本发明涉及生物医药，具体涉及一种基于聚乳酸-羟基乙酸(plga)共聚物纳米颗粒表面包裹混合脂质成分的多功能粘膜疫苗递送系统的制备方法及疫苗领域的应用。
背景技术：
1、呼吸道合胞病毒、流感病毒和新型冠状病毒等呼吸道病原体的入侵严重危害生命健康安全。吸入式粘膜免疫相比于传统注射免疫能够同时激发粘膜、体液和细胞免疫应答，建立肺部免疫防线阻止局部感染，并能有效切断病原体传播抑制疾病蔓延。此外，非侵入的接种方式也为儿童和欠发达地区的免疫普及提供有力保障。然而，粘膜递送阻碍和弱免疫原性限制了粘膜疫苗的应用，构建能够兼具克服粘液屏障、细胞内化屏障和诱导粘膜免疫增强的递送系统，是新型粘膜疫苗的发展需求。
2、粘液穿透性纳米颗粒(mpps)是能够跨越粘液屏障的优秀候选者，其亲水和电中性的表面性质能够有效避免颗粒与黏蛋白的交互作用从而实现粘液穿透，该策略已经在呼吸道、肠道和生殖道等粘膜系统疾病中被广泛应用和报道。同时，mpp策略应用于强化粘膜免疫过程也被重点关注。然而，由于粘液穿透和细胞摄取所需的颗粒表面性质相矛盾，如何实现载体颗粒在粘液穿透后被上皮细胞或抗原递呈细胞(apcs)高效摄取依然是制约高效跨粘膜递送的难题。另一方面，由于递送阻碍和粘膜耐受性免疫倾向，单纯抗原通过粘膜途径递送通常导致弱免疫原性，粘膜佐剂的开发和引入是增强免疫原性，诱导局部粘膜和系统性免疫响应的关键。因此，基于粘膜免疫过程中跨粘膜递送和免疫强化的需求，结合单磷酰脂质a(mpla)等一系列小分子佐剂生物安全性高和免疫强化机制清晰的特点和优势，设计和开发多功能粘膜递送平台能够顺应新型粘膜疫苗的发展要求。
技术实现思路
1、本发明制备了一种能够高效跨越气道粘液屏障、促进细胞摄取和诱导免疫增强的粘膜疫苗递送平台。本发明以生物可降解共聚物(plga)为装载核心，外层包裹肺泡表面活性剂仿生脂质和亲脂性佐剂成分的混合脂质涂层用于强化载体颗粒粘液穿透、细胞摄取能力和免疫原性，实现跨越粘膜屏障的同时诱导粘膜免疫响应。构建兼具粘液穿透、细胞摄取和免疫激活功能的脂质仿生疫苗递送系统，其为新型粘膜疫苗的设计、开发和应用提供新的递送平台和践行策略。
2、一种混合脂质涂层包裹共聚物plga的粘膜递送载体的制备方法，包括如下步骤：
3、1)使用双乳液法，制备抗原装载的plga纳米颗粒：将plga溶解于二氯甲烷中形成有机相，向其中添加溶解有活性抗原的水相，使用超声法，先后制备初乳液和复乳液，再将复乳液在室温下连续搅拌，蒸发除去二氯甲烷成分，制备抗原装载的plga纳米颗粒；将所制备的plga纳米颗粒分散于水或磷酸盐缓冲液中，得到plga纳米颗粒悬液。
4、2)将溶解有粘液穿透、细胞摄取和免疫激活功能的混合脂质的三氯甲烷溶液添加入容器中，使用旋蒸镀膜法除去三氯甲烷，将混合脂质镀膜于容器壁面，得到混合脂质涂层。其中，所述粘液穿透、细胞摄取和免疫激活功能的混合脂质由肺泡表面活性剂仿生脂质和佐剂类脂质所组成。
5、3)向步骤2)中镀膜后的容器中加入步骤1)中的plga纳米颗粒悬液，使用超声法促进脂质分子对plga纳米颗粒进行包裹，得到具有核壳结构的，混合脂质涂层包裹共聚物plga的粘膜递送载体。通过控制混合脂质与plga纳米颗粒的添加比例去调控包裹率。
6、针对上述技术方案中，除了调控plga纳米颗粒外涂层的脂质配方实现多功能粘膜递送之外，也可以通过在plga纳米颗粒外层涂覆肺泡表面活性剂仿生脂质成分，在核心plga纳米颗粒中共装载水溶性抗原和佐剂成分来实现。将步骤1)中的活性抗原替换为活性抗原和水溶性佐剂，制备抗原和佐剂共装载的plga纳米颗粒；同时，步骤2)中，将粘液穿透、细胞摄取和免疫激活功能的混合脂质替换为肺泡表面活性剂仿生脂质；即当步骤1)使用抗原装载的plga纳米颗粒时，步骤2)中混合脂质为肺泡表面活性剂仿生脂质和佐剂类脂质组成的混合脂质；当步骤1)使用抗原和水溶性佐剂共装载的plga纳米颗粒时，步骤2)中混合脂质仅为肺泡表面活性剂仿生脂质。其中，水溶性抗原和佐剂共装载的plga纳米颗粒通过与步骤1)中相同的双乳液法制备，而plga纳米颗粒外层肺泡表面活性剂仿生脂质成分的涂覆与步骤2)和3)相同。
7、针对上述技术方案中，所述的粘膜递送载体能够同时实现粘液穿透、细胞摄取和诱导强健的粘膜免疫响应。
8、针对上述技术方案中，所制备的多功能粘膜递送载体为壳核结构，其中壳层为混合脂质层，核心为单独抗原装载或抗原-佐剂共装载的plga纳米颗粒。
9、针对上述技术方案中，步骤1)中双乳液法，有机相使用二氯甲烷，水相使用活性抗原溶液、或活性抗原和水溶性佐剂的混合溶液。其中plga的分子量为4500-200000，优选为20000。所用plga的丙交酯和乙交酯的单元摩尔比为(25-75)：(75-25)，优选为50:50。例如plga添加质量为25-200mg，优选为50mg。所制备的plga纳米颗粒形貌为球型，尺寸为50-500nm，优选为100-500nm，更优选200nm。相应在水相中添加的活性抗原包括但不限于呼吸道合胞病毒表面抗原、流感病毒表面抗原、新型冠状病毒刺突蛋白受体结合域、百日咳毒素、肺炎球菌多糖抗原和模型抗原卵清蛋白(ova)等。相应在水相添加的水溶性佐剂包括但不限于cpg寡脫氧核苷酸(cpg-odn)、聚肌胞苷酸(poly(i:c))和具备转录功功能的mrna成分等。plga不仅能装载抗原，还可以将抗原与水溶性佐剂共装载，实现抗原佐剂成分共递送。基于所装载的抗原和佐剂种类可以制备多型抗原装载或抗原佐剂共装载的plga纳米颗粒。
10、针对上述技术方案中，步骤1)中，plga纳米颗粒采用双乳液法制备，具体为：将plga溶解于二氯甲烷中，得到有机相；其中plga的浓度为10-200mg/ml，优选为50mg/ml；向有机相中添加水相，水相为活性抗原溶液(溶解有活性抗原的水相)、或抗原和水溶性佐剂的混合溶液，其中水相中抗原的浓度为1-50mg/ml，优选为10mg/ml；当水相中含有水溶性佐剂时，水相中佐剂浓度为1-50mg/ml，优选为10mg/ml。所述的plga装载颗粒在制备时有机相与水相的体积比为(1-50)：1，优选为5:1。将有机相与水相混合使用超声法制备初乳液，再向初乳液添加表面活性剂溶液，使用超声法制备复乳液，其中表面活性剂溶液选自聚乙烯醇、胆酸钠盐、吐温20、吐温80和普朗尼克127中的一种或多种的水溶液，优选为聚乙烯醇水溶液；表面活性剂溶液与初乳液的体积比为(1-20)：1，优选为(1-10)：1，；表面活性剂溶液的浓度为0.1-5％(w/v)，优选为1％(w/v)；将复乳液搅拌蒸发二氯甲烷成分，制备装载有抗原、或抗原和佐剂共装载的plga纳米颗粒；其中搅拌温度为13-43℃，优选为25℃；搅拌时间为4-15h，优选为12h。其中，两次乳液制备时，超声强度控制为10w-110w，优选80w；每次超声时间控制为10s-20min，优选为1-5min，更优选为3min。将所制备的plga纳米颗粒洗涤后，分散于水或磷酸盐缓冲液中，得到plga纳米颗粒悬液；plga颗粒悬液的浓度范围为1-50mg/ml，优选为1-20mg/ml，更优选为1-10mg/ml。
11、针对上述技术方案，步骤2)中旋蒸镀膜法，针对未装载佐剂仅装载抗原成分的plga纳米颗粒制备，混合脂质由肺泡表面活性剂仿生脂质和佐剂类脂质组成；针对和佐剂共装载的的plga纳米颗粒制备，混合脂质为肺泡表面活性剂仿生脂质。其中肺泡表面活性剂仿生脂质由磷脂酰胆碱、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰乙醇胺、鞘磷脂和中性结构脂质中的一种或多种组合组成。所述的磷脂酰胆碱选自以下的一种：1,2-二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dppc)、1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dopc)、1,2-二肉豆蔻酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dmpc)、1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dspc)、1-棕榈酰基-2-油酰基卵磷脂(popc)、1,2-二月桂酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dlpc)、1,2-二花生酰基-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(dapc)、1-硬脂酰基-2-肉豆蔻酰基磷脂酰胆碱(smpc)、1-硬脂酰基-2-油酰基磷脂酰胆碱(sopc)、1-硬脂酰基-2-棕榈酰基磷脂酰胆碱(sppc)、1-棕榈酰基-2-肉豆蔻酰基磷脂酰胆碱(pmpc)、1-肉豆蔻酰基-2-硬脂酰基磷脂酰胆碱(mspc)、1-棕榈酰基-2-硬脂酰基磷脂酰胆碱(pspc)、1-肉豆蔻酰基-2-棕榈酰基磷脂酰胆碱(mppc)和1,2-二苞酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(depc)，优选为1,2-二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dppc)；所述的磷脂酰甘油选自以下的一种：1,2-棕榈酰磷脂酰甘油(dppg)、1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸甘油(dspg)、1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酰-rac-(1-甘油)(dopg)、1,2-二肉豆蔻酰-sn-甘油-3-磷酸甘油(dmpg)、1,2-二月桂酰基-sn-甘油-3-磷酸-(1'-rac-甘油)(dlpg)、1-棕榈酰基-2-油酰基磷脂酰甘油(popg)、1-硬脂酰基-2-油酰基磷脂酰甘油(sopg)，优选为1,2-双十六酰基-sn-甘油-3-磷酸-(1′rac甘油)(dppg)；所述的磷脂酰肌醇选自以下的一种：1,2-二十六烷酰基-sn-甘油-3-磷酸-(1′-myo-肌醇)(dppi)、1,2-双十八烷酰基-sn-甘油-3-磷酸-(1′-myo-肌醇)(dspi)、1,2-二-(9z-十八烯酰基)-sn-甘油-3-磷酸肌醇(dopi)和1-十六烷酰基-2-(9z-十八烯酰基)-sn-甘油-3-磷酸-(1′-肌醇)(popi)；所述的磷脂酰丝氨酸选自以下的一种：1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸-l-丝氨酸(dpps)、1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸-l-丝氨酸(dsps)、1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油-3-磷酸-l-丝氨酸(dmps)、1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸-l-丝氨酸(dops)和1,2-二月桂酰-sn-甘油-3-磷酸-l-丝氨酸(dlps)；所述的磷脂酰乙醇胺选自以下的一种：1,2-二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(dppe)、1,2-二硬脂酰基-sn-丙三基-3-磷脂酰乙醇胺(dspe)、1,2-二油酰基-sn-丙三基-3-磷酰乙醇胺(dope)、1,2-二肉豆蔻酰-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺(dmpe)、1-棕榈酰基-2-油酰基乙醇胺(pope)、1,2-二月桂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(dlpe)、1,2-二花生四烯酰基-甘油-3-磷酰乙醇胺(dape)；所述的中性结构脂质为胆固醇。所述的磷脂酰胆碱、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰乙醇胺也可以替换为相对应的聚乙二醇(peg)修饰的形式，其中peg的分子量为800-100000。磷脂酰乙醇胺优选为1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-n-[甲氧基(聚乙二醇)](dppe-peg)；中性结构脂质为胆固醇。其中，dppe-peg中peg的分子量为800-100000，优选为2000。肺泡表面活性剂仿生脂质优选为磷脂酰胆碱、磷脂酰甘油、磷脂酰乙醇胺和中性结构脂质四种脂质的组合方案。当所述的肺泡表面活性剂仿生脂质为磷脂酰胆碱、磷脂酰甘油、磷脂酰乙醇胺和中性结构脂质四种脂质组合时，磷脂酰胆碱、磷脂酰甘油、磷脂酰乙醇胺和中性结构脂质的质量比为(1-10):(1-5):(1-5):(1-5)，优选为10:1:1:1。优选地，肺泡表面活性剂仿生脂质中，dppc、dppg、dppe-peg和胆固醇的质量比为(1-10):(1-5):(1-5):(1-5)，优选为10:1:1:1。佐剂类脂质为单磷酰脂质a(mpla)，被加入上述肺泡表面活性剂仿生脂质中并继续进行步骤2)，佐剂类脂质(mpla)的添加质量与上述所提到的肺泡表面活性剂仿生脂质的质量比为0.0001-0.5：1，优选为0.0001-0.15：1；例如mpla添加质量为1-3250μg，优选为1000μg。容器为圆底烧瓶或茄型瓶，体积为5-50ml，优选为10ml。旋蒸镀膜的条件为：旋蒸镀膜温度为：20-50℃，优选为25℃；旋蒸真空度设置为10-100mbar，优选为80mbar；旋蒸转速为50-300rpm，优选为100rpm。
12、针对上述技术方案中，步骤2)具体为：将溶解混合脂质的三氯甲烷溶液添加入圆底烧瓶或茄型瓶中，使用旋蒸镀膜法除去三氯甲烷，将混合脂质镀膜于容器壁面，得到混合脂质涂层。混合脂质在三氯甲烷中的浓度为1-10mg/ml，优选为4.2-8.3mg/ml；其中当混合脂质仅为肺泡表面活性剂仿生脂质时，4种总脂质(肺泡表面活性剂仿生脂质)在三氯甲烷中的浓度优选为8.3mg/ml；当混合脂质为肺泡表面活性剂仿生脂质和佐剂类脂质组成的混合脂质时，5种总脂质(肺泡表面活性剂仿生脂质和佐剂类脂质)在三氯甲烷中的浓度优选为4.2mg/ml。
13、针对上述技术方案，步骤3)中，混合脂质与plga纳米颗粒的质量比为1：1至9：1，优选为3:1。超声强度为10-50w，优选为30w。超声时间为1-20min，优选为5-20min，更优选20min。
14、针对上述技术方案中，还包括：将混合脂质涂层包裹共聚物plga的多功能粘膜递送载体，分散于生理盐水或磷酸盐缓冲液中保存，浓度范围为0.5-20mg/ml，优选1-10mg/ml。优选地，混合脂质涂层包裹共聚物plga的多功能粘膜递送载体制备完成后使用ph＝7.4的缓冲液分散储存，在动物免疫前将缓冲液替换为生理盐水进行吸入式免疫。
15、针对上述技术方案中，还包括：将混合脂质涂层包裹共聚物plga的多功能粘膜递送载体制备成冻干剂型，利于远距离运输和长期保存。关于冻干剂型的制备，将步骤3)所制备的多功能粘膜递送载体与冻干保护剂混合，预冷冻后使用冷冻干燥机进行冷冻干燥，得到冻干剂型。在制备冻干剂型过程中使用冻干保护剂，所述冻干保护剂选择海藻糖、蔗糖、乳糖、菊糖，优选海藻糖作为保护剂。冻干保护剂为冻干保护剂水溶液，质量浓度为0.5％-20％，优选5％；多功能粘膜载体材料为多功能粘膜载体材料分散液，通过将多功能粘膜载体材料分散于磷酸盐缓冲液中获得，多功能粘膜载体材料的浓度为0.5-20mg/ml，优选1-10mg/ml；冻干保护剂与多功能粘膜载体材料的体积比为(1-10)：1，优选2:1；预冷冻温度为零下20-零下80℃，优选零下80℃；预冷冻时长为2-15h，优选4h；冻干时长为2-72h，优选24h；冻干温度为零下20-80℃，优选零下80℃。
16、本发明plga纳米颗粒经过混合脂质涂层包裹后能够显著促进粘液穿透能力和细胞摄取能力，从而跨越粘膜物理递送屏障。
17、本发明有益效果为：
18、本发明基于生物可降解的plga共聚物和混合脂质成分，通过双乳液法、旋蒸镀膜法和超声法制备了能够同时装载多种抗原和免疫刺激成分的粘膜递送载体颗粒。其中plga纳米颗粒为装载核心，外层混合脂质涂层能够发挥粘液穿透、细胞摄取进而免疫激活的功能。进一步地，本发明也能够适用于例如cpg-odn和poly(i:c)等多种水溶性小分子佐剂的共装载递送。因此，本发明涉及的多功能粘膜递送载体颗粒能够提高抗原分子在粘膜递送过程中抗蛋白酶降解能力，克服粘液和上皮细胞阻碍能力以及诱导抗原特异性的粘膜和系统性免疫响应能力。该多功能粘膜递送载体的多种能力经过细胞和小鼠体内实验得到验证。
1.一种混合脂质涂层包裹共聚物plga的多功能粘膜递送载体的制备方法，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的混合脂质涂层包裹共聚物plga的多功能粘膜递送载体的制备方法，其特征在于，将步骤1)中的活性抗原替换为活性抗原和水溶性佐剂，制备抗原和佐剂共装载的plga纳米颗粒；同时，步骤2)中，将粘液穿透、细胞摄取和免疫激活功能的混合脂质替换为肺泡表面活性剂仿生脂质。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的粘膜递送载体能够同时实现粘液穿透、细胞摄取和诱导强健的粘膜免疫响应。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中，所述的plga的分子量为4500-200000；所用plga中丙交酯和乙交酯的单元摩尔比为(25-75)：(75-25)；所形成的plga纳米颗粒的尺寸为50-500nm；plga纳米颗粒悬液的浓度为1-50mg/ml。
5.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所制备的多功能粘膜递送载体为壳核结构，其中壳层为混合脂质层，核心为单独抗原装载或抗原-佐剂共装载的plga纳米颗粒。
6.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中，所述的抗原为呼吸道合胞病毒表面抗原、流感病毒表面抗原、新型冠状病毒刺突蛋白受体结合域、百日咳毒素、肺炎球菌多糖抗原中的至少一种，所述的水溶性佐剂为cpg-odn、poly(i:c)或具备转录功能的mrna。
7.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中，所述的plga装载颗粒在制备时有机相与水相的体积比为(1-50)：1，有机相中plga的浓度为10-200mg/ml，水相中抗原的浓度为1-50mg/ml；当水相中含有水溶性佐剂时，水相中水溶性佐剂的浓度为1-50mg/ml；所使用超声法的超声强度为10w-110w。
8.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中，所述的plga纳米颗粒采用双乳液法制备，具体为：将plga溶解于二氯甲烷中，得到有机相；向有机相中添加溶解有活性抗原的水相；将有机相与水相混合使用超声法制备初乳液，再向初乳液添加表面活性剂溶液使用超声法制备复乳液；将复乳液搅拌蒸发二氯甲烷，制备装载有抗原的plga纳米颗粒；
9.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述的肺泡表面活性剂仿生脂质由磷脂酰胆碱、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰乙醇胺、鞘磷脂和中性结构脂质中的一种或多种组合组成；佐剂类脂质为单磷酰脂质a(mpla)。
10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述的磷脂酰胆碱选自以下的一种：1,2-二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dppc)、1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dopc)、1,2-二肉豆蔻酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dmpc)、1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dspc)、1-棕榈酰基-2-油酰基卵磷脂(popc)、1,2-二月桂酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dlpc)、1,2-二花生酰基-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(dapc)、1-硬脂酰基-2-肉豆蔻酰基磷脂酰胆碱(smpc)、1-硬脂酰基-2-油酰基磷脂酰胆碱(sopc)、1-硬脂酰基-2-棕榈酰基磷脂酰胆碱(sppc)、1-棕榈酰基-2-肉豆蔻酰基磷脂酰胆碱(pmpc)、1-肉豆蔻酰基-2-硬脂酰基磷脂酰胆碱(mspc)、1-棕榈酰基-2-硬脂酰基磷脂酰胆碱(pspc)、1-肉豆蔻酰基-2-棕榈酰基磷脂酰胆碱(mppc)和1,2-二苞酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(depc)；所述的磷脂酰甘油选自以下的一种：1,2-棕榈酰磷脂酰甘油(dppg)、1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸甘油(dspg)、1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酰-rac-(1-甘油)(dopg)、1,2-二肉豆蔻酰-sn-甘油-3-磷酸甘油(dmpg)、1,2-二月桂酰基-sn-甘油-3-磷酸-(1'-rac-甘油)(dlpg)、1-棕榈酰基-2-油酰基磷脂酰甘油(popg)、1-硬脂酰基-2-油酰基磷脂酰甘油(sopg)；所述的磷脂酰肌醇选自以下的一种：1,2-二十六烷酰基-sn-甘油-3-磷酸-(1′-myo-肌醇)(dppi)、1,2-双十八烷酰基-sn-甘油-3-磷酸-(1′-myo-肌醇)(dspi)、1,2-二-(9z-十八烯酰基)-sn-甘油-3-磷酸肌醇(dopi)和1-十六烷酰基-2-(9z-十八烯酰基)-sn-甘油-3-磷酸-(1′-肌醇)(popi)；所述的磷脂酰丝氨酸选自以下的一种：1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸-l-丝氨酸(dpps)、1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸-l-丝氨酸(dsps)、1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油-3-磷酸-l-丝氨酸(dmps)、1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸-l-丝氨酸(dops)和1,2-二月桂酰-sn-甘油-3-磷酸-l-丝氨酸(dlps)；所述的磷脂酰乙醇胺选自以下的一种：1,2-二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(dppe)、1,2-二硬脂酰基-sn-丙三基-3-磷脂酰乙醇胺(dspe)、1,2-二油酰基-sn-丙三基-3-磷酰乙醇胺(dope)、1,2-二肉豆蔻酰-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺(dmpe)、1-棕榈酰基-2-油酰基乙醇胺(pope)、1,2-二月桂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(dlpe)、1,2-二花生四烯酰基-甘油-3-磷酰乙醇胺(dape)；所述的中性结构脂质为胆固醇。
11.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述的磷脂酰胆碱、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰乙醇胺也可以替换为相对应的聚乙二醇(peg)修饰的形式，其中peg的分子量为800-100000。
12.根据权利要求9所述的体的制备方法，其特征在于，所述的肺泡表面活性剂仿生脂质为磷脂酰胆碱、磷脂酰甘油、磷脂酰乙醇胺和中性结构脂质四种脂质组合，组合时磷脂酰胆碱、磷脂酰甘油、磷脂酰乙醇胺和中性结构脂质的质量比为(1-10):(1-5):(1-5):(1-5)；佐剂类脂质与肺泡表面活性剂仿生脂质的质量比为0.0001-0.5：1。
13.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)，所述的旋蒸镀膜的条件为：温度为：20-50℃，真空度为10-100mbar，转速为50-300rpm；镀膜容器为圆底烧瓶或茄形瓶，容积为5-50ml。
14.根据权利要求1或2所述的混合脂质涂层包裹共聚物plga的多功能粘膜递送载体的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，粘液穿透、细胞摄取和免疫激活功能的混合脂质与plga纳米颗粒的质量比(1-9)：1，超声强度为10w-50w，超声时间为1-20min。
15.根据权利要求1或2所述的制备方法，还包括：将制得的多功能粘膜递送载体，分散于生理盐水或磷酸盐缓冲液中保存。
16.根据权利要求1或2所述的制备方法，还包括：将制得的多功能粘膜递送载体制备成冻干剂型；其中，在制备冻干剂型过程中使用冻干保护剂，所述冻干保护剂选自海藻糖、蔗糖、乳糖、菊糖中的一种或几种，冻干保护剂为冻干保护剂水溶液，冻干保护剂水溶液的质量浓度为0.5％-20％；多功能粘膜载体材料为多功能粘膜载体材料分散液，将多功能粘膜载体材料分散于磷酸盐缓冲液中获得，多功能粘膜载体材料的浓度为0.5-20mg/ml；冻干保护剂与多功能粘膜递送载体材料的体积比为(1-10)：1；预冷冻温度为零下20℃-零下80℃，预冷冻时长为2-15h；冻干温度为零下45℃-零下80℃，冻干时长为2-72h。
