本发明属于药物检测，具体涉及一种凝胶法-测定阿立哌唑一水合物细菌内毒素含量的方法。
背景技术：
1、阿立哌唑一水合物用于治疗成人精神分裂症。本品由手臂或臀部注射，由于是属于肌肉注射剂，所以细菌内毒素检测至关重要，由于阿立哌唑一水合物溶解性问题，所以给细菌内毒素检测带来挑战。为了溶解样品，同时溶解试剂很有可能带来细菌内毒素干扰因素，为了解决上述问题，进行了干扰初筛试验和干扰试验，排除干扰因素，证明检测方法的可靠性。
2、申请人通过多次试验，终于研究出一种可以快速测定细菌内毒素的方法，在实际应用过程中取得了显著成效。
技术实现思路
1、为了解决背景技术中提出的技术问题，本申请采用以下技术方案，包括以下步骤：
2、溶剂的选择，选择无水乙醇和吐温80作为溶剂。
3、供试品稀释倍数计算；样品细菌内毒素限值：≤0.30eu/mg；
4、样品溶液浓度(c)：30mg/ml；鲎试剂灵敏度(λ)：0.03eu/ml；
5、最大有效稀释倍数，mvd＝(细菌内毒素限值×初始样品溶液浓度)/λ
6、＝(0.30eu/mg×30mg/ml)/0.03eu/ml＝300
7、则样品可以稀释300倍，即30mg/ml/300＝0.1mg/ml；则样品可以稀释300倍，即30mg/ml/300＝0.1mg/ml；
8、供试品溶液的制备
9、称取样品，加入无水乙醇和吐温80溶解，得到浓度为30mg/ml供试品溶液，用细菌内毒素检查用水稀释浓度为2c＝0.4mg/ml、c＝0.2mg/ml的供试品溶液，供试品溶液和鲎试剂混合后溶液的ph值为6.0～8.0；
10、试验浓度研究(初筛试验)
11、试验浓度c取10mg/ml(mvd/100)、1mg/ml(mvd/10)、0.5mg/ml(mvd/5)、0.2mg/ml(mvd/2)、0.1mg/ml(mvd/1)，取不同浓度的样品溶液按照表1制备溶液。
12、供试品阳性对照组solution b
13、取浓度为4λ内毒素标准品溶液50μl与浓度为2c供试品溶液50μl等体积混匀，制备成浓度为2λ体供试品阳性对照溶液。
14、表1
15、
16、阳性对照组solution c
17、取细菌内毒素检查用水50μl与50μl 4λ的内毒素标准品溶液等体积混匀稀释成2λ浓度阳性对照组溶液。
18、实验浓度选择要求
19、溶液a、d为阴性；
20、溶液b、c为阳性；
21、优先选择浓度较高的供试品浓度。
22、
23、(1)供试品溶液(溶液a solution a)
24、称取样品约300mg，加入5ml无水乙醇和5ml吐温80溶解，得到浓度为30mg/ml供试品溶液，用细菌内毒素检查用水稀释浓度为2c＝0.4mg/ml、c＝0.2mg/ml的供试品溶液(制备过程填写在下列表格中)，供试品溶液和鲎试剂混合后溶液的ph值为6.0～8.0之间。
25、(2)干扰试验
26、制备表2所示的溶液
27、中国食品药品检定研究院生产的细菌内毒素工作标准品用1ml细菌内毒素检查用水将1支细菌内毒素工作标准品溶解后在旋涡混合器上至少连续混合15分钟，然后再用细菌内毒素检查用水稀释。
28、用细菌内毒素检查用水稀释为4λ、2λ、λ、0.5λ，每稀释一步均应在旋涡混合器上至少混匀30秒。
29、查尔斯河生产的细菌内毒素工作标准品
30、用细菌内毒素检查用水将1支细菌内毒素工作标准品(按鲎试剂与细菌内毒素工作标准品对应的coa使用方法使用)溶解后在旋涡混合器上至少连续混合5分钟。用细菌内毒素检查用水稀释为4λ、2λ、λ、0.5λ，每稀释一步均应在旋涡混合器上至少混匀1分钟。
31、表2
32、
33、溶液a：供试品溶液，浓度为c系列；
34、溶液d：阴性对照溶液。
35、(3)试品阳性溶液(溶液b solution b)
36、用细菌内毒素检查用水将工作标准品稀释成4λ、2λ、λ和0.5λ四个浓度的内毒素工作标准品溶液。分别取浓度为4λ、2λ、λ、0.5λ的内毒素工作标准品溶液与2c(0.4mg/ml)供试品溶液混匀(等体积混合)，制备成2λ+c(0.2mg/ml)、λ+c(0.2mg/ml)、0.5λ+c(0.2mg/ml)、0.25λ+c(0.2mg/ml)4个浓度供试品阳性溶液(溶液b)，见表3。
37、表3
38、
39、(4)阳性溶液(溶液c solution c)
40、用细菌内毒素检查用水将cse稀释成2λ、λ、0.5λ和0.25λ四个浓度的细菌内毒素溶液。见表4。
41、表4
42、
43、(5)阴性对照(溶液d solution d)
44、细菌内毒素检查用水，稀释150倍的无水乙醇和吐温80溶液，本发明的一种凝胶法-测定阿立哌唑一水合物细菌内毒素含量的方法，溶剂能够溶解样品，并且对样品细菌内毒素检测无干扰。
45、本发明具有以下有益效果：通过将配置的溶液与鲎试剂(0.03eu/ml)轻轻混匀后垂直放入37℃±1℃内毒素凝胶法测定仪中无振动保温60±2分钟。将安瓿从内毒素凝胶法测定仪中轻轻取出，缓缓倒转180°，若管内形成凝胶并且凝胶坚实不变形，不从管壁滑脱者为阳性，未形成凝胶或形成的凝胶不坚实、不变形并从管壁滑脱者为阴性；有效性判断：只有当阴性对照管(溶液d)为阴性，供试品溶液管(溶液a)为阴性，并且细菌内毒素标准品系列浓度溶液(溶液c)的结果在鲎试剂灵敏度复核范围内时，试验方为有效。
46、在阿立哌唑一水合物细菌内毒素限值≤0.30eu/mg的情况下，当es在0.5λ～2λ(λ＝0.03eu/ml，包括0.5λ和2λ)及et在0.5λ～2λ(包括0.5λ和2λ)时，认为供试品在0.2mg/ml浓度下无干扰作用(es是溶液c的反应终点浓度的几何平均值、et是溶液b的反应终点的几何平均值)。
47、本发明可以快速检测出阿立哌唑一水合物细菌内毒素是否合格，操作简单、灵敏度高、结果准确，适于全面推广和应用。
1.一种凝胶法-测定阿立哌唑一水合物细菌内毒素含量的方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.如权利要求1所述的一种凝胶法-测定阿立哌唑一水合物细菌内毒素含量的方法，其特征在于，步骤d供试品溶液和鲎试剂混合后溶液的ph值为6.0～8.0。
