本发明属于基因工程,涉及一种重组iii型人源胶原蛋白及其制备方法和用途。
背景技术:
1、胶原蛋白(collagen)一般为白色、透明、无分支的原纤维,是皮肤和骨骼的基础支撑物,其是哺乳动物体内含量最多的一类蛋白质,是细胞外基质的重要组成成分。人体中胶原蛋白含量占总蛋白的25%~30%,是一种重要的结构蛋白,起着保护机体、支撑器官的重要作用。胶原蛋白种类较多,常见类型为i型、ii型、iii型、v型和xi型。在正常皮肤组织中,胶原主要以i、iii型胶原纤维的形式存在。相比于i型胶原纤维,iii型胶原纤维较细,存在于表皮层和真皮层之间,是撑起表皮的关键,称之为“婴儿胶原蛋白”,iii型胶原蛋白的流失是肌肤塌陷的第一步。此外,iii型胶原蛋白还是i型和ii型胶原蛋白原纤维直径的重要调节剂。因此,iii型胶原蛋白与皮肤损伤修复过程和修复质量紧密相关。iii型胶原蛋白是同三聚体,或由三个相同的肽链(单体)组成的蛋白质,每个肽链称为iii型胶原蛋白的α1链。单体在形式上被称为iii型胶原或α-1链,在人类中是由col3a1基因编码的。iii型胶原蛋白是原纤维胶原蛋白之一,其蛋白质具有长且不可弯曲的三螺旋结构域,也正是这种空间结构决定了其对皮肤良好的支撑作用。
2、目前胶原蛋白主要有动物组织提取以及基因工程方法制备两种途径来源。天然提取的胶原蛋白是多种不同分子量胶原蛋白组成的混合物,纯度较低且不溶于水,生物相容性较差。并且由于来源于动物组织,对于动物源疾病或者人传染疾病有交叉感染的风险。因此,动物组织提取方法极大限制了胶原在化妆品、食品、药品等各类产品中的广泛用途;并且加工提取时需要使用酸、碱或酶来处理,会产生巨量废水,严重伤害环境。通过基因工程方法制备的胶原蛋白,可以解决传统方式提取的胶原蛋白带来的疾病感染风险,并且通过对胶原蛋白氨基酸序列的优化,可改善胶原蛋白的稳定性,提高胶原蛋白的亲水性,以及优化发挥胶原蛋白的发挥促细胞增殖和迁移功能的最小功能片段,从而使制备的胶原蛋白保有三螺旋结构域的同时兼具良好的组织相容性、皮肤透过性和安全性。
3、然而,原始基因序列的胶原蛋白结构复杂,c端富集二硫键以及蛋白序列中存在多个无序结构域,使得按照原始基因序列制备的胶原蛋白在体外容易发生降解或聚集,难以自发的组织形成正确的空间结构。这些iii型胶原蛋白的结构特点阻碍了人胶原蛋白的研发和生产。因此,在通过基因工程方式制备胶原蛋白的过程中,需要选择合适的胶原结构域,并对选择的胶原结构域的氨基酸序列进行合理的优化,以便能够提高胶原蛋白的制备效率。此外开发能够促进蛋白正确折叠的重组表达制备方法,以确保制备的iii胶原蛋白具有正确的空间结构域也是获得稳定且高活性的重组胶原蛋白的重要策略。
技术实现思路
1、本发明的目的是克服现有技术中通过基因工程手段制备稳定的且具备空间三螺旋结构的原始基因序列iii型人源胶原蛋白难度大,异源胶原蛋白生物相容性差以及容易携带病原的问题的缺陷,提供一种重组iii型人源胶原蛋白,空间结构稳定性,且水溶性良好,能够有效促进细胞增殖和迁移;其氨基酸序列来源于天然胶原蛋白氨基酸序列,生物相容性较好。
2、本发明的另外一个目的是提供一种重组iii型人源胶原蛋白的制备方法和用途,通过真核工程菌制备,制备方法简单,在低成本下即可获得较高产量的胶原蛋白。
3、实现上述目的一种技术方案是:一种重组iii型人源胶原蛋白,其氨基酸序列包含seq id no.1所示序列和/或seq id no.2所示序列。
4、上述的一种重组iii型人源胶原蛋白,其中,所述重组iii型人源化胶原蛋白包含n个seq id no.2所示的序列直接相连,n≥2。
5、上述的一种重组iii型人源胶原蛋白,其中,所述重组iii型人源化胶原蛋白包含以下序列中的至少一种:
6、保留以seq id no.2所示的氨基酸序列的蛋白空间结构,在以seq id no.2所示的氨基酸序列中添加、取代、缺失或插入1个或多个氨基酸残基的氨基酸序列;
7、保留以seq id no.2所示的氨基酸序列的蛋白空间结构,n个seq id no.2之间通过直接连接、柔性氨基酸连接序列或刚性氨基酸连接序列,所述n个seq idno.2核苷酸序列连接在严格条件下执行,所述严格条件是指保证每个连接的seq id no.2保有α螺旋结构。
8、序列说明:
9、seq id no.1序列为原始iii型人源胶原蛋白序列col3a1168-1196,该序列的二级结构预测显示具有3个α螺旋结构,且不包含无序结构域和容易发生降解的二硫键cys-cys序列,也无易发生水解的asp-pro和asp-tyr序列。基于该序列重组表达的人源iii型胶原蛋白具有稳定的α螺旋结构结构,4℃保存一周后,蛋白无明显降解和聚集情况,且蛋白熔解温度(tm)为43℃,表明在储存和使用过程中,该重组蛋白具有良好的热稳定性。
10、seq id no.1:
11、glagypgpagppgppgppgtsghpgspgspgyqgppgepgqagpsgppgppgaigpsgpagkdgesgrpgrpgerglpgppgikgpagipgfpgmkghrgfdgrngekgetgapglkgenglpgengapgpmgprgapgergrpglpgaagargndgargsdgqpgppgppgtagfpgspgakgevgpagspgsngapgqrgepgpqghagaqgppgppgingspggkgemgpagipgapglmgargppgpagangapglrggagepgkngakgepgprgergeagipgvpgakgedgkdgspgepganglpgaagergapgfrgpagpngipgekgpagergapgpagprgaagepgrdgvpggpgmrgmpgspggpgsdgkpgppgsqgesgrpgppgpsgprgqpgvmgfpgpkgndgapgkngerggpggpgpqgppgkngetgpqgppgptgpggdkgdtgppgpqglqglpgtggppgengkpgepgpkgdagapgapggkgdagapgergppglagapglrggagppgpeggkgaagppgppgaagtpglqgmpgergglgspgpkgdkgepggpgadgvpgkdgprgptgpigppgpagqpgdkgeggapglpgiagprgspgergetgppgpagfpgapgqngepggkgergapgekgeggppgvagppggsgpagppgpqgvkgergspggpgaagfpgarglpgppgsngnpgppgpsgspgkdgppgpagntgapgspgvsgpkgdagqpgekgspgaqgppgapgplgiagitgarglagppgmpgprgspgpqgvkgesgkpganglsgergppgpqglpglagtagepgrdgnpgsdglpgrdgspggkgdrgengspgapgapghpgppgpvgpagksgdrgesgpagpagapgpagsrgapgpqgprgdkgetgergaagikghrgfpgnpgapgspgpagqqgaigspgpagprgpvgpsgppgkdgtsghpgpigppgprgnrgergsegspghpgqpgppgppgapgpc
12、seq id no.2序列为在seq id no.1的序列基础上保留首个α螺旋结构域,即原始iii型人源胶原蛋白序列col3a1168-557,该序列不包含无序结构域和容易发生降解的二硫键cys-cys序列,也无易发生水解的asp-pro和asp-tyr序列,并且不包含容易发生水解的谷氨酰胺(gln)。基于该序列表达的重组iii型人源化胶原蛋白具有稳定的α螺旋结构,4℃保存一周后,蛋白无明显降解和聚集情况。且与基于seq id no.1重组表达的iii型人源胶原蛋白相比,基于seq id no.2序列重组表达的iii型人源胶原蛋白的熔解温度(tm)值更高(45℃),表明seq id no.2序列比seq id no.1序列具有更好的热稳定性。
13、seq id no.2:
14、glagypgpagppgppgppgtsghpgspgspgyqgppgepgqagpsgppgppgaigpsgpagkdgesgrpgrpgerglpgppgikgpagipgfpgmkghrgfdgrngekgetgapglkgenglpgengapgpmgprgapgergrpglpgaagargndgargsdgqpgppgppgtagfpgspgakgevgpagspgsngapgqrgepgpqghagaqgppgppgingspggkgemgpagipgapglmgargppgpagangapglrggagepgkngakgepgprgergeagipgvpgakgedgkdgspgepganglpgaagergapgfrgpagpngipgekgpagergapgpagprgaagepgrdgvpggpgmrgmpgspggpgsdgkpgppgsq
15、优选地,2个重复的seq id no.2序列直接相连的胶原蛋白包含α螺旋结构域,且不包含无序结构域和容易发生降解的二硫键cys-cys序列,也无易发生水解的asp-pro和asp-tyr序列以及不包含容易发生水解的谷氨酰胺(gln)。相较于seq idno.1和seq id no.2的胶原蛋白序列,2个重复的seq id no.2序列直接相连表达的重组iii型人源化胶原蛋白结构稳定性更佳,熔解温度(tm)为46℃,且表现出更为显著的促细胞增殖和迁移的效果。
16、3个重复的seq id no.2:
17、(glagypgpagppgppgppgtsghpgspgspgyqgppgepgqagpsgppgppg aigpsgpagkdgesgrpgrpgerglpgppgikgpagipgfpgmkghrgfdgrngekgetgapglkgenglpgengapgpmgprgapgergrpglpgaagargndgargsdgqpgppgppgtagfpgspgakgevgpagspgsngapgqrgepgpqghagaqgppgppgingspggkgemgpagipgapglmgargppgpagangapglrggagepgkngakgepgprgergeagipgvpgakgedgkdgspgepganglpgaagergapgfrgpagpngipgekgpagergapgpagprgaagepgrdgvpggpgmrgmpgspggpgsdgkpgppgsq)2
18、本发明还提供了一种重组iii型人源胶原蛋白的制备方法,包括以下步骤:
19、s1,重组表达载体的构建:制备表达iii型人源胶原蛋白的编码基因的ppic9k质粒,请参阅图1,具体为:
20、s11,根据genbank iii型人源胶原蛋白col3a1基因序列,合成编码原始iii型人源胶原蛋白col3a1168-1196(seq id no.1)的基因序列(c端带有终止密码子);合成2个重复的直接连接的col3a1168-557(seq id no.2)的基因序列,且使用兼并密码子替换第二个重复序列的n端和c端的各7个氨基酸的碱基序列。
21、编码seq id no.1的基因序列(c端带有终止密码子):
22、5’ggactcgcaggctatcctggaccagctggccccccaggccctcccggt ccccctggtacatctggtcatcctggttcccctggatctccaggataccaaggaccccctggtgaacctgggcaagctggtccttcaggccctccaggacctcctggtgctataggtccatctggtcctgctggaaaagatggagaatcaggtagacccggacgacctggagagcgaggattgcctggacctccaggtatcaaaggtccagctgggatacctggattccctggtatgaaaggacacagaggcttcgatggacgaaatggagaaaagggtgaaacaggtgctcctggattaaagggtgaaaatggtcttccaggcgaaaatggagctcctggacccatgggtccaagaggggctcctggtgagcgaggacggccaggacttcctggggctgcaggtgctcggggtaatgacggtgctcgaggcagtgatggtcaaccaggccctcctggtcctcctggaactgccggattccctggatcccctggtgctaagggtgaagttggacctgcagggtctcctggttcaaatggtgcccctggacaaagaggagaacctggacctcagggacacgctggtgctcaaggtcctcctggccctcctgggattaatggtagtcctggtggtaaaggcgaaatgggtcccgctggcattcctggagctcctggactgatgggagcccggggtcctccaggaccagccggtgctaatggtgctcctggactgcgaggtggtgcaggtgagcctggtaagaatggtgccaaaggagagcccggaccacgtggtgaacgcggtgaggctggtattccaggtgttccaggagctaaaggcgaagatggcaaggatggatcacctggagaacctggtgcaaatgggcttccaggagctgcaggagaaaggggtgcccctgggttccgaggacctgctggaccaaatggcatcccaggagaaaagggtcctgctggagagcgtggtgctccaggccctgcagggcccagaggagctgctggagaacctggcagagatggcgtccctggaggtccaggaatgaggggcatgcccggaagtccaggaggaccaggaagtgatgggaaaccagggcctcccggaagtcaaggagaaagtggtcgaccaggtcctcctgggccatctggtccccgaggtcagcctggtgtcatgggcttccccggtcctaaaggaaatgatggtgctcctggtaagaatggagaacgaggtggccctggaggacctggccctcagggtcctcctggaaagaatggtgaaactggacctcagggacccccagggcctactgggcctggtggtgacaaaggagacacaggaccccctggtccacaaggattacaaggcttgcctggtacaggtggtcctccaggagaaaatggaaaacctggggaaccaggtccaaagggtgatgccggtgcacctggagctccaggaggcaagggtgatgctggtgcccctggtgaacgtggacctcctggattggcaggggccccaggacttagaggtggagctggtccccctggtcccgaaggaggaaagggtgctgctggtcctcctgggccacctggtgctgctggtactcctggtctgcaaggaatgcctggagaaagaggaggtcttggaagtcctggtccaaagggtgacaagggtgaaccaggcggtccaggtgctgatggtgtcccagggaaagatggcccaaggggtcctactggtcctattggtcctcctggcccagctggccagcctggagataagggtgaaggtggtgcccccggacttccaggtatagctggacctcgtggtagccctggtgagagaggtgaaactggccctccaggacctgctggtttccctggtgctcctggacagaatggtgaacctggtggtaaaggagaaagaggggctccgggtgagaaaggtgaaggaggccctcctggagttgcaggaccccctggaggttctggacctgctggtcctcctggtccccaaggtgtcaaaggtgaacgtggcagtcctggtggacctggtgctgctggcttccctggtgctcgtggtcttcctggtcctcctggtagtaatggtaacccaggacccccaggtcccagcggttctccaggcaaggatgggcccccaggtcctgcgggtaacactggtgctcctggcagccctggagtgtctggaccaaaaggtgatgctggccaaccaggagagaagggatcgcctggtgcccagggcccaccaggagctccaggcccacttgggattgctgggatcactggagcacggggtcttgcaggaccaccaggcatgccaggtcctaggggaagccctggccctcagggtgtcaagggtgaaagtgggaaaccaggagctaacggtctcagtggagaacgtggtccccctggaccccagggtcttcctggtctggctggtacagctggtgaacctggaagagatggaaaccctggatcagatggtcttccaggccgagatggatctcctggtggcaagggtgatcgtggtgaaaatggctctcctggtgcccctggcgctcctggtcatccaggcccacctggtcctgtcggtccagctggaaagagtggtgacagaggagaaagtggccctgctggccctgctggtgctcccggtcctgctggttcccgaggtgctcctggtcctcaaggcccacgtggtgacaaaggtgaaacaggtgaacgtggagctgctggcatcaaaggacatcgaggattccctggtaatccaggtgccccaggttctccaggccctgctggtcagcagggtgcaatcggcagtccaggacctgcaggccccagaggacctgttggacccagtggacctcctggcaaagatggaaccagtggacatccaggtcccattggaccaccagggcctcgaggtaacagaggtgaaagaggatctgagggctccccaggccacccagggcaaccaggccctcctggacctcctggtgcccctggtccttgctga-3’
23、编码2个重复seq id no.2的基因序列(第二个重复基因序列的5’和3’使用兼并密码子进行序列优化)
24、5’ggactcgcaggctatcctggaccagctggccccccaggccctcccggt ccccctggtacatctggtcatcctggttcccctggatctccaggataccaaggaccccctggtgaacctgggcaagctggtccttcaggccctccaggacctcctggtgctataggtccatctggtcctgctggaaaagatggagaatcaggtagacccggacgacctggagagcgaggattgcctggacctccaggtatcaaaggtccagctgggatacctggattccctggtatgaaaggacacagaggcttcgatggacgaaatggagaaaagggtgaaacaggtgctcctggattaaagggtgaaaatggtcttccaggcgaaaatggagctcctggacccatgggtccaagaggggctcctggtgagcgaggacggccaggacttcctggggctgcaggtgctcggggtaatgacggtgctcgaggcagtgatggtcaaccaggccctcctggtcctcctggaactgccggattccctggatcccctggtgctaagggtgaagttggacctgcagggtctcctggttcaaatggtgcccctggacaaagaggagaacctggacctcagggacacgctggtgctcaaggtcctcctggccctcctgggattaatggtagtcctggtggtaaaggcgaaatgggtcccgctggcattcctggagctcctggactgatgggagcccggggtcctccaggaccagccggtgctaatggtgctcctggactgcgaggtggtgcaggtgagcctggtaagaatggtgccaaaggagagcccggaccacgtggtgaacgcggtgaggctggtattccaggtgttccaggagctaaaggcgaagatggcaaggatggatcacctggagaacctggtgcaaatgggcttccaggagctgcaggagaaaggggtgcccctgggttccgaggacctgctggaccaaatggcatcccaggagaaaagggtcctgctggagagcgtggtgctccaggccctgcagggcccagaggagctgctggagaacctggcagagatggcgtccctggaggtccaggaatgaggggcatgcccggaagtccaggaggaccaggaagtgatgggaaaccagggcctcccggaagtcaaggcttggcgggttacccgggcccagctggccccccaggccctcccggtccccctggtacatctggtcatcctggttcccctggatctccaggataccaaggaccccctggtgaacctgggcaagctggtccttcaggccctccaggacctcctggtgctataggtccatctggtcctgctggaaaagatggagaatcaggtagacccggacgacctggagagcgaggattgcctggacctccaggtatcaaaggtccagctgggatacctggattccctggtatgaaaggacacagaggcttcgatggacgaaatggagaaaagggtgaaacaggtgctcctggattaaagggtgaaaatggtcttccaggcgaaaatggagctcctggacccatgggtccaagaggggctcctggtgagcgaggacggccaggacttcctggggctgcaggtgctcggggtaatgacggtgctcgaggcagtgatggtcaaccaggccctcctggtcctcctggaactgccggattccctggatcccctggtgctaagggtgaagttggacctgcagggtctcctggttcaaatggtgcccctggacaaagaggagaacctggacctcagggacacgctggtgctcaaggtcctcctggccctcctgggattaatggtagtcctggtggtaaaggcgaaatgggtcccgctggcattcctggagctcctggactgatgggagcccggggtcctccaggaccagccggtgctaatggtgctcctggactgcgaggtggtgcaggtgagcctggtaagaatggtgccaaaggagagcccggaccacgtggtgaacgcggtgaggctggtattccaggtgttccaggagctaaaggcgaagatggcaaggatggatcacctggagaacctggtgcaaatgggcttccaggagctgcaggagaaaggggtgcccctgggttccgaggacctgctggaccaaatggcatcccaggagaaaagggtcctgctggagagcgtggtgctccaggccctgcagggcccagaggagctgctggagaacctggcagagatggcgtccctggaggtccaggaatgaggggcatgcccggaagtccaggaggaccaggaagtgatgggaaaccgggtcccccaggttcccag-3’
25、s12,设计扩增引物,分别对编码col3a1168-1196(seq id no.1)和编码col3a1168-557(seq id no.2)的基因序列,以及两个重复的seq id no.2基因序列进行扩增。且所用正向(f)扩增引物均融合了ppic9k质粒中编码α-factor的基因序列3’端19bp同源序列,反向(r)扩增引物均融合了ppic9k质粒中aox1terminator序列5’端的15bp同源序列。
26、col3a1168-1196_f:gaaaagagaggctgaagctggactcgcaggctatcctgcol3a1168-1196_r:cagtcatgtctaaggcgaagcaaggaccaggggcac
27、col3a1168-557_f:gaaaagagaggctgaagctggactcgcaggctatcctgcol3a1168-557_r:cagtcatgtctaaggcgaattgacttccgggaggccc
28、(col3a1168-557)2_f:
29、gaaaagagaggctgaagctggactcgcaggctatcctg
30、(col3a1168-557)2_r:cagtcatgtctaaggcgaactgggaacctgggggac
31、s13,利用reverse pcr扩增线性化载体linearized ppic9k。
32、linearized ppic9k_f:ttcgccttagacatgactgttcc
33、linearized ppic9k_r:agcttcagcctctcttttctcg
34、s14,使用gibson assembly试剂盒将上述3种扩增序列与线性载体linearizedppic9k质粒连接,50℃,孵育15min,随后将连接物转化入dh5α大肠杆菌感受态细胞,并在含有氨苄青霉素的lb培养板上筛选阳性克隆。并确认含有正确连接序列的col3a1168-1196_ppic9k,col3a1168-557_ppic9k和col3a1168-557-col3a1168-557_ppic9k质粒。
35、s2,毕赤酵母基因重组工程菌的构建:将制备得到的col3a1168-1196_ppic9k,col3a1168-557_ppic9k和col3a1168-557-col3a1168-557_ppic9k质粒用限制性内切酶pme i线性化,并制备毕赤酵母gs115感受态细胞;
36、电击转化线性化的col3a1168-1196_ppic9k,col3a1168-557_ppic9k和col3a1168-557-col3a1168-557_ppic9k质粒,并在不含有组氨酸的最小葡萄糖培养基(md)平板上筛选阳性克隆。筛选出的阳性克隆进一步以g418梯度法挑选高拷贝阳性克隆,挑取对应的阳性克隆保存菌株的同时,取部分菌落在ypd培养基中培养扩增后,提出基因组并测序,测序正确的毕赤酵母基因工程菌-80℃保存;
37、s3,制备基因重组人源胶原:用bmgy培养基于30℃,220rpm培养毕赤酵母基因工程菌16~18小时,1:5(体积比)接种于发酵罐中,罐中同氧,保持氧气在75%以上,培养至od600=200时,加入1%甲醇诱导,30℃,诱导72小时。发酵结束后,离心收集上清,采用100kda截流膜包进行纯化,洗脱缓冲液为pbs(ph7.4),收集<100kda的样品溶液。随后使用30kda的截流膜包进行纯化,收集<100kda且>30kda的样品溶液。采用超滤系统(pall)脱盐、浓缩。浓缩液经冷冻干燥制得基因重组人源胶原蛋白。
38、本发明还提供了上述的重组iii型人源胶原蛋白在制备产品中的用途。
39、上述的重组iii型人源胶原蛋白的用途,其中,所述产品为组织工程产品、化妆品、保健品或药物。
40、上述的重组iii型人源胶原蛋白的用途,其中,所述重组iii型人源胶原蛋白用于制备具有促进皮肤修复作用的产品。
41、上述的重组iii型人源胶原蛋白的用途,其中,所述产品的剂型为气雾剂、喷雾剂、粉雾剂、凝胶剂、乳膏剂或注射剂,所述重组iii型人源胶原蛋白作为各剂型产品的活性成分。
42、采用本发明的重组iii型人源胶原蛋白及其制备方法和用途的技术方案,具有以下有益效果:
43、(1)相比传统胶原,完全人源化的基因重组胶原蛋白避免了动物胶原带来的免疫排斥反应,杜绝了生物安全隐患,工艺过程对环境友好;
44、(2)相比较现有原核工程菌的胶原,基因重组人源胶原蛋白无内毒素隐患;
45、(3)相比较现有来自真核工程菌的胶原,基因重组人源胶原蛋白具备稳定的空间结构,是胶原蛋白发挥组织支撑作用的关键因素,满足微创、整形美容、伤口修复产品使用。
46、(4)相比较现有来自真核工程菌的胶原,本发明的基因重组iii型人源胶原蛋白序列来自与原始iii型人源胶原蛋白序列,无任何标签和多余序列引入,可有效避免人体的过敏反应,具备较好的安全性。
1.一种重组iii型人源胶原蛋白,其特征在于,其氨基酸序列包含seq id no.1所示序列和/或seq id no.2所示序列。
2.如权利要求1所述的一种重组iii型人源胶原蛋白,其特征在于,所述重组iii型人源化胶原蛋白包含n个seq id no.2所示的序列直接相连,n≥2。
3.如权利要求1所述的一种重组iii型人源胶原蛋白,其特征在于,所述重组iii型人源化胶原蛋白包含以下序列中的至少一种:
4.一种如权利要求1至3任意一项所述的重组iii型人源胶原蛋白的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
5.一种如权利要求1至3任意一项所述的重组iii型人源胶原蛋白在制备产品中的用途。
6.如权利要求5所述的重组iii型人源胶原蛋白的用途,其特征在于,所述产品为组织工程产品、化妆品、保健品或药物。
7.如权利要求5所述的重组iii型人源胶原蛋白的用途,其特征在于,所述重组iii型人源胶原蛋白用于制备具有促进皮肤修复作用的产品。
8.如权利要求5所述的重组iii型人源胶原蛋白的用途,其特征在于,所述产品的剂型为气雾剂、喷雾剂、粉雾剂、凝胶剂、乳膏剂或注射剂,所述重组iii型人源胶原蛋白作为各剂型产品的活性成分。
