本发明属于生物工程,具体涉及一株禽源肠炎沙门氏菌se0730及其在构建禽用弱毒疫苗株中的应用。
背景技术:
1、肠炎沙门氏菌属于无宿主特异性而有侵害性的病原菌之一,宿主包括人和各种动物。肠炎沙门氏菌不仅能引起畜禽发病死亡造成严重的经济损失,而且被污染的畜禽产品可以作为肠炎沙门氏菌的携带者,进一步危害人类健康。研究表明,肠炎沙门氏菌在禽产品中广泛传播的原因,是由于鸡群实施鸡白痢净化后,肠炎沙门氏菌会取代原先鸡白痢沙门氏菌的生态定植位点,进而造成广泛传播。目前由肠炎沙门氏菌引起人的急性胃肠炎(食物中毒),已成为国际公共卫生的一个重要课题。
2、控制鸡群肠炎沙门氏菌感染可以有效阻断人类食物中毒。对于鸡群肠炎沙门氏菌的控制通常采用抗菌药物来减轻其危害,但需慎重选择药物种类、给药途径、方法、剂量与维持时间。同时长期反复用药,不仅使饲养成本上升,而且导致细菌耐药性增强以及禽产品的药物残留等一系列问题。事实证明,仅依赖药物控制不是防控肠炎沙门氏菌的良策。相比之下,采用疫苗免疫,既没有抗生素造成的细菌耐药性与药物残留问题,又可以产生持久的免疫力,因而更容易被养殖者和消费者接受。
3、弱毒活疫苗因其具有免疫原性强,免疫剂量低,价格低廉而备受科研人员的青睐。对于细菌弱毒活疫苗的制备主要采用基因工程的方法进行减毒处理,但目前临床分离的肠炎沙门氏菌耐药性普遍较强,通常具有氨苄西林、氯霉素、磺胺、链霉素等药物抗性,而这些药物抗性往往与常用细菌基因编辑工具所带的抗性标签存在冲突,因而导致相关研究受到限制。
技术实现思路
1、本发明的目的在于提供一株对常见抗菌药物均敏感的肠炎沙门氏菌se0730,可使用常规细菌基因编辑工具进行弱毒疫苗株的构建。
2、本发明技术方案如下:
3、本发明一方面涉及一种肠炎沙门氏菌se0730,是从历年来收集、保存的1300余株肠炎沙门氏菌菌种中,经多年反复筛选验证后获得的一株免疫原性强,遗传稳定性好且对常见抗菌药物均敏感的菌株,可用于肠炎沙门氏菌弱毒疫苗株的构建研究。
4、本发明的肠炎沙门氏菌se0730(salmonella enteritidis se0730)已于2024年5月30日送中国典型培养物保藏中心(中国.武汉.武汉大学)保藏,名称及鉴别特征:肠炎沙门氏菌(salmonella enteritidis),株号:se0730,保藏编号:cctcc no.m 20241099。
5、本发明还提供了所述的肠炎沙门氏菌用于弱毒疫苗株构建研究的应用。
6、在一个优选实施方式中,肠炎沙门氏菌se0730在构建弱毒疫苗株的应用时,可选用含氨苄西林、四环素、氯霉素、壮观霉素、新霉素、链霉素、庆大霉素和/或卡那霉素等抗性标签的细菌基因编辑工具构建肠炎沙门氏菌se0730的突变菌株。
7、优选地,选用red同源重组系统、recet同源重组系统、crispr基因编辑系统、cre-lox重组系统、flp-frt重组系统、自杀性质粒载体和/或转座子载体细菌基因编辑工具。
8、本发明另一方面还涉及一种肠炎沙门氏菌弱毒疫苗株的构建方法,其特征在于:使用上述肠炎沙门氏菌se0730作为亲本株。
9、在一个优选实施方式中,其特征在于,所述亲本株的aroa基因缺失或者被突变。
10、本发明提供的肠炎沙门氏菌se0730对常见抗菌药物均敏感,可使用各种细菌基因编辑工具进行弱毒疫苗株的构建,特别是,通过因编辑工具敲除或突变aroa基因之后,可以显著降低毒力。
1.一株禽源肠炎沙门氏菌se0730,其特征在于:该菌株已保藏于中国典型培养物保藏中心;地址:武汉大学;保藏日期:2024年5月30日;保藏编号:cctcc no.m 20241099。
2.根据权利要求1所述的肠炎沙门氏菌在构建禽用弱毒疫苗株的应用。
3.根据权利要求2所述的肠炎沙门氏菌se0730在构建弱毒疫苗株的应用,其特征在于:可选用含氨苄西林、四环素、氯霉素、壮观霉素、新霉素、链霉素、庆大霉素和/或卡那霉素等抗性标签的细菌基因编辑工具构建肠炎沙门氏菌se0730的突变菌株。
4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于:选用red同源重组系统、recet同源重组系统、crispr基因编辑系统、cre-lox重组系统、flp-frt重组系统、自杀性质粒载体和/或转座子载体细菌基因编辑工具。
5.一种肠炎沙门氏菌弱毒疫苗株的构建方法,其特征在于:使用权利要求1所述的肠炎沙门氏菌se0730作为亲本株。
6.根据权利要求5所述的构建方法,其特征在于,所述亲本株的aroa基因缺失或者被突变。
