本发明属于生物医药领域，具体涉及一种携带shisa3基因的腺相关病毒及其构建方法和在肿瘤免疫治疗中的应用。
背景技术：
1、目前，靶向肿瘤微环境(tme)组分的免疫疗法是治疗肿瘤最有力的手段之一，为癌症患者带来希望。鉴于tme的复杂性，靶向tme组分的肿瘤免疫治疗策略仍存在较大的提升空间。肿瘤相关巨噬细胞(tam)是存在于tme中重要的免疫细胞，在形成tme、肿瘤免疫和免疫治疗中发挥关键作用。多项研究证实，m2型巨噬细胞存在向m1型转化的潜能。因此，深入阐明巨噬细胞极化的分子机制，建立有效促使tam向m1型巨噬细胞转化的方法，将对改善肿瘤免疫治疗疗效产生积极影响。
2、近年来基于tam的肿瘤免疫治疗的研究聚焦在三个方向：(1)抑制tam募集；(2)减少tam的数量；(3)tam表型重编程。围绕巨噬细胞极化这一重要生物学过程，寻找未被发现的极化调控因子，将为基于tam的肿瘤免疫治疗提供新靶点。
3、最近，mikala egeblad等人发表文章(sun l,kees t,almeida as,liu b,etal.activating a collaborative innate-adaptive immune response to controlmetastasis.cancer cell.2021,39(10):1361-1374.e9.)表明，单磷酰脂质a(lps最主要成分类脂a的一种衍生物)联合ifn-γ可重编辑tam，激活tam的复极化，并且通过调节细胞因子及趋化因子的表达，招募免疫细胞，激活i型ifn反应，改善免疫抑制的肿瘤微环境。这为我们寻找tam复极化的分子靶点提供了坚实的理论依据。saar gill博士发表在《naturebiotechnology》的文章(klichinsky m,ruella m,shestova o,et al.human chimericantigen receptor macrophages for cancer immunotherapy.nat biotechnol.2020,38(8):947-953.)介绍了一种新型肿瘤免疫治疗的方式：car-巨噬细胞(car-m)。他们用ad5f35重组腺病毒载体转导制备的car-m可产生持久的m1表型，car-m的肿瘤杀伤能力不仅未被tme中的m2型tam影响，还可将tam转化为m1型，该疗法有可能克服t细胞疗法在实体瘤治疗中面临的挑战。
4、shisa3已被证实是一种抑癌基因，shisa3启动子高甲基化在多种肿瘤中发生，包括乳腺癌、结直肠癌、鼻咽癌等。然而，shisa3在免疫细胞，包括对巨噬细胞极化的调控及功能的影响均未见报道。
5、腺相关病毒载体(aav)具有不插入宿主基因组、不改变基因组结构、免疫原性低、表达时程长、特异性好的优点，已被证明可以实现高效且安全的体内、外研究。此外，aav的不同血清型具有组织、细胞亲嗜性，通过选择对巨噬细胞亲和性强的血清型，可以实现对细胞的特异性基因转导。此外，随着新型基因组编辑工具的出现，纳米颗粒也可以作为传递平台，通过精确的基因编辑来构建免疫细胞。
技术实现思路
1、本发明的一个目的是针对以上要解决的技术问题，提供一种携带shisa3基因的腺相关病毒，从而有效促进巨噬细胞向m1型极化，增强其对肿瘤细胞的吞噬作用，促进肿瘤消除，为肿瘤免疫治疗提供治疗方案。
2、本发明的另一个目的是提供所述腺相关病毒的构建方法。
3、本发明的再一个目的是所述腺相关病毒在肿瘤免疫治疗中的应用。
4、为了实现以上目的，本发明提供了一种携带shisa3基因的腺相关病毒，其中，所述腺相关病毒为重组腺相关病毒，并包含如seq id no：1所示的核苷酸序列。
5、本发明还提供了一种细胞，其含有所述腺相关病毒。优选地，所述细胞是293t细胞或骨髓诱导的巨噬细胞。
6、本发明还提供了所述腺相关病毒的构建方法，其包括病毒包装和纯化。
7、本发明还提供了所述腺相关病毒在制备抗肿瘤药物中的应用。优选地，所述肿瘤包括但不限于肺癌、淋巴瘤、白血病。
8、本发明还提供了所述腺相关病毒在制备促进免疫疗法功效的药物中的应用。优选地，所述免疫疗法包括但不限于pd-l、pd/l1疗法。
9、本发明还提供了所述腺相关病毒在制备提高过继巨噬细胞联合免疫治疗功效的药物中的应用。优选地，所述免疫治疗包括但不限于pd-l、pd/l1疗法。
10、本发明还提供了所述腺相关病毒在制备促进巨噬细胞的m1型极化和吞噬肿瘤细胞能力的药物中的应用。
11、实验证实，在原代小鼠巨噬细胞中，aav表达系统进行基因过表达的效果理想，且不会引起细胞产生炎症反应，可以安全、高效的进行体内、外基因编辑。
12、本发明提供的携带shisa3基因的腺相关病毒可以安全、高效的介导基因表达，有效促进巨噬细胞向m1型极化，增强其对肿瘤细胞的吞噬作用，在体内、体外均可抑制肿瘤生长，促进肿瘤消除，在小鼠荷瘤模型中，通过过继免疫治疗的方式，给小鼠注射aav1-shisa3感染的巨噬细胞，并联合使用pd-1抗体，发现其抗肿瘤效果显著强于对照组，为肿瘤治疗提供了新策略。
1.一种携带shisa3基因的腺相关病毒，其特征在于，所述腺相关病毒包含如seq idno：1所示的核苷酸序列。
2.一种细胞，其特征在于，所述细胞含有根据权利要求1所述的腺相关病毒。
3.根据权利要求2所述的细胞，其特征在于，所述细胞是293t细胞或骨髓诱导的巨噬细胞。
4.根据权利要求1所述腺相关病毒的构建方法，其包括病毒包装和纯化。
5.根据权利要求1所述的腺相关病毒在制备抗肿瘤药物中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述肿瘤是肺癌、淋巴瘤、肠癌或白血病。
7.根据权利要求1所述的腺相关病毒在制备促进免疫疗法功效的药物中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述免疫疗法是pd-l疗法或pd/l1疗法。
9.根据权利要求1所述的腺相关病毒在制备提高过继巨噬细胞联合免疫治疗功效的药物中的应用。
10.根据权利要求1所述的腺相关病毒在制备促进巨噬细胞的m1型极化和吞噬肿瘤细胞能力的药物中的应用。
