一、：本发明涉及一种氯碘羟喹的分析检测方法，属于分析化学，具体涉及一种基于auncs/cds@sio2的比率荧光检测氯碘羟喹的方法。
背景技术
0、二、
背景技术：
1、氯碘羟喹(5-氯-8-羟基-7-碘喹啉，cq)作为制药领域广泛使用的药物，具有抗真菌、抗寄生虫、抗病毒和抗炎性等多种药理作用。cq作为人类前列腺癌和神经退行性疾病(如阿尔茨海默病、帕金森病和亨廷顿病)的潜在治疗药物备受关注。然而，长期或过量使用cq可能会导致严重的毒性效应，如神经毒性和细胞毒性。准确检测药物中cq的浓度可以及时监测患者的用药情况，避免因过量或长期使用药物而引起的不良反应。因此，建立简单、快速、准确的cq检测方法对于减轻其不良后果至关重要。
2、目前，现有技术中公开的cq检测方法主要包括电化学法、比色法、荧光法和高效液相色谱技术。特别是基于纳米材料的荧光传感方法已经成为有效的替代方法，具有更高的灵敏度、成本效益、快速分析的能力。然而，目前公开的基于纳米材料的荧光传感方法仅依赖于单一荧光信号变化，可能容易受到诸如探针浓度、光漂白和环境条件变化等无法控制的因素的干扰。为了克服单发射荧光方法所面临的困难，利用比率荧光传感方法是最有效的策略。比率荧光可以利用多个荧光输出信号作为检测指标，并具有自校准功能，提高检测准确度。然而，由于缺乏有效的功能性纳米材料和传感器机制设计，用于cq检测的比率荧光方法还没有被研发出来。
技术实现思路
0、三、
技术实现要素：
1、本发明要解决的技术问题是：基于目前氯碘羟喹cq现有检测方法存在的技术问题以及对cq检测的比率荧光方法的迫切需要，本发明提供一种基于auncs/cds@sio2的比率荧光检测氯碘羟喹的方法。利用本发明技术方案检测氯碘羟喹，其灵敏度和准确度均较高。
2、为了解决上述问题，本发明采取的技术方案是：
3、本发明提供一种auncs/cds@sio2的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
4、a、在25℃下，将氯金酸haucl4加入h2o中，在缓和搅拌下滴加谷胱甘肽gsh进行混合反应，接着加热至60～80℃继续反应24h；然后通过透析过程(通过具有mwco 1000da的透析袋)将反应所得auncs溶液进行纯化，得到auncs；
5、b、将nh4oh、乙醇和碳点cds进行混合搅拌；在剧烈搅拌下，加入正硅酸四乙酯teos反应3～5h，然后加入(3-氨基丙基)三乙氧基硅烷aptes反应12～14h；反应后进行离心，接着采用乙醇和超纯水反复洗涤产物，洗涤后进行干燥，得到cds@sio2；
6、c、将所得cds@sio2加入h2o中进行超声处理；然后加入步骤a所得auncs和tris-hcl缓冲溶液，在室温下进行反应；反应后通过离心收集形成的aunc/cds@sio2复合物；采用h2o洗涤复合物，最后进行冷冻干燥，得到auncs/cds@sio2固体。
7、根据上述的auncs/cds@sio2的制备方法，步骤a中所述氯金酸的加入量为2ml、浓度为10mm；h2o的加入量为7.7ml；所述搅拌速率为400～700rpm；所述谷胱甘肽的加入量为300μl、浓度为100mm；所述混合反应的时间为5min；所述纯化的时间为24h。
8、根据上述的auncs/cds@sio2的制备方法，步骤b中所述nh4oh的加入量为0.4ml，乙醇的加入量为50ml，碳点的加入量为1.5～3ml，正硅酸四乙酯的加入量为200μl，(3-氨基丙基)三乙氧基硅烷的加入量为200μl。
9、根据上述的auncs/cds@sio2的制备方法，步骤b中所述混合搅拌的时间为15min，所述剧烈搅拌时的搅拌速度为500～800rpm；所述干燥过程中，温度为60～80℃、时间为12～24h。
10、根据上述的auncs/cds@sio2的制备方法，步骤c中所述cds@sio2的加入量为2.0～3.5mg，所述h2o的加入量为8.5ml，骤a所得auncs的加入量为1ml、其浓度为1.0mg/ml，tris-hcl缓冲溶液的加入量为0.5ml、其浓度为100mm、ph为6.0。
11、根据上述的auncs/cds@sio2的制备方法，步骤c中所述超声处理的时间为15min，室温下反应2h，所述离心时的条件为9000～10000r/min、10min，采用h2o洗涤复合物的次数为3次，所述冷冻干燥过程中，温度为-80℃、时间为24～36h；所得auncs/cds@sio2固体为纳米球形材料，其粒径为90～110nm。
12、另外，提供一种基于auncs/cds@sio2的比率荧光检测氯碘羟喹的方法，所述方法包括以下步骤：
13、1)将200μl、0.1mm的cucl2溶液、200μl不同浓度的氯碘羟喹cq溶液和100μl h2o加入1.5ml离心管中，在室温下反应30～60分钟(优选40分钟)；
14、反应前加入的不同浓度的氯碘羟喹cq溶液的浓度分别为0μm、0.5μm、2.5μm、5μm、25μm、50μm、100μm、150μm、200μm、250μm、300μm、350μm、400μm、450μm、500μm、600μm和700μm；每种浓度的氯碘羟喹cq溶液加入量均为200μl；
15、反应后，氯碘羟喹cq在反应体系内的最终浓度分别为0μm、0.1μm、0.5μm、1μm、5μm、10μm、20μm、30μm、40μm、50μm、60μm、70μm、80μm、90μm、100μm、120μm和140μm；
16、2)将500μl、0.4mg/ml的权利要求1所得auncs/cds@sio2加入步骤1)所得反应混合物中，在室温下反应5～15min(优选10min)；
17、3)采用荧光光度计测定步骤2)反应所得混合溶液的荧光发射光谱，在xe灯下激发，记录波长为420nm和595nm处的荧光强度；并绘制以cq浓度为横坐标、以420nm和595nm处的荧光强度比值为纵坐标的标准工作曲线；
18、4)将待测的氯碘羟喹cq样品重复步骤1)～3)，用荧光光度计分别测定待测样品与体系反应后的荧光强度比值，通过计算再与标准工作曲线对比，得到待测氯碘羟喹cq的浓度。
19、根据上述的基于auncs/cds@sio2的比率荧光检测氯碘羟喹的方法，步骤3)中所述在xe灯激发波长为365nm。
20、根据上述的基于auncs/cds@sio2的比率荧光检测氯碘羟喹的方法，步骤4)中所述待测氯碘羟喹cq样品的检测浓度范围为0.1～60μm。
21、本发明的积极有益效果：
22、1、本发明技术方案，通过将金纳米簇与二氧化硅包覆的碳点复合制备auncs/cds@sio2，研发出本发明基于auncs/cds@sio2的比率荧光检测氯碘羟喹的方法。首先，cu2+可以猝灭auncs/cds@sio2中auncs的荧光，而不猝灭cds的荧光；其次，cu2+与cq可以生成复合物，从而阻止了cu2+对auncs荧光的猝灭；加入cq后，auncs在595nm处的荧光恢复，cds在420nm处的荧光不变化。因此，该检测平台利用荧光强度比(f420/f595)的变化可实现cq的比率荧光测定。
23、2、本发明利用auncs/cds@sio2纳米材料作为双发射荧光探针，实现对cq的比率荧光检测，检测方法方便、成本低廉、操作简单。基于auncs/cds@sio2检测cq，可检测范围宽至0.1～60μm。基于auncs/cds@sio2实现比率检测cq，对cq的响应灵敏，实际样品的测量结果准确可靠，实现对市售商业乳膏中cq的检测。
24、3、利用本发明技术方案检测氯碘羟喹，其灵敏度和准确度均较高。
1.一种auncs/cds@sio2的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的auncs/cds@sio2的制备方法，其特征在于：步骤a中所述氯金酸的加入量为2ml、浓度为10mm；h2o的加入量为7.7ml；所述搅拌速率为400～700rpm；所述谷胱甘肽的加入量为300μl、浓度为100mm；所述混合反应的时间为5min；所述纯化的时间为24h。
3.根据权利要求1所述的auncs/cds@sio2的制备方法，其特征在于：步骤b中所述nh4oh的加入量为0.4ml，乙醇的加入量为50ml，碳点的加入量为1.5～3ml，正硅酸四乙酯的加入量为200μl，(3-氨基丙基)三乙氧基硅烷的加入量为200μl。
4.根据权利要求1所述的auncs/cds@sio2的制备方法，其特征在于：步骤b中所述混合搅拌的时间为15min，所述剧烈搅拌时的搅拌速度为500～800rpm；所述干燥过程中，温度为60～80℃、时间为12～24h。
5.根据权利要求1所述的auncs/cds@sio2的制备方法，其特征在于：步骤c中所述cds@sio2的加入量为2.0～3.5mg，所述h2o的加入量为8.5ml，骤a所得auncs的加入量为1ml、其浓度为1.0mg/ml，tris-hcl缓冲溶液的加入量为0.5ml、其浓度为100mm、ph为6.0。
6.根据权利要求1所述的auncs/cds@sio2的制备方法，其特征在于：步骤c中所述超声处理的时间为15min，室温下反应2h，所述离心时的条件为9000～10000r/min、10min，采用h2o洗涤复合物的次数为3次，所述冷冻干燥过程中，温度为-80℃、时间为24～36h；所得auncs/cds@sio2固体为纳米球形材料，其粒径为90～110nm。
7.一种基于auncs/cds@sio2的比率荧光检测氯碘羟喹的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
8.根据权利要求7所述的基于auncs/cds@sio2的比率荧光检测氯碘羟喹的方法，其特征在于：步骤3)中所述在xe灯激发波长为365nm。
9.根据权利要求7所述的基于auncs/cds@sio2的比率荧光检测氯碘羟喹的方法，其特征在于：步骤4)中所述待测氯碘羟喹cq样品的检测浓度范围为0.1～60μm。
