本发明属于生物医学材料，涉及止血材料，具体涉及一种coli/rada-16/saap-148复合材料、制备方法及其应用。
背景技术：
1、胶原蛋白占人体皮肤干重的四分之三，其中i型胶原蛋白是构成正常成人皮肤的主体，约占80％。且因胶原具有高亲水性、可降解、生物相容性好等优点，被广泛应用于生物医学作为止血材料、生物支架材料或皮肤替代材料等。虽然胶原蛋白能够在一定程度上促进伤口组织修复，但是由于伤口中环境适合细菌等微生物的生长，并会引起伤口区域疼痛、肿胀和发红，而单一胶原蛋白的抗菌和止血效果并不优良，导致其促进创面愈合的效果受限。
2、rada-16多肽能够在中性ph溶液和生理盐溶液中自组装形成三维纳米纤维结构。由于这种结构仿生了纤维蛋白原被激活后形成的纤维蛋白结构，可网罗血细胞和血小板形成血栓，从而快速止血。此外，rada-16多肽的降解产物为氨基酸，不易引起炎症反应，因此具有良好的生物相容性、低免疫原性等优势，是一种优异的止血材料。
3、saap-148多肽是一种具有抗菌和抗生物膜活性的新型合成肽，saap-148多肽与ll-37多肽(一种人体内发现的cathelicidin类抗菌肽)具有相似的抗菌活性和内毒素中和活性，此外，saap-148多肽的抗生物膜活性优于ll-37多肽。
技术实现思路
1、针对现有技术存在的不足，本发明的目的在于，提供一种coli/rada-16/saap-148复合材料、制备方法及其应用，解决现有技术中胶原蛋白材料的止血、抑菌和促进组织修复作用有待进一步提高的技术问题。
2、为了解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案予以实现：
3、一种col i/rada-16/saap-148复合材料，由i型胶原蛋白、rada-16多肽和saap-148多肽制成；所述的i型胶原蛋白的氨基酸序列如seq id no.1所示；所述的rada-16多肽的氨基酸序列如seq id no.2所示；所述的saap-148多肽的氨基酸序列如seq id no.3所示。
4、本发明还包括如下技术特征
5、具体的，所述的i型胶原蛋白、rada-16多肽和saap-148多肽的质量之比为(2000～5000):(1000～2000):(3～5)。
6、本发明还保护一种如上所述的col i/rada-16/saap-148复合材料的制备方法，该方法包括如下步骤：
7、步骤一，获取i型胶原蛋白溶液；
8、步骤二，col i/rada-16/saap-148复合材料的制备：
9、将步骤一得到的i型胶原蛋白溶液在5pa、﹣58℃的条件下进行真空冷冻干燥，然后将干燥的i型胶原蛋白溶液和rada-16多肽溶解在体积分数为0.1％乙酸溶液中混匀；用1m的naoh溶液将上述混合溶液ph值调节至7.0后加入saap-148多肽溶液；最后将上述溶液加入孔径为1.0cm的聚四氟乙烯板中，在3pa、﹣58℃的条件下进行真空冷冻干燥，制得col i/rada-16/saap-148复合材料。
10、具体的，所述的步骤一包括如下步骤：
11、步骤1.1，胶原蛋白液的粗提：
12、将鼠尾清洗后置医用酒精中浸泡后折断尾骨，剔除皮毛，抽出尾腱置培养皿中，用生理盐水浸泡清洗，待抽出足够的尾腱后，将所得的尾腱剪碎成小片段，每1g尾腱中加入50ml的体积分数为0.1％的乙酸溶液，振荡，4℃冰箱中放置一周，期间每天定时摇晃4～6次；一周后以4000rpm的转速，4℃进行离心30min，吸取上清；随后再次加入体积分数为0.1％乙酸溶液，于上述离心后所得的沉淀中，4℃冰箱放置2～3天后，以4000rpm的转速在4℃离心30min，取上清，并将两次所得的上清液混合，得到粗提胶原蛋白液；
13、步骤1.2，胶原蛋白液的纯化：
14、向步骤1.1获得的粗提胶原蛋白液中加入等体积的2mol/l的nacl溶液，进行盐析；然后再次以4000rpm的转速，在4℃下离心30min，吸弃上清，用无菌ddh2o清洗沉淀；最后用体积分数为0.1％的乙酸溶液重悬沉淀，获得i型胶原蛋白溶液。
15、本发明还保护如上所述的col i/rada-16/saap-148复合材料用于促进细胞增殖和迁移的应用；所述的细胞为小鼠成纤维细胞。
16、具体的，如上所述的col i/rada-16/saap-148复合材料用于促进细胞增殖和迁移的应用，包括：在37℃、5％co2的条件下，将col i/rada-16/saap-148复合材料与小鼠成纤维细胞进行共培养，共培养时间为2h～5天。
17、本发明还保护如上所述的col i/rada-16/saap-148复合材料用于抑制细菌生长和增殖的应用；所述的细菌为大肠杆菌和金黄色葡萄球菌。
18、具体且可选的，如上所述的col i/rada-16/saap-148复合材料用于抑制细菌生长和增殖的应用，包括：当细菌为大肠杆菌时，col i/rada-16/saap-148复合材料的使用浓度为30～50μg/ml。
19、具体且可选的，如上所述的col i/rada-16/saap-148复合材料用于抑制细菌生长和增殖的应用，包括：当细菌为金黄色葡萄球菌时，coli/rada-16/saap-148复合材料的使用浓度为10～50μg/ml。
20、本发明还保护如上所述的col i/rada-16/saap-148复合材料在制备止血材料、生物支架材料或皮肤替代材料中的应用。
21、本发明与现有技术相比的有益技术效果：
22、本发明将皮肤细胞外基质中主要成分之一的i型胶原蛋白与具有止血功能的rada-16多肽和具有抗菌功能的saap-148多肽有机结合起来，同时利用i型胶原蛋白和rada-16多肽的自组装特性，获得了具有微米孔隙-纳米纤维结构的复合材料。与现有的i型胶原蛋白材料相比，本发明的coli/rada-16/saap-148复合材料兼具止血、抑菌和促进组织修复作用，尤其对金黄色葡萄球菌感染的创面的修复效果更好。该材料能够作为生物支架材料、皮肤替代材料、伤口止血材料等。
1.一种col i/rada-16/saap-148复合材料，其特征在于，该材料由i型胶原蛋白、rada-16多肽和saap-148多肽制成；
2.如权利要求1所述的col i/rada-16/saap-148复合材料，其特征在于，所述的i型胶原蛋白、rada-16多肽和saap-148多肽的质量之比为(2000～5000):(1000～2000):(3～5)。
3.一种如权利要求1或2所述的col i/rada-16/saap-148复合材料的制备方法，其特征在于，该方法具体包括如下步骤：
4.如权利要求3所述的col i/rada-16/saap-148复合材料的制备方法，其特征在于，其特征在于，所述的步骤一具体包括如下步骤：
5.如权利要求1或2所述的col i/rada-16/saap-148复合材料用于促进细胞增殖和迁移的应用；所述的细胞为小鼠成纤维细胞。
6.如权利要求5所述的col i/rada-16/saap-148复合材料用于促进细胞增殖和迁移的应用，包括：在37℃、5％co2的条件下，将col i/rada-16/saap-148复合材料与小鼠成纤维细胞进行共培养，共培养时间为2h～5天。
7.如权利要求1或2所述的col i/rada-16/saap-148复合材料用于抑制细菌生长和增殖的应用；所述的细菌为大肠杆菌和金黄色葡萄球菌。
8.如权利要求7所述的col i/rada-16/saap-148复合材料用于抑制细菌生长和增殖的应用，包括：当细菌为大肠杆菌时，col i/rada-16/saap-148复合材料的使用浓度为30～50μg/ml。
9.如权利要求7所述的col i/rada-16/saap-148复合材料用于抑制细菌生长和增殖的应用，包括：当细菌为金黄色葡萄球菌时，col i/rada-16/saap-148复合材料的使用浓度为10～50μg/ml。
10.如权利要求1或2所述的col i/rada-16/saap-148复合材料在制备止血材料、生物支架材料或皮肤替代材料中的应用。
