1.本发明涉及一种动物细胞生物分析领域，特别是一种动物细胞拆卸组合培养多用途载玻片装置。
背景技术：2.动物细胞的显微学研究是不可替代的，是揭示细胞生理过程和环境等影响对细胞影响的重要手段，但是目前的显微观察主要是依据培养板倒置显微观察，由于有的细胞生长缓慢或者因为测试抑制导致实验进展缓慢都会加剧细胞培养板的磨损和老化，对于细胞培养板材料由于是高分子材料其硬度低不耐磨和带电荷具有染料吸附特性使得对高倍荧光显微观察构成了困难。而目前常用解决方法是提取细胞于玻璃载玻片上单独孵育染色后在观测荧光图像，这种剧烈的环境变化会导致被观测细胞出现变形和结构损伤，以致一些需要在培养过程观测细胞高倍显微特点的研究无法实现。
技术实现要素：3.本发明要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提出了一种可直接将复杂组织样本直接定植在载玻片表面的动物细胞拆卸组合培养多用途载玻片装置。
4.本发明要解决的技术问题是通过以下技术方案来实现的，一种动物细胞拆卸组合培养多用途载玻片装置，其特点是：包括：带有计数标记室刻度的玻璃载玻片；用于安放和固定培养卡环室的外框架；用于盛放液体培养基的培养卡环室；用于固定培养卡环室及玻璃载片的锁紧边框结构；带有防护帽的平头微量进样器头及滤器插孔的培养卡环室钛合金锥形盖子。
5.本发明要解决的技术问题还可以通过以下技术方案来进一步实现，(1)由光学玻璃材料或石英制成的带有计数刻度的载玻片，其中片子的一端为可书写漆面，片子的2/3位置由2个计数刻度标记培养室的安放位置；(2)载玻片为无荧光材质或不含有荧光猝灭效应的石英材质，光学特性稳定且耐磨腐蚀。
6.本发明要解决的技术问题还可以通过以下技术方案来进一步实现，（1）玻璃载玻片边框为尼龙硬质材料镂空制成，载玻片对应培养卡室的开口处外缘由嵌入位置底端环形硅胶密封缓压垫圈；（2）边框纵向两端有卡扣锁紧装置。
7.本发明要解决的技术问题还可以通过以下技术方案来进一步实现，培养卡环室为带有锁紧边条的无底带密封盖的培养室，并熔焊固定有平头进样针，培养卡环室为聚乙烯材料：具有直径25mm培养室，壁厚2mm，高40mm无底环形，边角有锁紧边5mm，环底部边镜面加
工。
8.本发明要解决的技术问题还可以通过以下技术方案来进一步实现，培养卡环的钛合金锥形盖：（1）板长为70mm,宽为35mm,板厚为4mm,铣床加工内直径24mm,宽3mm，深度2mm圆环，在圆环内转孔为2mm孔，熔焊一平头不锈钢进样针，针体在内侧面进行弯折与培养卡环内壁紧贴，从载玻片面计算针长到盖子内面为38mm，另一个孔为3mm，在其中熔焊一个平头短针头不锈钢座用于安装滤膜器。
9.在培养卡环室锥形钛合金盖子有熔焊的金属平头针，用于更换营养液以及洗染细胞工作，防止荧光染料的氧化猝灭发生。
10.本发明的优异效果：(1)使用本装置可以灵活用于显微观测动物细胞培养，使用方便，适合多重任务的显微实验；(2)本装置可以分别检验动物细胞生长形态，也适合对动物细胞凋亡等荧光观察实验；(3)制造成本低廉，使用简便适合无经验的学生等从事细胞显微实验科研工作;(4)本载玻片在教学过程中可以利用标记室作为细胞贴壁率速度观察和计数;(5)培养卡环室可以用做显微荧光染色的染色池，节约试剂和保持实验湿度等参数要求外也防止了致癌化学品的污染提高了致癌性染色剂的使用安全。
11.（6）由于载玻片硬度高耐磨损使得培养细胞显微观察更加清晰减少了照片本底磨痕干扰。
12.（7）由于载玻片无荧光和不产生吸附效应并且适合与有机试剂接触，因此更适合荧光染色的高倍油镜实验观测。
附图说明
13.图1为载玻片框架底座图；图2为图1的截面图；图3为培养卡环室钛合金顶盖图；图4为图3截面图；图5载玻片示意图。
具体实施方式
14.以下进一步描述本发明的具体技术方案，为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，以便于本领域的技术人员进一步地理解本发明，下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例，而不构成对其权利的限制。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
15.一种动物细胞拆卸组合培养多用途载玻片装置，包括：带有计数标记室刻度的玻璃载玻片；用于安放和固定培养卡环室的外框架；
用于盛放液体培养基的培养卡环室；用于固定培养卡环室及玻璃载片的锁紧边框结构；带有防护帽的平头微量进样器头5及滤器插孔4的培养卡环室钛合金锥形盖子。
16.(1)由光学玻璃材料或石英制成的带有计数刻度的载玻片，其中片子的一端为可书写漆面，片子的2/3位置由2个计数刻度标记培养室的安放位置；培养区7及计数室8。
17.(2)载玻片为无荧光材质或不含有荧光猝灭效应的石英材质，光学特性稳定且耐磨腐蚀。
18.（1）玻璃载玻片边框1为尼龙硬质材料镂空制成，载玻片对应培养卡室的开口处外缘由嵌入位置底端环形硅胶密封缓压垫圈3；（2）边框纵向两端有卡扣锁紧装置2。
19.培养卡环室为带有锁紧边条的无底带密封盖的培养室，并熔焊固定有平头进样针，培养卡环室为聚乙烯材料：具有直径25mm培养室，壁厚2mm，高40mm无底环形，边角有锁紧边5mm，环底部边镜面加工。
20.培养卡环的钛合金锥形盖：（1）板长为70mm,宽为35mm,板厚为4mm,铣床加工内直径24mm,宽3mm，深度2mm圆环6，在圆环内转孔为2mm孔，熔焊一平头不锈钢进样针，针体在内侧面进行弯折与培养卡环内壁紧贴，从载玻片面计算针长到盖子内面为38mm，另一个孔为3mm，在其中熔焊一个平头短针头不锈钢座用于安装滤膜器。
21.在培养卡环室锥形钛合金盖子有熔焊的金属平头针，用于更换营养液以及洗染细胞工作，防止荧光染料的氧化猝灭发生。
22.直接将复杂组织样本直接定植在载玻片表面的培养装置，利用细胞在载玻片培养面贴壁生长，通过培养卡环室（滋养池）培养基的营养提供细胞增殖养分。通过钛合金锥形盖固定焊锁不锈钢平头进样针，针座带有防污染保护帽，钛合金锥形盖中间有基于短尾不锈钢平头针座的空气滤膜安装位，用于通气培养时气体交换。细胞培养过程可以实行荧光染色和观察，也可以通过置换洗干净培养基后直接在培养卡环室内直接添加荧光染料等进行染片。当染片结束后可以拆卸掉培养卡环和支架座，脱离带有细胞的载玻片进行直接观察或者封片保存。极大地保持了培养过程状态的细胞结构，减少了因为分离细胞和制片过程对于细胞结构和形态的影响，更是解决了在长时间培养过程中的结构显微观测和活细胞荧光观测困难的问题，推动了动物活细胞显微实验技术应用和教学。
23.为了更清楚地说明本发明，列举以下实施例，但其对本发明的范围无任何限制。
24.实施例（以结肠细胞为例）1.取洁净石英载玻片于70%乙醇中浸泡5分钟，无菌超净台内用细胞培养pbs溶液洗涤三遍，再用细胞培养液洗涤一遍。将载玻片置于卡座放平嵌合好，在标志区安置好无底环形培养卡环，及无菌钛合金盖子，用固定框固定好，其松紧程度有两侧螺旋紧固器调节，通过平头进样针种入细胞培养过夜，通过换气针座接种细胞液，然后用无菌滤膜安置在换气针座用于气体交换，于37℃，5%二氧化碳浓度的培养箱培养使约为50%-80%满。
25.2.作为培养细胞检查阶段，可以在倒置显微镜下正常观测。
26.3.作为细胞凋亡等染毒毒理学观测是，首先添加凋亡药物刺激细胞发生凋亡后，从平头进样针处吸尽培养液，通过该针头注射洗涤液清洗，加入0.5ml固定液，固定10分钟或更长时间（可4℃过夜）。
4.同前法吸去固定液，用pbs洗两遍，每次3分钟，吸尽液体。洗涤时宜用摇床，或手动晃动数次。由于是封闭状态不用担心污染手及试验台。
27.5.同前法加入0.5ml hoechst 33258染色液，染色5分钟。也宜用摇床，或手动晃动数次。6.用pbs洗两遍，每次3分钟。吸干洗液后松开紧固器，小心拿开钛合金盖，弃去培养卡环，轻轻用手指托顶载玻片即可拿到载玻片。7.滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上，盖上盖玻片，尽量避免气泡。使细胞接触封片液，需要注意的是这和以往的盖玻片法培养细胞不一样，不用担心弄反，极大地方便了初学者。
28.8.荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。
29.本发明利用细胞在载玻片培养面贴壁生长，通过培养卡环室（滋养池）培养基的营养提供细胞增殖养分。通过钛合金锥形盖固定焊锁不锈钢平头进样针，针座带有防污染保护帽，钛合金锥形盖中间有基于短尾不锈钢平头针座的空气滤膜安装位，用于通气培养时气体交换。细胞培养过程可以实行荧光染色和观察，也可以通过置换洗干净培养基后直接在培养卡环室内直接添加荧光染料等进行染片。当染片结束后可以拆卸掉培养卡环和支架座，脱离带有细胞的载玻片进行直接观察或者封片保存。极大地保持了培养过程状态的细胞结构，减少了因为分离细胞和制片过程对于细胞结构和形态的影响，更是解决了在长时间培养过程中的结构显微观测和活细胞荧光观测困难的问题，推动了动物活细胞显微实验技术应用和教学。
30.可用于复杂本底组织细胞的活性培养光学显微及荧光染色分析研究，具有保持活性细胞原生形态及动态培养荧光标记物观测的优势解决了目前动物细胞培养观察与荧光镜检时存在的制片繁琐和对细胞形态改变严重的弊端，减少了科研及教学的技术难度提高了效率。
技术特征：1.一种动物细胞拆卸组合培养多用途载玻片装置，其特征在于：包括带有计数标记室刻度的玻璃载玻片；用于安放和固定培养卡环室的外框架；用于盛放液体培养基的培养卡环室；用于固定培养卡环室及玻璃载片的锁紧边框结构；带有防护帽的平头微量进样器头及滤器插孔的培养卡环室钛合金锥形盖子。2.根据权利要求1所述的动物细胞拆卸组合培养多用途载玻片装置，其特征在于：(1) 由光学玻璃材料或石英制成的带有计数刻度的载玻片，其中片子的一端为可书写漆面，片子的2/3位置由2个计数刻度标记培养室的安放位置；(2) 载玻片为无荧光材质或不含有荧光猝灭效应的石英材质，光学特性稳定且耐磨腐蚀。3.根据权利要求1所述的动物细胞拆卸组合培养多用途载玻片装置，其特征在于：（1）玻璃载玻片边框为尼龙硬质材料镂空制成，载玻片对应培养卡环室的开口处外缘由嵌入位置底端环形硅胶密封缓压垫圈；（2）边框纵向两端有卡扣锁紧装置。4.根据权利要求1所述的动物细胞拆卸组合培养多用途载玻片装置，其特征在于：培养卡环室为带有锁紧边条的无底带密封盖的培养室，并熔焊固定有平头进样针，培养卡环室为聚乙烯材料：具有直径25mm培养室，壁厚2mm，高40mm无底环形，边角有锁紧边5mm，环底部边镜面加工。5.根据权利要求1所述的动物细胞拆卸组合培养多用途载玻片装置，其特征在于：培养卡环的钛合金锥形盖：（1）板长为70mm,宽为35mm,板厚为4mm,铣床加工内直径24mm,宽3mm，深度2mm圆环，在圆环内转孔为2mm孔，熔焊一平头不锈钢进样针，针体在内侧面进行弯折与培养卡环内壁紧贴，从载玻片面计算针长到盖子内面为38mm，另一个孔为3mm，在其中熔焊一个平头短针头不锈钢座用于安装滤膜器。
技术总结一种动物细胞拆卸组合培养多用途载玻片装置，包括:带有玻璃载玻片框及培养卡环室、自锁紧固定架和平头微量进样器头顶盖，利用细胞在载玻片培养面贴壁生长，通过培养卡环室（滋养池）培养基的营养提供细胞增殖养分。通过钛合金锥形盖固定焊锁不锈钢平头进样针，针座带有防污染保护帽，钛合金锥形盖中间有基于短尾不锈钢平头针座的空气滤膜安装位，用于通气培养时气体交换。细胞培养过程可以实行荧光染色和观察，也可以通过置换洗干净培养基后直接在培养卡环室内直接添加荧光染料等进行染片。减少了因为分离细胞和制片过程对于细胞结构和形态的影响，更是解决了在长时间培养过程中的结构显微观测和活细胞荧光观测困难的问题。结构显微观测和活细胞荧光观测困难的问题。结构显微观测和活细胞荧光观测困难的问题。
技术研发人员：李姮 卢洋 周翔 周文梅 成群
受保护的技术使用者：连云港市食品药品检验检测中心
技术研发日：2022.03.21
技术公布日：2022/7/5
