1.本发明涉及水产育种技术领域，具体为中华鳖显微注射早期胚胎定位器及胚胎定位方法。
背景技术：2.中华鳖(pelodiscus sinensis)隶属于爬行纲龟鳖目鳖科鳖属，俗称甲鱼、团鱼、王八等，其在我国分布于除新疆、西藏和青海以外的各个省份。中华鳖作为我国重要的名贵水产品之一，其养殖规模逐年增加，2020年中华鳖全国总产量达32.55万吨，居世界首位。
3.作为主要水产养殖品种，中华鳖产业对良种的需求迫切。目前通过国家审定的中华鳖水产新品种，均以群体选择为主要技术路线。因为中华鳖通常3年性成熟，所以选育一个中华鳖新品种需要十五年以上。基因编辑技术为水产品种遗传改良提供了一种快速、高效的技术选择，目前多个水产物种均在开展相关研究。中华鳖营卵生生殖方式，受精卵产出已发育至囊胚期。对中华鳖进行基因编辑操作只能采取对早期胚胎进行显微注射。但由于中华鳖受精卵被覆卵膜和卵壳，早期胚胎难以准确观察。通过扩大卵壳和卵膜开孔尺寸的方式，会极大降低显微注射操作胚胎的成活率。
4.同为卵生动物的禽类，其转基因与基因编辑常规采取打破原壳，分离胚盘，在胚盘下腔显微注射后转入替壳孵化的方法。中华鳖卵黄膜十分脆弱，无法实施替壳孵化操作。当胚胎发育出背部主血管时，可以通过强光源定位胚胎位置。但在心脏和血管尚未形成的中华鳖早期胚胎阶段，尚无相关定位技术报道。因此，找到中华鳖早期胚胎准确定位的技术，对于中华鳖基因编辑显微注射至关重要。
技术实现要素：5.本发明的目的在于提供中华鳖显微注射早期胚胎定位器，该定位器具有装夹效果好以及随时挪动鳖蛋位置方便的优点。
6.为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
7.中华鳖显微注射早期胚胎定位器包括下固定盘、固定柱、转动柱、用于固定鳖蛋的固定装置、驱动固定装置夹紧不同规格鳖蛋的驱动装置以及上挡光盖；
8.所述转动柱的一端和下固定盘相固定，另一端和固定柱转动连接；
9.驱动装置包括第一滑动座、滑动块、传动齿块、主动轮、第一从动轮、第一传动带、第二传动带、第二从动轮以及第二滑动座；
10.第一滑动座固定设置在固定柱的侧端，第一滑动座上设有适配滑动块滑动的第一滑动槽；
11.所述传动齿块固定设置在滑动块的上端，所述主动轮和传动齿块啮合传动，所述主动轮和第一从动轮通过第一传动带传动连接，第二传动带的一端和第一从动轮缠绕固定，另一端和第二从动轮底端相固定；
12.第二滑动座固定设置在固定柱的侧端，所述第二滑动座设置于第一滑动座的上
端，所述第二从动轮和第二滑动座滑动连接；
13.所述固定装置包括用于固定夹紧鳖蛋的紧固绳；
14.所述第二从动轮和紧固绳传动连接；
15.所述上挡光盖上设有透光孔，所述透光孔所在位置位于鳖蛋的正上方。
16.作为优选，所述驱动装置还包括连接杆，所述连接杆的一端和传动齿块相固定，另一端和滑动块相固定。
17.作为优选，固定装置包括一号弧形定位夹片、二号弧形定位夹片、三号弧形定位夹片、四号弧形定位夹片、弧形弹性件以及弧形滑动块；
18.二号弧形定位夹片、三号弧形定位夹片的端部铰接，二号弧形定位夹片、三号弧形定位夹片的端部设有供紧固绳穿过的第一通孔；
19.一号弧形定位夹片、二号弧形定位夹片、三号弧形定位夹片、四号弧形定位夹片上均设有适配弧形滑动块滑动的弧形滑槽，所述弧形滑动块和弧形弹性件的数量均为四个，所述弧形滑动块的一端和弧形滑槽的槽底相固定，另一端和弧形滑动块相固定；
20.第二滑动座上设有通槽；
21.紧固绳穿过第一通孔，绕至一号弧形定位夹片、二号弧形定位夹片、三号弧形定位夹片、四号弧形定位夹片外侧端，且穿过通槽和第二从动轮相固定。
22.作为优选，一号弧形定位夹片、二号弧形定位夹片、三号弧形定位夹片、四号弧形定位夹片外侧端均设有适配紧固绳嵌入的嵌槽。
23.作为优选，固定装置还包括固定底托、第一固定连接杆和第二固定连接杆，所述第一固定连接杆的一端和固定底托相固定，另一端和第二滑动座的底部相固定，所述第二固定连接杆的一端和三号弧形定位夹片相固定，另一端和固定底托相固定。
24.作为优选，驱动装置还包括转动驱动杆，所述转动驱动杆转动穿设于滑动块，所述固定柱侧端设有螺纹槽，相应地，所述转动驱动杆朝向固定柱一端设有与螺纹槽适配的螺纹段。
25.作为优选，转动驱动杆的自由端固定设有转动柄部。
26.作为优选，所述固定柱的上端设有延展柱，所述延展柱上套设有弹性件，所述上挡光盖固定穿设于延展柱上。
27.作为优选，该定位器还包括锁紧部，所述锁紧部螺接套设在延展柱上，且将上挡光盖锁紧固定。
28.作为优选，该定位器还包括紧固连接杆，所述紧固连接杆的一端和第二滑动座相固定，另一端和一号弧形定位夹片相固定。
29.中华鳖显微注射早期胚胎定位方法，该方法包括如下步骤：
30.s01、用于胚胎定位的中华鳖卵需产出后及时采集，采集时间窗口为卵产出后为0～6h；
31.s02、中华鳖卵胚胎定位诱导前需进行气室定位，采用冷光源强光照射，对气室圈用铅笔做标记；
32.s03、将上述做好气室标记的中华鳖卵置于上述中华鳖显微注射早期胚胎定位器中，在爬行动物孵化箱中，设置温度28℃～30℃，相对湿度80％～85％的条件下孵化定位24h；
33.s04、中华鳖卵气室位置与透光孔正对，通过热光源照射，提高气室区域局部温度，在热光源照射24h后，即可诱导中华鳖早期胚胎定位于气室标记圈内。
34.与现有技术相比，本发明的有益效果是：
35.通过使用本发明提供的定位器，可将鳖蛋置于固定装置上固定，实验人员可通过滑动滑动块，从而使得紧固绳对鳖蛋进行固定。实验人员通过使用上述定位器，可方便对鳖蛋进行固定后，并通过特定时间的热光源照射，使得胚胎位于鳖蛋的正上方气室标记圈内，进而便于实验人员的显微注射精准开孔操作。
附图说明
36.图1为本发明提供的中华鳖显微注射早期胚胎定位器的结构示意图；
37.图2为本发明提供的中华鳖显微注射早期胚胎定位器的剖面结构示意图；
38.图3为本发明提供的中华鳖显微注射早期胚胎定位器的局部结构示意图；
39.图4为图3中的a部放大图。
40.图中：1、下固定盘，11、转动柱，12、固定柱，13、第一滑动座，14、滑动块，15、连接杆，16、传动齿块，17、转动驱动杆，20、主动轮，21、第一传动带，22、第一从动轮，23第二传动带，24、第二滑动座，25、第二从动轮，26、紧固绳，27、紧固连接杆，281、一号弧形定位夹片，282、二号弧形定位夹片，283、三号弧形定位夹片，284、四号弧形定位夹片，29、弧形滑动块，30、弧形弹性件，32、延展柱，33、锁紧部，34、上挡光盖，35、固定底托，36、第一固定连接杆，37、第二固定连接杆。
具体实施方式
41.下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
42.如图1～4所示，中华鳖显微注射早期胚胎定位器，包括下固定盘1、固定柱12、转动柱11、用于固定鳖蛋的固定装置、驱动固定装置夹紧不同规格鳖蛋的驱动装置以及上挡光盖34。转动柱11的一端和下固定盘1相固定，另一端和固定柱12转动连接。驱动装置包括第一滑动座13、滑动块14、传动齿块16、主动轮20、第一从动轮22、第一传动带21、第二传动带23、第二从动轮25以及第二滑动座24。第一滑动座13固定设置在固定柱12的侧端，第一滑动座13上设有适配滑动块14滑动的第一滑动槽。传动齿块16固定设置在滑动块14的上端，主动轮20和传动齿块16啮合传动，主动轮20和第一从动轮22通过第一传动带21传动连接，第二传动带23的一端和第一从动轮22缠绕固定，另一端和第二从动轮25底端相固定。第二滑动座24固定设置在固定柱12的侧端，第二滑动座24设置于第一滑动座13的上端，第二从动轮25和第二滑动座24滑动连接。固定装置包括用于固定夹紧鳖蛋的紧固绳26。第二从动轮25和紧固绳26传动连接。上挡光盖34上设有透光孔，透光孔所在位置位于鳖蛋的正上方。
43.在本实施例中，滑动块14滑动时，传动齿块16也随之运动，同时带动与其啮合的主动轮20发生转动。由于主动轮20、第一从动轮22是通过第一传动带21传动连接的，故第一从动轮22可发生转动。第一从动轮22转动时，第二传动带23缠绕固定在其上，可将第二从动轮
25拉动沿着固定柱12侧滑动，在实际应用中，第二从动轮25和固定柱12侧是通过弹簧(图中未示出)连接的，故可实现复位。
44.在本实施例中，驱动装置还包括连接杆15，连接杆15的一端和传动齿块16相固定，另一端和滑动块14相固定。
45.如图3和图4所示，固定装置包括一号弧形定位夹片281、二号弧形定位夹片282、三号弧形定位夹片283、四号弧形定位夹片284、弧形弹性件30以及弧形滑动块29。二号弧形定位夹片282、三号弧形定位夹片283的端部铰接，二号弧形定位夹片282、三号弧形定位夹片283的端部设有供紧固绳26穿过的第一通孔。一号弧形定位夹片281、二号弧形定位夹片282、三号弧形定位夹片283、四号弧形定位夹片284上均设有适配弧形滑动块29滑动的弧形滑槽，弧形滑动块29和弧形弹性件30的数量均为四个，弧形滑动块29的一端和弧形滑槽的槽底相固定，另一端和弧形滑动块29相固定。第二滑动座24上设有通槽。紧固绳26穿过第一通孔，绕至一号弧形定位夹片281、二号弧形定位夹片282、三号弧形定位夹片283、四号弧形定位夹片284外侧端，且穿过通槽和第二从动轮25相固定。
46.在本实施例中，一号弧形定位夹片281、二号弧形定位夹片282、三号弧形定位夹片283、四号弧形定位夹片284外侧端均设有适配紧固绳26嵌入的嵌槽。
47.如图4所示，固定装置还包括固定底托35、第一固定连接杆36和第二固定连接杆37，第一固定连接杆36的一端和固定底托35相固定，另一端和第二滑动座24的底部相固定，第二固定连接杆37的一端和三号弧形定位夹片283相固定，另一端和固定底托35相固定。
48.鳖蛋可置于固定底托35上，且实验人员通过驱动装置驱动紧固绳，紧固绳可围绕至鳖蛋的两侧，将鳖蛋进行固定，从而实现固定装夹的作用。
49.在本实施例中，驱动装置还包括转动驱动杆17，转动驱动杆17转动穿设于滑动块14，固定柱12侧端设有螺纹槽，相应地，转动驱动杆17朝向固定柱12一端设有与螺纹槽适配的螺纹段。
50.在本实施例中，转动驱动杆17的自由端固定设有转动柄部18。
51.在本实施例中，固定柱12的上端设有延展柱32，延展柱32上套设有弹性件31，上挡光盖34固定穿设于延展柱32上。
52.在本实施例中，该定位器还包括锁紧部33，锁紧部33螺接套设在延展柱32上，且将上挡光盖34锁紧固定。
53.在本实施例中，该定位器还包括紧固连接杆27，紧固连接杆27的一端和第二滑动座24相固定，另一端和一号弧形定位夹片281相固定。
54.很显然地，其他未列举的爬行动物，如蛇、蜥蜴等也同样适用于本方法。对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。不应将权利要求中的任何附图标记视为限制所涉及的权利要求。
技术特征：1.中华鳖显微注射早期胚胎定位器，其特征在于，包括下固定盘(1)、固定柱(12)、转动柱(11)、用于固定鳖蛋的固定装置、驱动固定装置夹紧不同规格鳖蛋的驱动装置以及上挡光盖(34)；所述转动柱(11)的一端和下固定盘(1)相固定，另一端和固定柱(12)转动连接；驱动装置包括第一滑动座(13)、滑动块(14)、传动齿块(16)、主动轮(20)、第一从动轮(22)、第一传动带(21)、第二传动带(23)、第二从动轮(25)以及第二滑动座(24)；第一滑动座(13)固定设置在固定柱(12)的侧端，第一滑动座(13)上设有适配滑动块(14)滑动的第一滑动槽；所述传动齿块(16)固定设置在滑动块(14)的上端，所述主动轮(20)和传动齿块(16)啮合传动，所述主动轮(20)和第一从动轮(22)通过第一传动带(21)传动连接，第二传动带(23)的一端和第一从动轮(22)缠绕固定，另一端和第二从动轮(25)底端相固定；第二滑动座(24)固定设置在固定柱(12)的侧端，所述第二滑动座(24)设置于第一滑动座(13)的上端，所述第二从动轮(25)和第二滑动座(24)滑动连接；所述固定装置包括用于固定夹紧鳖蛋的紧固绳(26)；所述第二从动轮(25)和紧固绳(26)传动连接；所述上挡光盖(34)上设有透光孔，所述透光孔所在位置位于鳖蛋的正上方。2.根据权利要求1所述的中华鳖显微注射早期胚胎定位器，其特征在于，所述驱动装置还包括连接杆(15)，所述连接杆(15)的一端和传动齿块(16)相固定，另一端和滑动块(14)相固定。3.根据权利要求1所述的中华鳖显微注射早期胚胎定位器，其特征在于，固定装置包括一号弧形定位夹片(281)、二号弧形定位夹片(282)、三号弧形定位夹片(283)、四号弧形定位夹片(284)、弧形弹性件(30)以及弧形滑动块(29)；二号弧形定位夹片(282)、三号弧形定位夹片(283)的端部铰接，二号弧形定位夹片(282)、三号弧形定位夹片(283)的端部设有供紧固绳(26)穿过的第一通孔；一号弧形定位夹片(281)、二号弧形定位夹片(282)、三号弧形定位夹片(283)、四号弧形定位夹片(284)上均设有适配弧形滑动块(29)滑动的弧形滑槽，所述弧形滑动块(29)和弧形弹性件(30)的数量均为四个，所述弧形滑动块(29)的一端和弧形滑槽的槽底相固定，另一端和弧形滑动块(29)相固定；第二滑动座(24)上设有通槽；紧固绳(26)穿过第一通孔，绕至一号弧形定位夹片(281)、二号弧形定位夹片(282)、三号弧形定位夹片(283)、四号弧形定位夹片(284)外侧端，且穿过通槽和第二从动轮(25)相固定。4.根据权利要求1所述的中华鳖显微注射早期胚胎定位器，其特征在于，一号弧形定位夹片(281)、二号弧形定位夹片(282)、三号弧形定位夹片(283)、四号弧形定位夹片(284)外侧端均设有适配紧固绳(26)嵌入的嵌槽。5.根据权利要求4所述的中华鳖显微注射早期胚胎定位器，其特征在于，固定装置还包括固定底托(35)、第一固定连接杆(36)和第二固定连接杆(37)，所述第一固定连接杆(36)的一端和固定底托(35)相固定，另一端和第二滑动座(24)的底部相固定，所述第二固定连接杆(37)的一端和三号弧形定位夹片(283)相固定，另一端和固定底托(35)相固定。
6.根据权利要求1所述的中华鳖显微注射早期胚胎定位器，其特征在于，驱动装置还包括转动驱动杆(17)，所述转动驱动杆(17)转动穿设于滑动块(14)，所述固定柱(12)侧端设有螺纹槽，相应地，所述转动驱动杆(17)朝向固定柱(12)一端设有与螺纹槽适配的螺纹段。7.根据权利要求6所述的中华鳖显微注射早期胚胎定位器，其特征在于，转动驱动杆(17)的自由端固定设有转动柄部(18)。8.根据权利要求6所述的中华鳖显微注射早期胚胎定位器，其特征在于，所述固定柱(12)的上端设有延展柱(32)，所述延展柱(32)上套设有弹性件(31)，所述上挡光盖(34)固定穿设于延展柱(32)上；还包括锁紧部(33)，所述锁紧部(33)螺接套设在延展柱(32)上，且将上挡光盖(34)锁紧固定。9.根据权利要求8所述的中华鳖显微注射早期胚胎定位器，其特征在于，还包括紧固连接杆(27)，所述紧固连接杆(27)的一端和第二滑动座(24)相固定，另一端和一号弧形定位夹片(281)相固定。10.中华鳖显微注射早期胚胎定位方法，其特征在于，包括如下步骤：s01、用于胚胎定位的中华鳖卵需产出后及时采集，采集时间窗口为卵产出后为0～6h；s02、中华鳖卵胚胎定位诱导前需进行气室定位，采用冷光源强光照射，对气室圈用铅笔做标记；s03、将上述做好气室标记的中华鳖卵置于上述中华鳖显微注射早期胚胎定位器中，在爬行动物孵化箱中，设置温度28℃～30℃，相对湿度80％～85％的条件下孵化定位24h；s04、中华鳖卵气室位置与透光孔正对，通过热光源照射，提高气室区域局部温度，在热光源照射24h后，即可诱导中华鳖早期胚胎定位于气室标记圈内。
技术总结本发明涉及水产育种技术领域，具体为中华鳖显微注射早期胚胎定位器及胚胎定位方法。中华鳖显微注射早期胚胎定位器包括下固定盘、固定柱、转动柱、用于固定鳖蛋的固定装置、驱动固定装置夹紧不同规格鳖蛋的驱动装置以及上挡光盖；转动柱的一端和下固定盘相固定，另一端和固定柱转动连接；驱动装置包括第一滑动座、滑动块、传动齿块、主动轮、第一从动轮、第一传动带、第二传动带、第二从动轮以及第二滑动座。本发明具有装夹效果好以及随时挪动鳖蛋位置方便的优点。方便的优点。方便的优点。
技术研发人员：许晓军 关文志 任晋东 陈红林 楼宝
受保护的技术使用者：浙江省农业科学院
技术研发日：2022.03.21
技术公布日：2022/7/5
