-s，ae110为d-cha-f-s-r-y-l-w-s，ae112为d-f-f-s-r-y-l-w-s，ae113为d-n-f-s-r-y-l-w-s，ae116为d-cha-f-s-r-g-y-l-w-s，ae133为kgsgg-d-cha-f-s-r-y-l-w-s，ae133*为kgsgg-d-cha-f-s-r-y-l-w-s，ae134为kgsgg-d-cha-f-s-r-y-l-w-a，ae135为kgsgg-d-cha-f-s-r-y-l-a-s，ae136为kgsgg-d-cha-f-s-r-y-a-w-s，ae137为kgsgg-d-cha-f-s-r-a-l-w-s，ae138为kgsgg-d-cha-f-s-a-y-l-w-s，ae139为kgsgg-d-cha-f-a-r-y-l-w-s，ae145为kgsgg-d-cha-f-a-r-y-l-w-s，ae140为kgsgg-d-cha-a-s-r-y-l-w-s，ae141为kgsgg-d-a-f-s-r-y-l-w-s，ae142为kgsgg-a-cha-f-s-r-y-l-w-s，ae143为kgsgg-d-chp-f-s-r-y-l-w-sc，ae144为kgsgg-d-cpa-f-s-r-y-l-w-sc，ae164为kgsgg-d-f-f-s-r-y-l-w-s，ae164*为kgsgg-d-f-f-s-r-y-l-w-s，ae120为[d-cha-f-s-r-y-l-w-s]2-/3a-kc，ae120*为[d-cha-f-s-r-y-l-w-s]2-/3a-kc并且ae151为[r-w-d-cha-s-l-s-f-y]2-/3a-kc，或它们的组合，或与这些肽中任一者具有至少80％序列同一性的肽。
17、11)根据前述任一项所述的组合物，其中所述受体为upar。
18、12)根据前述任一项所述的组合物，其中所述荧光团标记的受体靶向组分为icg-glu-glu-ae105:
19、
20、或其药学上可接受的盐。
21、13)根据12)所述的组合物，其中icg-glu-glu-ae105的浓度在0.1mg/ml-10mg/ml的范围内。
22、14)根据前述任一项所述的组合物，其中所述荧光团标记的受体靶向组分为icg-glu-glu-ae105:
23、
24、或其药学上可接受的盐，
25、其中icg-glu-glu-ae105的浓度在0.1mg/ml-10.0mg/ml的范围内，
26、其中所述组合物还包含浓度为5mm-50mm的呈磷酸钠形式的缓冲液，
27、并且其中所述组合物包含浓度为10mg/ml-50mg/ml的甘露醇和浓度为1mg/ml-30mg/ml的甘氨酸的冷冻保护剂组合。
28、15)根据前述任一项所述的组合物，其中所述组合物包含聚山梨醇酯、优选地聚山梨醇酯、更优选地，浓度>0.01重量％的聚山梨醇酯20。
29、16)根据前述任一项所述的组合物，其中所述荧光团标记的受体靶向组分具有药代动力学特征，其中在施用后3.5小时内达到至少2.5的tbr(肿瘤与背景比)，并且其中至少2.5的tbr水平被保持至少30分钟然后再次减小，并且其中所述荧光团标记的受体靶向组分为人upar靶向缀合物。
30、17)根据前述任一项所述的组合物，其中所述荧光团标记的受体靶向组分具有药代动力学特征，其中在施用后3.5小时内达到至少2.5的tbr(肿瘤与背景比)，并且其中至少2.5的tbr水平被保持至少30分钟然后再次减小，优选地其中所述荧光团标记的受体靶向组分为人upar靶向缀合物。
31、18)根据16)或17)所述的组合物，其中所述荧光团标记的受体靶向组分具有药代动力学特征，其中血浆半衰期为最大75小时、优选地最大20小时、更优选地最大15小时、更优选地在6小时-15小时的范围内、最优选地在6小时-10小时的范围内。
32、19)根据前述任一项所述的组合物，其中所述荧光团标记的受体靶向组分具有药代动力学特征，其中在施用后3.5小时内达到至少2.8的tbr(肿瘤与背景比)，并且其中至少2.8的tbr水平被保持至少30分钟然后再次减小。
33、20)根据前述任一项所述的组合物，其中在施用后所述荧光团标记的受体靶向组分的峰值tbr为至少3。
34、21)根据前述任一项所述的组合物，其中被定义为kd的所述荧光团标记的受体靶向组分与upar的受体结合亲和力为最大2,500nm、优选地最大2,000nm、更优选地最大500nm、最优选地在2,000nm-300nm的范围内。
35、22)根据前述任一项所述的组合物，其中蛋白质(p)-配体(l)复合物
36、发生的速度可被定义为：
37、
38、其中kon是结合反应常数，并且其中koff为所述蛋白质-配体复合物的解离常数，并且其中
39、kon>1×103m-1s-1和/或koff<1×10-1s-1，更优选地其中
40、kon≥7.3×105m-1s-1。
41、23)根据22)所述的组合物，其中所述荧光团标记的受体靶向组分的kon等于或高于为天然配体的upa的kon，从而意味着kon≥4.6×106m-1s-1。
42、24)根据前述任一项所述的组合物，其中所述荧光团标记的受体靶向组分置换结合到upar的所述天然配体(upa)，其中ic50值为最大1,000nm、优选地最大200nm、更优选地最大50nm、最优选地最大
43、25nm。
44、25)根据前述任一项所述的组合物，其中所述荧光团标记的受体靶向组分对检测癌症组织具有至少60％、优选高于70％、更优选高于80％
45、并且最优选高于90％的灵敏度。
46、26)根据前述任一项所述的组合物，其中所述组合物能够在小于10分钟、优选地小于5分钟、更优选地小于2分钟、最优选地小于1分钟内溶解。
47、27)根据前述任一项所述的组合物，其中所述组合物具有大于50％、优选地大于75％、更优选地大于85％、更优选地大于90％、更优选地大于95％、最优选地大于99％的体内蛋白质结合。
48、28)一种冻干组合物，所述冻干组合物包含根据1)至27)中任一项所述的组合物。
49、29)一种用于制备根据1)至27)中任一项所述的组合物的方法，其中所述方法包括将所述荧光团标记的受体靶向组分、所述缓冲液和所述表面活性剂混合以在所述组合物中增溶所述荧光团标记的受体靶向组分。
50、30)根据29)所述的方法，其中将冻干保护剂与所述组合物混合，使得冻干饼被制备。
51、31)根据29)或30)所述的方法，其中所述方法包括：
52、-(i)将icg-glu-glu-ae105:
53、
54、或其药学上可接受的盐，与磷酸钠、甘露醇和甘氨酸混合以产生组合物，所述组合物包含：
55、-浓度为0.1mg/ml-10.0mg/ml的icg-glu-glu-ae105；
56、-浓度范围为5mm-50mm的磷酸钠；
57、-浓度范围为10mg/ml-50mg/ml的甘露醇；
58、-浓度范围为1mg/ml-30mg/ml的甘氨酸；
59、-浓度>0.01重量％的聚山梨醇酯20；
60、-(ii)将步骤(i)的组合物的ph调节为在6.9-7.9的范围内的ph；
61、-(iii)将等于期望剂量的量的来自步骤(ii)的混合物转移到合适的容器中；
62、-(iv)干燥所述混合物；以及
63、-(v)密封所述容器。
64、32)一种光学成像方法，包括以下步骤：
65、(a)施用根据1)至27)中任一项所述的组合物，从而在靶组织中累积，
66、(b)用所述荧光能够吸收的波长的光照射所述靶组织；以及
67、(c)检测由所述荧光团发射的荧光并形成所述靶组织的光学图像。
1.一种组合物，所述组合物包含荧光团标记的受体靶向组分、缓冲液和表面活性剂，其中所述荧光团标记的受体靶向组分通过存在的表面活性剂在所述组合物中增溶，并且其中所述组合物包含最多10重量％的水，优选地最多5重量％的水，其中所述荧光团标记的受体靶向组分为icg-glu-glu-ae105:
2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物包含荧光团标记的受体靶向肽缀合物。
3.根据权利要求1或2所述的组合物，其中所述荧光团标记的受体靶向组分以对应于当测量所述组合物在700nm-825nm的波长区域中吸收光谱时具有约800nm的最大吸收的单个峰的含量在所述组合物中增溶。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的组合物，其中所述荧光团标记的受体靶向组分以对应于具有最大约800nm的吸收光谱峰的含量在所述组合物中增溶，并且其中在600nm-900nm的给定波长区域中，所述吸收光谱峰的面积为所述吸收光谱总面积的至少50％、优选地至少60％、甚至更优选地至少65％。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的组合物，其中所述组合物包含冻干保护剂，优选地，选自蔗糖、海藻糖、甘露醇、甘氨酸或它们的组合的冻干保护剂、更优选地甘露醇或甘露醇与一种或多种其他组分的组合、更优选地甘露醇和甘氨酸的组合或甘露醇和蔗糖的组合。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的组合物，其中所述组合物包含非离子表面活性剂。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的组合物，其中提供所述缓冲液，使得所述组合物具有生理ph或基本上生理ph，优选地在7.3-7.5范围内的ph。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的组合物，其中所述荧光团标记的受体靶向组分包含荧光团、与所述受体结合的肽和接头基团，其中所述荧光团、所述与受体结合的肽和所述接头基团通过共价键连接。
9.根据权利要求8所述的组合物，其中所述荧光团选自吲哚菁绿(icg)、亚甲蓝、5-ala、原卟啉ix、irdye800cw、zw800-1、cy5、cy7、cy5.5、cy7.5、irdye700dx、alexa fluor 488、异硫氰酸荧光素、flav7、ch1055、q1、q4、h1、ir-fep、ir-bbep、ir-e1、ir-fgp或ir-ftap中的任一种，优选地其中所述荧光团为吲哚菁绿(icg)。
10.根据权利要求8或9所述的组合物，其中所述肽选自：ae101、ae105、ae106、ae110、ae112、ae113、ae116、ae133、ae133*、ae134、ae135、ae136、ae137、ae138、ae139、ae145、ae140、ae141、ae142、ae143、ae144、ae164、ae164*、ae120、ae120*或ae151，其中适用以下内容：ae101为d-cha-f-s-r-y-l-w-s，ae105为d-cha-f-s-r-y-l-w-s，ae106为d-cha-f-s-r-y-l-w-s，ae110为d-cha-f-s-r-y-l-w-s，ae112为d-f-f-s-r-y-l-w-s，ae113为d-n-f-s-r-y-l-w-s，ae116为d-cha-f-s-r-g-y-l-w-s，ae133为kgsgg-d-cha-f-s-r-y-l-w-s，ae133*为kgsgg-d-cha-f-s-r-y-l-w-s，ae134为kgsgg-d-cha-f-s-r-y-l-w-a，ae135为kgsgg-d-cha-f-s-r-y-l-a-s，ae136为kgsgg-d-cha-f-s-r-y-a-w-s，ae137为kgsgg-d-cha-f-s-r-a-l-w-s，ae138为kgsgg-d-cha-f-s-a-y-l-w-s，ae139为kgsgg-d-cha-
11.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述受体为upar。
12.根据权利要求1所述的组合物，其中icg-glu-glu-ae105的浓度在0.1mg/ml-10mg/ml的范围内。
13.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述荧光团标记的受体靶向组分为icg-glu-glu-ae105:
14.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述组合物包含聚山梨醇酯、优选地聚山梨醇酯、更优选地，浓度>0.01重量％的聚山梨醇酯20。
15.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述荧光团标记的受体靶向组分具有药代动力学特征，其中在施用后3.5小时内达到至少2.5的tbr(肿瘤与背景比)，并且其中至少2.5的tbr水平被保持至少30分钟然后再次减小，并且其中所述荧光团标记的受体靶向组分为人upar靶向缀合物。
16.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述荧光团标记的受体靶向组分具有药代动力学特征，其中在施用后3.5小时内达到至少2.5的tbr(肿瘤与背景比)，并且其中至少2.5的tbr水平被保持至少30分钟然后再次减小，优选地其中所述荧光团标记的受体靶向组分为人upar靶向缀合物。
17.根据权利要求15或16所述的组合物，其中所述荧光团标记的受体靶向组分具有药代动力学特征，其中血浆半衰期为最大75小时、优选地最大20小时、更优选地最大15小时、更优选地在6小时-15小时的范围内、最优选地在6小时-10小时的范围内。
18.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述荧光团标记的受体靶向组分具有药代动力学特征，其中在施用后3.5小时内达到至少2.8的tbr(肿瘤与背景比)，并且其中至少2.8的tbr水平被保持至少30分钟然后再次减小。
19.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中在施用后所述荧光团标记的受体靶向组分的峰值tbr为至少3。
20.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中被定义为kd的所述荧光团标记的受体靶向组分与upar的受体结合亲和力为最大2,500nm、优选地最大2,000nm、更优选地最大500nm、最优选地在2,000nm-300nm的范围内。
21.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中蛋白质(p)-配体(l)复合物发生的速度可被定义为：
22.根据权利要求21所述的组合物，其中所述荧光团标记的受体靶向组分的kon等于或高于为天然配体的upa的kon，从而意味着kon≥4.6×106m-1s-1。
23.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述荧光团标记的受体靶向组分置换结合到upar的所述天然配体(upa)，其中ic50值为最大1,000nm、优选地最大200nm、更优选地最大50nm、最优选地最大25nm。
24.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述荧光团标记的受体靶向组分对检测癌症组织具有至少60％、优选高于70％、更优选高于80％并且最优选高于90％的灵敏度。
25.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述组合物能够在小于10分钟、优选地小于5分钟、更优选地小于2分钟、最优选地小于1分钟内溶解。
26.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述组合物具有大于50％、优选地大于75％、更优选地大于85％、更优选地大于90％、更优选地大于95％、最优选地大于99％的体内蛋白质结合。
27.一种冻干组合物，所述冻干组合物包含根据权利要求1至26中任一项所述的组合物。
28.一种用于制备根据权利要求1至26中任一项所述的组合物的方法，其中所述方法包括将所述荧光团标记的受体靶向组分、所述缓冲液和所述表面活性剂混合以在所述组合物中增溶所述荧光团标记的受体靶向组分。
29.根据权利要求28所述的方法，其中将冻干保护剂与所述组合物混合，使得冻干饼被制备。
30.根据权利要求28或29所述的方法，其中所述方法包括：
