本发明涉及生物，尤其是涉及一种大菱鲆圆环病dna疫苗及其制备方法与应用。
背景技术：
1、大菱鲆(scophthalmus maximus l.)，俗称“多宝鱼”，是重要的经济海水鱼类，工业化养殖的主要品种之一。根据相关记载，目前仅有一半的多宝鱼生长到商业大小，这表明多宝鱼养殖中的疾病可能很严重。随着产量和密度的增长，养殖环境日益恶化，各种传染性疾病也不断暴发和流行，给水产养殖造成了巨大的经济损失，已成为制约水产养殖业健康持续发展的主要瓶颈。
2、经发现，在大菱鲆主养区多地出现一种大菱鲆出血症病害，传播范围广、发病快、死亡率高，从出现明显症状到整池死亡约1周时间，乃至1个月内出现整个养殖车间“清池”、“清棚”。典型的状况是鱼池水面出现较多泡沫(如图1)，池内鱼摄食显著减少甚至不摄食，有鱼出现鱼鳍出血症状。在严重的情况下，捞出的鱼有“出血不止”现象。小规格(如200g以下的规格)的鱼几天后出现大量死亡，较大规格的鱼出现大量死亡的时间比小规格的鱼能延后数天。小规格的鱼死亡率可能高达100％。在较高水温(13-18℃以上)的情况下发病更严重，多个大菱鲆养殖场遭受严重损失。
3、经分子实验等手段证实大菱鲆圆环病毒(turbot circovirus,turcv)是感染导致大菱鲆大规模死亡的病原(如图2)，造成了重大的经济损失，已成为严重危害大菱鲆养殖业健康发展的重要疾病之一。目前，国内外对于turcv病毒的有效治疗手法尚无报道，多采用保守性的预防措施为主，例如科学饲养、及时消毒等。针对turcv也尚无有效的商业化疫苗或治疗药物，对于turcv造成的经济损失仍未得到有效的止损。因此研制安全有效的大菱鲆圆环病毒保护性疫苗对于防控大菱鲆“急性出血症”病的暴发和流行具有重要意义。
技术实现思路
1、本发明的目的就是为了克服现有大菱鲆圆环病毒疫苗的空缺而提供一种大菱鲆圆环病dna疫苗及其制备方法与应用。
2、本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：
3、本发明的技术方案之一为提供一种大菱鲆圆环病dna疫苗，为含有大菱鲆圆环病毒衣壳蛋白capsid基因的重组质粒，所述capsid基因片段的核苷酸序列如seq id no.1所示。
4、本发明的技术方案之二为提供一种如上述技术方案之一所述的大菱鲆圆环病dna疫苗的制备方法，将capsid基因连接到真核表达载体上，得到带有capsid基因的重组质粒，即为大菱鲆圆环病dna疫苗。
5、所述capsid基因片段可通过人工合成得到，或是从大菱鲆圆环病毒基因组pcr扩增得到。
6、在一些具体实施方式中，所述真核表达载体选自pcdna3.1(+)、pet-32a或pegfp-n1中的任意一种。
7、在一些具体实施方式中，所述真核表达载体为构建有蛋白纯化标签的真核表达载体。
8、在一些具体实施方式中，所述蛋白纯化标签选自his标签、flag标签、ha标签、gst标签或sumo标签中的任意一种。
9、本发明的技术方案之三为提供一种如上述技术方案之一所述的大菱鲆圆环病dna疫苗的应用，所述大菱鲆圆环病dna疫苗在养殖鱼类大菱鲆圆环病毒防治中的应用。
10、在一些具体实施方式中，所述养殖鱼类为鲆鲽鱼类，主要为鲆鲽鱼类中的大菱鲆。
11、在一些具体实施方式中，所述大菱鲆圆环病dna疫苗为注射型疫苗。
12、可通过于胸鳍基部注射方式，注射浓度为5～15μg/尾。
13、在一些具体实施方式中，所述大菱鲆圆环病dna疫苗用于提高养殖鱼类的血清总蛋白、超氧化物歧化酶sod活性、中和抗体效价。
14、在一些具体实施方式中，所述大菱鲆圆环病dna疫苗用于提高表达养殖鱼类的免疫基因。
15、所述免疫基因包括白细胞介素-1β(il-1β)、白细胞介素8(il-8)、肿瘤坏死因子-α(tnf-α)和抗病毒基因(mx)。
16、与现有技术相比，本发明制备的针对大菱鲆圆环病毒病的dna疫苗能显著引起鱼体内相关的特异性和非特异性免疫反应，对turcv的攻毒起到良好的保护效果，免疫保护率达85％，可为后期dna疫苗在生产应用及产业化生产中提供理论基础和科学依据。
1.一种大菱鲆圆环病dna疫苗，其特征在于，为含有大菱鲆圆环病毒衣壳蛋白capsid基因的重组质粒，所述capsid基因的核苷酸序列如seq id no.1所示。
2.一种如权利要求1所述的大菱鲆圆环病dna疫苗的制备方法，其特征在于，将capsid基因连接到真核表达载体上，得到带有capsid基因的重组质粒，即为大菱鲆圆环病dna疫苗。
3.根据权利要求2所述的一种大菱鲆圆环病dna疫苗，其特征在于，所述真核表达载体选自pcdna3.1(+)、pet-32a或pegfp-n1中的任意一种。
4.根据权利要求2所述的一种大菱鲆圆环病dna疫苗，其特征在于，所述真核表达载体为构建有蛋白纯化标签的真核表达载体。
5.根据权利要求4所述的一种大菱鲆圆环病dna疫苗，其特征在于，所述蛋白纯化标签选自his标签、flag标签、ha标签、gst标签或sumo标签中的任意一种。
6.一种如权利要求1所述的大菱鲆圆环病dna疫苗的应用，其特征在于，所述大菱鲆圆环病dna疫苗在养殖鱼类大菱鲆圆环病毒防治中的应用。
7.根据权利要求6所述的大菱鲆圆环病dna疫苗的应用，其特征在于，所述养殖鱼类为鲆鲽鱼类。
8.根据权利要求6所述的大菱鲆圆环病dna疫苗的应用，其特征在于，所述大菱鲆圆环病dna疫苗为注射型疫苗。
9.根据权利要求6所述的大菱鲆圆环病dna疫苗的应用，其特征在于，所述大菱鲆圆环病dna疫苗用于提高养殖鱼类的血清总蛋白、sod活性、中和抗体效价。
10.根据权利要求6所述的大菱鲆圆环病dna疫苗的应用，其特征在于，所述大菱鲆圆环病dna疫苗用于提高表达养殖鱼类的免疫基因。
