磺酰胺类化合物及其在制备治疗自身免疫性疾病药物中的应用

1.本发明涉及医药技术领域，具体涉及具有糖皮质激素受体结合活性的磺酰胺类化合物在制备糖皮质激素受体小分子调节剂中的应用。


背景技术：

2.糖皮质激素(gcs)是在临床被广泛使用的抗炎药物，用于治疗哮喘、银屑病等多种炎症，gcs主要通过糖皮质激素受体(gr)发挥治疗作用。但是糖皮质激素长期使用受到严重副作用的限制，表现在高血压和主要的代谢副作用，如葡萄糖耐受不良、肌肉萎缩、皮肤变薄和骨质疏松。
3.目前研究表明，糖皮质激素的抗炎机制为：未受到gcs激活的gr在细胞质中与结合蛋白如hsp90结合，当与gcs结合，gr lbd构象改变，grα释放hsp，进入细胞核内，作为转录因子发挥对下游基因的转录激活或者转录抑制的作用。一旦进入细胞核，gr就会以同源二聚的形式与gre反应元件即(+)gre结合引起基因的转录表达，这种途径称为gr的转录激活途径。由于gre转录激活途径参与人体糖代谢、骨骼和内分泌功能，目前认为是gcs类药物产生副作用的主要原因。同时gcs结合也可引起gr的直接转录抑制和间接转录抑制：gcs诱导的直接转录抑制是配体激活的gr直接与进化保守的(-)gre结合[反向重复(ir)ngre]；间接转录抑制又称为“tethered transrepression”，gr单体以一种不与dna直接结合的方式通过与特定因子如(nf-κb(p65)，ap1(c-jun)，或stat3)结合从而干扰下游促炎信号通路，引起炎症疾病相关的细胞因子、趋化因子、黏附因子、基质金属蛋白酶和环加氧酶-2(cox-2)等的生成减少。一般认为，gcs的抗炎作用与间接转录抑制相关，而直接转录抑制和直接转录激活与副作用相关。
[0004]
为了降低gcs的副作用，寻找不具有转录激活功能且具有显著抗炎效果的gr小分子调节剂是目前研究抗炎药物的重要策略。以gr
ɑ
为靶标的药物设计，已经取得了巨大成功。结构上，gr由777个氨基酸残基组成，分为4个主要的结构域，分别是n端结构域(ntd)，dna结合域(dbd)，铰链区和c端结构域(配体结合域，lbd)。已报道的研究主要集中于研发部分激动剂或选择性糖皮质激素受体调节剂，这些化合物可激活炎症抑制通路，但避免靶向引起gc相关的副作用的通路。
[0005]
目前已经鉴定出若干具有糖皮质激素受体调节活性的化合物，例如专利文献cn112236416a公开了嘧啶环己烯基类化合物作为糖皮质激素受体调节剂应用于炎症性疾病的治疗。专利文献cn111556867a和cn 111491931a公开经取代的吡咯烷酰胺作为糖皮质激素受体调节剂可用于治疗和/或预防由糖皮质激素受体介导的病症。开发更多具有较少副作用的新颖有效靶向糖皮质激素受体的化合物以扩展临床用药选择是本领域技术人员需要解决的问题。


技术实现要素：

[0006]
本发明的目的在于提供一种具有糖皮质激素受体结合活性的小分子化合物，将其作为靶向糖皮质激素受体的小分子调节剂，用于治疗炎症相关疾病如哮喘，类风湿性关节炎，银屑病等自身免疫性疾病。
[0007]
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
[0008]
本发明提供了结构式如式(ⅰ)-(ⅵ)所示的化合物或其药学上可接受的盐任意一种在制备治疗自身免疫性疾病药物中的应用，
[0009][0010]
其中，
[0011]
r1、r2和r3各自独立地为氢、卤素、氰基、硝基、sf5、scn、氨基、c
1-c6烷基氨基、双(c
1-c6)烷基胺基、羟基、羧基、c
1-c8烷基、c
3-c6环烷基、c
5-c7环烯基、c
1-c6卤代烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6卤代烷氧基、c
3-c6卤代环烷氧基、c
1-c6烷基-c
3-c6卤代环烷氧基、c
1-c6烷基-c
1-c6烷氧基、c
1-c6烷基-c
1-c6卤代烷氧基、c
1-c6烷氧基-c
1-c6烷氧基、c
1-c6烷基-氰基、c
1-c6烷基-c
3-c6环烷基、c
2-c6烯基、c
2-c6烯氧基、c
2-c6炔基、c
2-c6炔氧基、sh、c
1-c6硫代烷基、c
1-c6亚磺酰烷基、c
1-c6磺酰烷基、c
1-c6卤代磺酰烷基、c
1-c6烷基-c
1-c6烷氧胺基、c
1-c6烷基羰基、c
3-c6环烷基羰基、c
1-c6卤代烷基羰基、c
1-c6烷氧羰基、c
1-c6烷基氨基羰基、双(c
1-c6)烷基胺基羰基、五元或六元芳基、五元或六元杂芳基、c
1-c6烷基-五元或六元芳基、五元或六元芳基胺基羰基、五元或六元芳基-c
1-c6烷基、c
1-c6烷基-五元或六元杂芳基、五元或六元杂芳基-c
1-c6烷基、五元或六元芳基羰基、五元或六元芳基酰胺基、五元或六元杂芳基羰基、五元或六元杂芳基酰胺基、五元或六元杂芳基胺基羰基、五元或六元杂环、c
1-c6烷基-五元或六元杂环基、五元或六元杂环基-c
1-c6烷基、五元或六元杂环基羰基、五元或六元杂环基酰胺基、五元或六元杂环基胺基羰基、八元至十四元杂芳二环或三环环系、c
1-c6烷基-八元至十四元杂芳二环或三环环系、八元至十四元杂芳二环或三环环系-c
1-c6烷基、八元至十四元杂芳二环或三环环系基羰基、八元至十四元杂芳二环或三环环系基酰胺基、八元至十四元杂芳二环或三环环系基胺基羰基；
[0012]
或者c
1-c6烷基氨基、双(c
1-c6)烷基胺基、c
1-c8烷基、c
3-c6环烷基、c
5-c7环烯基、c
1-c6卤代烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6卤代烷氧基、c
3-c6卤代环烷氧基、c
1-c6烷基-c
3-c6卤代环烷氧基、c
1-c6烷基-c
1-c6烷氧基、c
1-c6烷基-c
1-c6卤代烷氧基、c
1-c6烷氧基-c
1-c6烷氧基、c
1-c6烷基-氰基、c
1-c6烷基-c
3-c6环烷基、c
2-c6烯基、c
2-c6烯氧基、c
2-c6炔基、c
2-c6炔氧基、c
1-c6硫代烷基、c
1-c6亚磺酰烷基、c
1-c6磺酰烷基、c
1-c6卤代磺酰烷基、c
1-c6烷基-c
1-c6烷氧胺基、c
1-c6烷基羰基、c
3-c6环烷基羰基、c
1-c6卤代烷基羰基、c
1-c6烷氧羰基、c
1-c6烷基氨基羰
基、双(c
1-c6)烷基胺基羰基、五元或六元芳基、五元或六元杂芳基、c
1-c6烷基-五元或六元芳基、五元或六元芳基胺基羰基、五元或六元芳基-c
1-c6烷基、c
1-c6烷基-五元或六元杂芳基、五元或六元杂芳基-c
1-c6烷基、五元或六元芳基羰基、五元或六元芳基酰胺基、五元或六元杂芳基羰基、五元或六元杂芳基酰胺基、五元或六元杂芳基胺基羰基、五元或六元杂环、c
1-c6烷基-五元或六元杂环基、五元或六元杂环基-c
1-c6烷基、五元或六元杂环基羰基、五元或六元杂环基酰胺基、五元或六元杂环基胺基羰基、八元至十四元杂芳二环或三环环系、c
1-c6烷基-八元至十四元杂芳二环或三环环系、八元至十四元杂芳二环或三环环系-c
1-c6烷基、八元至十四元杂芳二环或三环环系基羰基、八元至十四元杂芳二环或三环环系基酰胺基、八元至十四元杂芳二环或三环环系基胺基羰基，被氢、卤素、氰基、硝基、羟基、c
1-c6烷基、c
2-c6烯基、c
2-c6炔基、c
3-c6环烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6卤代烷基、c
1-c6卤代烷氧基或c
1-c6硫代烷基单取代或多取代；
[0013]
p为1，2或3；
[0014]
z为o，n或c；
[0015]
a1，a2各自独立地为h、c、cr1、o、s或nr1，或者和苯环与连续的原子形成并环结构ⅰ或者所述并环结构ⅰ被至少一个r1所取代；
[0016]
q1，q2各自独立地为h、c、cr1、o、s或nr1，或者和z与连续的原子形成并环结构ⅱ或者所述并环结构ⅱ被至少一个r1所取代。
[0017]
优选的，r1为氨基、卤素、c
1-c8烷基、c
1-c6烷基羰基、c
3-c6环烷基羰基、c
1-c6卤代烷基羰基、c
1-c6烷氧羰基、c
1-c6烷基氨基羰基、双(c
1-c6)烷基胺基羰基，
[0018]
或者氨基、c
1-c8烷基、c
1-c6烷基羰基、c
3-c6环烷基羰基、c
1-c6卤代烷基羰基、c
1-c6烷氧羰基、c
1-c6烷基氨基羰基、双(c
1-c6)烷基胺基羰基被氢、卤素、氰基、硝基、羟基、c
1-c6烷基、c
2-c6烯基、c
2-c6炔基、c
3-c6环烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6卤代烷基、c
1-c6卤代烷氧基或c
1-c6硫代烷基单取代或多取代。
[0019]
更为优选，r1为卤素、c
1-c8烷基。卤素、c
1-c8烷基可以被氢、卤素、氰基、硝基、羟基、c
1-c6烷基、c
2-c6烯基、c
2-c6炔基、c
3-c6环烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6卤代烷基、c
1-c6卤代烷氧基或c
1-c6硫代烷基单取代或多取代。
[0020]
优选的，z为c或n。
[0021]
更为优选，z为n。
[0022]
优选的，p为2或3。
[0023]
更为优选，p为3。
[0024]
优选的，r2和r3为h和取代苯并环。
[0025]
所述取代苯并环为
[0026]
优选的，a1，a2为更为优选，a1，a2为优选的，z，q1，q2共同组成取代哌啶、取代吲哚啉、取代哌嗪。
[0027]
优选的，所述化合物的结构式如下：
[0028]
[0029]
[0030]
[0031][0032]
本发明研究表明，上述化合物对靶向糖皮质激素受体具有高选择性、有效抑制下游促炎信号通路nf-κb，ap1等多条通路的激活，抗炎效果显著，并且可以减低副作用的产生。即上述化合物的作用机制为：所述化合物具有糖皮质激素受体结合活性，通过靶向糖皮质激素受体，抑制nf-κb信号通路和/或ap1信号通路，从而降低炎症因子表达。因此，可将所述化合物作为糖皮质激素受体调节剂应用于治疗由糖皮质激素受体介导的病症。
[0033]
进一步的，所述自身免疫性疾病为哮喘、类风湿性关节炎、银屑病、炎症。
[0034]
本发明还提供了制备上述化合物的方法，可通过如下反应路线获得：
[0035]
反应路线1：
[0036][0037]
其中，取代基r＝含有甲基或其他烷基取代、卤素原子取代(-f、-cl、-br)、甲氧基取代、硝基、氰基、噻吩环、三氟甲基等基团取代的芳环或芳杂环。
[0038]
反应路线2：
[0039][0040]
其中，取代基r＝环丙基，苯环基团，吡咯；含有氢、卤素、氰基、硝基、羟基取代基的苯环基团；c1-c6卤代烷氧基单取代或多取代基因；萘环，嘧啶以及其他芳香环或含有卤素或烷基等取代基的芳香环等。
[0041]
取代基r'＝含有ch3或其他烷基取代、卤素原子取代(-f、-cl、-br)、甲氧基取代,硝基,噻吩环,三氟甲基等基团取代的芳环或芳杂环。
[0042]
反应路线3：
[0043][0044]
取代基r”＝-ch3、卤素原子取代(-f、-cl、-br)、-och3、硝基、正丁基、异丙基等烷基取代，芳香环取代、三氟甲基，被氢、卤素、氰基、硝基、羟基、c1-c6烷基、c1-c6卤代烷基、c1-c6卤代烷氧基或c1-c6硫代烷基单取代或多取代等基因。
[0045]
本发明通过上述方法以化合物hp-19为先导化合物，合成新的磺酰胺类化合物，结构式如下列任一所示：
[0046]
[0047][0048]
本发明还提供了一种药物组合物，其含有治疗有效量的一种或多种任一项所述的磺酰胺类化合物，或其药学上可接受的盐，或其氘代物，以及药学上可接受的载体。
[0049]
术语说明：“烷基”，是指包括1-6个碳原子的直链或支链烃链。本发明所用“烷基”的实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正戊基和取代烷基。本发明所述烷基可任选被卤素或羟基一次或多次取代。因此，术语“烷基”还包括，如三氟甲基以及其它卤代烷基，羟基甲基和所指明的其它羟基化的烷基。
[0050]“烷氧基”，是指-o-烷基基团，其中烷基如上所定义。本发明所用“烷氧基”的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、叔丁氧基和取代烷氧基。本发明所述烷氧基可任选被卤素一次或多次取代。
[0051]“芳环”，是指5-12个碳原子的全碳单环或稠合多环基团，具有完全共轭的π电子系统。芳基的非限制性实例有：苯环、萘环、蒽环。
[0052]“芳杂环”，是指5-12个碳原子的非全碳单环或稠合多环基团，具有完全共轭的π电子系统。芳基的非限制性实例有：吡啶、咪唑、呋喃、噻唑、嘌呤、吲哚、噻吩、氮杂吲哚。
[0053]“环烷基”，是指3-8个环原子的饱和碳环，实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基。
[0054]“卤素”，指氟、氯、溴或碘。
[0055]“药学上可接受的盐”包括碱金属盐、碱土金属盐、其他金属盐、无机碱盐、有机碱盐、无机酸盐、低级烷磺酸盐、芳基磺酸盐、有机酸盐、氨基酸盐。
[0056]
优选的，所述药学上可接受的盐为盐酸盐、苯磺酸盐、甲基苯磺酸盐、磷酸盐、马来酸盐、硫酸盐、醋酸盐、枸橼酸盐、富马酸盐或酒石酸盐。
[0057]
药物还包括药学上可接受的载体。所述“药学上可接受的载体”是指药学领域常规的药物载体，包括药学领域的常规稀释剂、赋形剂如水等，填充剂如淀粉等，粘合剂如纤维素衍生物、明胶等，湿润剂如甘油，崩解剂如琼脂、碳酸钙等，吸附载体如高岭土和皂黏土，表面活性剂如十六烷醇，吸收促进剂如季铵化合物，润滑剂如滑石粉等，必要时可以加入香
味剂，甜味剂等。
[0058]
药物制剂适用于通过任何适当途径给药，如鼻腔喷雾、口腔喷雾(吸入剂)、口服(包括含服或舌下给药)、直肠给药、局部给药(包括含服、舌下给药或经皮给药)、阴道给药或胃肠外给药(包括皮下注射、肌内注射、静脉注射或皮内注射)途径。本发明药物制剂可由药剂学中已知的任何方法制备。例如通过将活性成分与载体或赋形剂混在一起的方法。
[0059]
本发明具备的有益效果：
[0060]
本发明提供的化合物具有糖皮质激素受体结合活性，能够靶向糖皮质激素受体配体结构域，有效抑制下游促炎信号通路nf-κb，ap1等多条通路的激活，具有显著的抗炎效果，而且该化合物不能诱导转录激活作用，不会产生由转录激活引起的副作用；另外，所述化合物没有细胞毒性，对其他甾体类核受体没有结合活性，因此将其制备抗炎药物应用到由糖皮质激素受体介导的自身免疫性疾病的治疗中具有潜在应用价值。
附图说明
[0061]
图1为虚拟筛选命中化合物的结构与抗炎活性。
[0062]
图2为化合物hp-19和地塞米松(dex)对于nf-kb的转录抑制。
[0063]
图3为具有明显抗炎活性的化合物在10μm条件下与糖皮质激素受体结合强弱的结果。
[0064]
图4为化合物对gr lbd的结合活性测试。
[0065]
图5为化合物hp-19和地塞米松(dex)对于ap-1的转录抑制(a)以及对于gr转录激活的评价。
[0066]
图6为化合物hp-19，米非司酮(ru486)和azd9567对于gr转录拮抗的评价。
[0067]
图7为qpcr检测hp-19对gr内源性靶基因表达的影响。
[0068]
图8为化合物hp-19的安全性评价。
[0069]
图9为化合物hp-19分别对雄激素受体(a)和孕激素受体(b)的选择性。
具体实施方式
[0070]
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。
[0071]
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0072]
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0073]
实施例1
[0074]
一、基于结构的虚拟筛选
[0075]
实验原理：利用基于结构的虚拟筛选，对化合物数据库中的化合物与糖皮质激素受体之间的结合模式和结合自由能进行预测，筛选能够和糖皮质激素受体结合的小分子化合物。
[0076]
实验方法：基于糖皮质激素受体的晶体结构(pdb编号：6el9)，采用schrodinger分子模拟软件包的glide分子对接模块对chemdiv小分子数据库进行了基于结构的虚拟筛选，打分最佳的3000个化合物进行构象分析，最终购买88个化合物，用于活性筛选。
[0077]
实验结果：筛选得到24个潜在糖皮质激素类似物，并拥有不同的化学骨架(图1)。
[0078]
二、糖皮质激素受体抗炎能力评价实验
[0079]
检测原理：由于糖皮质激素发挥抗炎作用主要是通过转录抑制途径-即抑制nf-κb(p65)和ap1(c-jun)信号通路引起炎症因子的表达降低。双荧光素酶报告基因测试系统灵敏，在一个系统中用于测量两个单独的荧光素酶报告基因，萤火虫荧光素酶和海洋海肾荧光素酶，海洋海肾荧光素酶在不同类型的哺乳动物细胞中表达稳定且表达活性对外界药物刺激不敏感，可以用来校正转染效率不同造成的误差。因此，在双荧光素酶报告基因测试中，renilla luciferase作为对照报告基因提供实验报告基因firefly luciferase测试的归一化；当待测化合物对nf-κb或者ap-1的抑制活性越高时，firefly luciferase/renilla luciferase相对比值越小，说明测得化合物抗炎能力的越强。
[0080]
检测步骤：在本发明检测方法中，将宫颈癌细胞中(hela)以1
×
104个/孔的密度接种至透明的96孔板中。细胞稳定贴壁后，使用lipofectamine 3000将人源全长gr
ɑ
蛋白，pnf-κb-luc以及rencilla(prl-tk)共转染hela。转染24h后，分别使用5ng/ml的tnfα以及10μm测试化合物处理细胞。18h后取出细胞培养板，用pbs液清洗2次后弃去废液，在各孔中分别加入20μl的1
ⅹ
plb裂解液(passive lysis buffer)，每孔30μl。将细胞培养板置于摇床充分裂解30分钟。利用酶标仪测定每个细胞孔中的相对荧光酶含量并得出firefly luciferase/renilla luciferase。
[0081]
检测结果：10μm给药时，化合物对于nf-kb的转录抑制活性如图1。具有苯磺酰胺结构的hp-21，hp-30，hp-49和hp-57在10μm浓度下，对nf-kb的转录抑制活性大于50％。其中hp-49具有更好的nf-kb的转录抑制活性，ic
50
＝0.256μm。具有n-苯基磺酰胺的hp-7对nf-kb的也具有较好转录抑制活性，ic
50
＝0.17μm。
[0082]
在所有24个化合物中，具有n-苯基苯磺酰胺的化合物(如hp-5，hp-11，hp-12，hp-14，hp-18，hp-19，hp-23，hp-25，hp-28，hp-29，hp-31，hp-39和hp-40)的抗炎活性最好。
[0083]
如图2所示，hp-19在测试化合物中具有最强的抑制nf-κb的活性，其ic
50
为41nm，与阳性化合物地塞米松(ic
50
＝12nm)处于同一数量级。
[0084]
选择转录抑制活性大于50％的小分子进一步测得其ic
50
值并用于下一步的靶标验证。
[0085]
三、糖皮质激素受体竞争性结合实验验证与靶标结合强度
[0086]
检测原理：采用了invitrogen公司的采用时间分辨荧光共振能量转移技术(tr-fret)检测化合物对糖皮质激素受体的结合能力。当进行tr-fret gr竞争结合测定时，将fluormone
tm
gs1 green示踪剂添加到配体测试化合物或溶剂对照中，然后添加gr-lbd(gst)和tb-anti-gst抗体的混合物。在室温下孵育2h后，分别在520nm和495nm的波长下分别读数，计算出tr-fret比率值(ratio)为520:495，可用于根据化合物的剂量响应曲线确定ic
50
。如果待测化合物竞争性配体会竞争三元复合物中的配体，使得该比率值下降。并非靶向该位点，则该值保持原水平。利用以上原理，即可定量测定化合物对糖皮质激素受体的靶向结合能力。
[0087]
检测步骤：将糖皮质激素受体配体结合域{gr-lbd(his-gst)}和tb-anti-gst抗体的混合物与不同浓度梯度的待测化合物混合后，再加入具有荧光的配体(fluormone
tm
gs1 green)，以10μm的地塞米松作为阳性对照。使用多功能酶标仪检测ratio的变化，定量测定具有高拮抗活性的化合物是否准确靶向糖皮质激素受体。
[0088]
检测结果：如图3所示，在化合物浓度10μm下，hp-1、hp-6、hp-19、hp-24、hp-26和
mmtv-luc细胞中荧光素酶活性可以量化化合物在细胞水平对于的gr转录拮抗活性。对于具有良好转录拮抗活性的化合物，我们再对其做浓度梯度检测，计算ic
50
值。
[0100]
检测步骤：将hela-mmtv-luc以1
×
104个/孔的密度接种至不透明白色96孔板中。细胞稳定贴壁后，给与100nm地塞米松诱导并同时不同浓度梯度化合物，孵育24小时后，采用多功能酶标仪检测化学发光，并定量计算化合物的转录拮抗活性(ic
50
)，阳性药物米非司酮作为对照。
[0101]
检测结果：如图6所示，化合物hp-19在任何浓度下都不能拮抗由地塞米松引起的转录激活作用，而gr拮抗剂和小分子调节剂都azd9567较强的转录拮抗作用。hp-19可能是一种具有新的抗炎机制的小分子调节剂。
[0102]
六、糖皮质激素受体蛋白靶基因炎症因子的表达
[0103]
检测原理：gr通过转录抑制机制对靶基因进行负向调控，典型的靶基因包括大量的炎症蛋白，如il-1β，il-6,il-8,il-12，环氧合酶2(cox-2)等，gr通过转录激活机制对靶基因进行正向调控，gilz是最早报道通过gcr转录激活诱导基因之一。为了确证化合物hp-19的活性并非假阳性导致，通过在mrna水平检测化合物对糖皮质激素受体内源性靶基因表达的影响，评测化合物的抗炎活性。
[0104]
检测步骤：在mrna水平检测化合物对糖皮质激素受体内源性靶基因表达的影响采用定量pcr(qpcr)的方法。将raw264.7细胞培养在含有5％活性炭/葡聚糖处理胎牛血清(css)培养基的6孔板中。处理48小时后，使用ez-10 dnaaway rna mini-preps试剂盒提取mrna，并逆转录为cdna。使用1st cdna cdna supermix进行qpcr，最后通过qpcr sybr green master mix进行扩增。
[0105]
检测结果：如图7所示，化合物hp-19能显著降低炎症相关基因il-6β和cox-2的mrna水平，而对于il-1β的mrna表达水平无影响，与转录激活实验结果一致的是，该化合物并不影响转录激活作用的靶基因gilz的mrna表达水平，也间接的说明化合物可能会减低副作用的产生。
[0106]
七、mtt法检测化合物hp-19的安全性
[0107]
检测原理：为了检测化合物是否具有细胞毒性，本发明采用正常小鼠胚胎成纤维细胞(nih-3t3)进行毒性检测，以确定其安全性。
[0108]
实验步骤：用完全培养基以5
×
103个/孔密度的nih-3t3细胞接种在96孔板中。细胞贴壁后，37℃孵育24小时，随后采用不同浓度的化合物hp-19处理细胞，继续孵育48小时。之后，每孔加入10μl 5mg/ml mtt，孵育4小时。然后每孔加入sds-hcl-pbs三联缓冲液100μl，37℃过夜孵育。最后，在酶标仪下检测570nm处各孔吸光度值，换算为存活率。
[0109]
实验结果：如图8所示，化合物hp-19在nih-3t3的安全性均与阳性药物地塞米松处于同一水平，即使在高浓度下如50um对细胞的增殖也没有抑制。以上结果说明本发明的化合物hp-19具有较高的安全性。
[0110]
八、检测化合物对于其他核受体的选择性
[0111]
检测原理：为了检测化合物是否对于其他甾体类核受体如雄激素受体(ar)和孕激素受体(pr)具有选择性，我们使用已构建好的lncap-arr2pb-egfp细胞模型和双荧光素酶报告系统分别对ar和pr进行检测。
[0112]
对于ar的检测原理：雄激素受体(ar)作为转录因子，需要与特定的序列结合才能
发挥其转录活性。在本发明检测方法中，在雄激素受体依赖的前列腺癌细胞(lncap)中导入arr2pb启动子控制的报告基因增强型绿色荧光蛋白(egfp)，使得lncap细胞表达雄激素受体调控的egfp前列腺癌细胞系(lncap-arr2pb-egfp)。经不同浓度梯度测试化合物处理后，检测lncap-arr2pb-egfp细胞中egpf的表达量的高低，即可测得化合物对雄激素受体转录激活能力的强弱。
[0113]
检测步骤：先将lncap-arr2pb-egfp细胞在不含雄激素的完全培养基中培养几天，检测背景荧光值。荧光值降至较低水平后，以3.5
×
104个/孔的密度接种至黑色底透的96孔板中。细胞稳定贴壁后，给予二氢睾酮(dht)和化合物诱导，孵育24-48小时后，采用多功能酶标仪在波长485nm激发光下检测530nm波长附近荧光强度值，阳性药物10nm二氢睾酮(dht)作为对照。
[0114]
对于pr的检测原理：孕激素受体(pr)作为转录因子，需要与特定的序列结合才能发挥其转录活性。研究发现，pr可与arr3tk启动子结合并引起下游基因的转录。评价pr的检测方法中，在前列腺癌细胞系pc3中共转染pr，arr3tk-luc和rencilla，rencilla作为内参质粒进行校正，使用双荧光素酶报告基因原理测得的数据
[0115]
检测步骤：在本发明检测方法中，将前列腺细胞株pc3以1
×
104个/孔的密度接种至透明的96孔板中。细胞稳定贴壁后，使用lipofectamine 3000将人源全长pr
ɑ
蛋白，3
ⅹ
ar3tk-luc以及rencilla共转染pc3。转染24h后，使用不同浓度hp-19处理细胞，10ng/ml的progestogen为对照。18h后取出细胞培养板，用pbs液清洗2次后弃去废液，在各孔中分别加入20μl的1
ꢀⅹꢀ
plb裂解液(passive lysis buffer)，每孔30μl。将细胞培养板置于摇床充分裂解30分钟。利用酶标仪测定每个细胞孔中的相对荧光酶含量并得出firefly luciferase/renilla luciferase。
[0116]
实验结果：如图9所示，化合物hp-19并不引起ar和pr的转录激活作用，而阳性药物地塞米松对于ar以及pr都具有一定的转录激活作用。地塞米松对其他核受体的选择性差，也是引起副作用的一个原因。因此，以上结果说明本发明的化合物hp-19具有较好的ar和pr核受体选择性，可在一定程度上避免脱靶而引起的副作用。
[0117]
实施例2
[0118]
以hp-19为先导化合物，通过两种方式获取类似物：1)在chemdiv化合物库中挑选含有n-苯基苯磺酰胺的类似物，通过分子对接预测化合物与gr的结合模式，选择化合物进行抗炎活性评价；2)根据初步的构效关系，订购或合成化合物。具体实施方案如下：
[0119]
具体反应条件和合成路线如下：
[0120]
反应路线1：
[0121][0122]
其中，苯环上任意位置取代基r＝-ch3、-f、-och3[0123]
6-硝基-1,2,3,4-四氢喹啉的获取：
[0124]
将6-硝基喹啉(1.74g，10mmol)，hantatzsch酯(6.33g，25.0mmol)和b(oh)3(123.6mg，2.0mmol)置于250ml单口瓶中，加入100ml二氯乙烷dce作为溶剂。将反应加热到60℃反应过夜。点板监测反应原料点消失后，加入适量硅胶伴样，在真空中去除溶剂dce，将所得粗产物通过柱分离，得到目标产物(1.25g，收率：70％)。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.04(s,1h),7.87(d,j＝2.8hz,1h),6.93(d,j＝2.8hz,1h),3.69(t,j＝6.4hz,2h),2.68(t,j＝6.8hz,2h),1.89(p,j＝6.8hz,2h)；ms(esi):179.08[m+h]
+
。
[0125]
n-呋喃酰基-6-硝基-1,2,3,4-四氢喹啉的获取：
[0126]
将6-硝基-1,2,3,4-四氢喹啉(890.5mg，5mmol)与60％nah(800mg，20mmol)置于100ml双口瓶中，氩气置换保护。于0℃下加入30ml无水thf，加完后0℃反应。待反应0.5h后于0℃下滴加糠酰氯(783.2mg，6mmol)。将反应置于室温下反应2h，点板监测反应完全后加入10ml水猝灭反应。用乙酸乙酯ea与水萃取三次。将合并的有机项用盐水洗涤，经无水na2so4干燥并且过滤。在真空下蒸发滤液以得到粗产品，将所述的粗产品通过柱层析纯化。得到目标化合物(1.09g，产率：80％)。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ8.08(d,j＝3.0hz,1h),7.89(dd,j1＝9.0hz,j2＝3.0hz,1h),7.37(dd,j1＝1.8hz,j2＝0.8hz,1h),7.11
–
6.99(m,2h),6.48(dd,j1＝3.5hz,j2＝2.0hz,1h),4.03
–
3.90(m,2h),2.93(t,j＝7.0hz,2h),2.09(q,j＝6.5hz,2h)；ms(esi):273.09[m+h]
+
。
[0127]
n-呋喃酰基-6-氨基-1,2,3,4-四氢喹啉的获取：
[0128]
将n-呋喃酰基-6-硝基-1,2,3,4-四氢喹啉(54.4mg,0.2mmol)置于schlenk管中，加入催化量10％pd/c 5mg，加入1ml meoh作为溶剂，h2置换后在室温条件下反应过夜，点板显示原料点完全消失后。将反应液以硅藻土过滤，除去pd/c，真空旋干溶剂后可得到当量的产物。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.08(d,j＝2.8hz,1h),7.89(dd,j1＝8.0hz,j2＝2.0hz,1h),7.37(dd,j1＝2.0hz,j2＝1.2hz,1h),7.11
–
6.99(m,2h),6.48(dd,j1＝3.2hz,j2＝1.2hz,1h),4.78(s,2h)，4.03
–
3.90(m,2h),2.93(t,j＝8.0hz,2h),2.09(q,j＝6.4hz,2h)；ms(esi):243.10[m+h]
+
。
[0129]
n-呋喃酰基-6-(2-甲氧基-4，5-甲基苯磺酰胺基)-1,2,3,4-四氢喹啉(hp-19)：
[0130][0131]
将n-呋喃酰基-6-氨基-1,2,3,4-四氢喹啉(48.4mg，0.2mmol)置于schlenk管中，氩气置换保护，加入1ml无水dcm，加入有机碱吡啶(32μl，0.4mmol)。置于0℃下缓慢滴加由1ml无水dcm溶解的2-甲氧基-4，5-甲基苯磺酰氯(46.8mg，0.2mmol)。加完后室温反应2h。反应完全后，加入硅胶伴样，通过柱层析可得到终产物(80mg，92％)。1h nmr(500mhz,acetone-d6)δ7.69(s,1h),7.47(dd,j1＝,2.0hz,j2＝1.0hz,1h),7.22(s,1h),7.11(dt,j1＝2.0hz,j2＝1.0hz,1h),6.91
–
6.87(m,3h),6.61(dd,j1＝3.5hz,j2＝1.0hz,1h),6.48(dd,j1＝3.5hz,j2＝2.0hz,1h),4.00(s,3h),3.81
–
3.79(m,2h),2.74(m,2h),2.17(s,3h),2.38(s,3h),1.96
–
1.91(m,2h)；ms(esi):441.12[m+h]
+
。
[0132]
n-呋喃酰基-6-(2-甲氧基-5-氟苯磺酰胺基)-1,2,3,4-四氢喹啉(hp-a15)：
[0133][0134]
上述方法得到终产物(60.2mg，70％)。1h nmr(500mhz,acetone-d6)δ8.69(s,1h),7.79(dt,j1＝8.0hz,j2＝1.5hz,1h),7.60
–
7.56(m,1h),7.50
–
7.37(m,1h),7.10(dd,j1＝2.5hz,j2＝1.0hz,1h),7.05(td,j1＝8.0hz,j2＝1.0hz,1h),6.89(dd,j1＝9.0hz,j2＝2.5hz,1h),6.83(d,j＝9.0hz,1h),6.53(t,j＝3.0hz,1h),6.46(dd,j1＝3.5hz,j2＝2.0hz,1h),4.00(s,3h),3.78(t,j＝6.5hz,2h),2.71(t,j＝7.0hz,2h),1.91(p,j＝7.0hz,2h).ms(esi):431.09[m+h]
+
。
[0135]
n-呋喃酰基-6-(3,4-二甲氧基苯磺酰胺基)-1,2,3,4-四氢喹啉(hp-a16)：
[0136][0137]
上述方法得到终产物(84mg，95％)。1h nmr(500mhz,acetone-d6)δ8.78(s,1h),7.76
–
7.69(m,1h),7.53(dd,j1＝2.0hz,j2＝1.0hz,1h),7.10
–
7.02(m,3h),6.89
–
6.82(m,2h),6.64(dd,j1＝3.5hz,j2＝1.0hz,1h),6.50(dd,j1＝3.5hz,j2＝2.0hz,1h),3.87(s,3h),3.65(s,3h),3.83
–
3.79(m,2h),2.75(td,j1＝7.0hz,j2＝1.0hz,2h),1.97
–
1.92(m,2h).ms(esi):444.18[m+h]
+
。
[0138]
n-呋喃酰基-6-(4-甲基苯磺酰胺基)-1,2,3,4-四氢喹啉(hp-a17)：
[0139][0140]
上述方法得到终产物(72.9mg，92％)。1h nmr(500mhz,acetone-d6)δ9.14(s,1h),8.05
–
7.99(m,3h),7.94(d,j＝8.5hz,2h),7.53(dd,j1＝2.0hz,j2＝1.0hz,1h),7.09(d,j＝2.5hz,1h),6.91(d,j＝9.0hz,1h),6.85(dd,j1＝9.0hz,j2＝2.5hz,1h),6.69(dd,j1＝3.5hz,j2＝1.0hz,1h),6.50(dd,j1＝3.5hz,j2＝2.0hz,1h),3.84
–
3.80(m,2h),2.76(t,j＝6.5hz,2h),2.42(s,3h)1.97
–
1.93(m,2h)；ms(esi):397.11[m+h]
+
。
[0141]
n-呋喃酰基-6-(4-氟苯磺酰胺基)-1,2,3,4-四氢喹啉(hp-a19)：
[0142][0143]
上述方法得到终产物(64.2mg，80％)。1h nmr(400mhz,acetone-d6)δ8.97(s,1h),7.92
–
7.84(m,2h),7.58(d,j＝1.6hz,1h),7.37(t,j＝8.8hz,2h),7.11(d,j＝2.4hz,1h),6.94
–
6.86(m,2h),6.70(d,j＝3.2hz,1h),6.54(dd,j1＝3.6hz,j2＝1.6hz,1h),3.85(t,j＝6.4hz,2h),2.79(6.8hz,2h),1.99(p,j＝6.4hz,2h)；ms(esi):401.12[m+h]
+
。
[0144]
n-呋喃酰基-6-(4-硝基苯磺酰胺基)-1,2,3,4-四氢喹啉(hp-a22)：
[0145][0146]
上述方法得到终产物(61.5mg，72％)。1h nmr(400mhz,acetone-d6)δ9.24(s,1h),8.46
–
8.39(m,2h),8.11
–
8.03(m,2h),7.57(d,j＝1.6hz,1h),7.12(d,j＝2.4hz,1h),6.98
–
6.81(m,2h),6.73(d,j＝3.6hz,1h),6.53(dd,j1＝3.6hz,j2＝2.0hz,1h),3.84(t,j＝6.4hz,2h),2.78(t,j＝6.4hz,2h),2.00
–
1.96(m,2h).ms(esi):428.12[m+h]
+
。
[0147]
n-呋喃酰基-6-(2-甲氧基-5-氟-4-甲基苯磺酰胺基)-1,2,3,4-四氢喹啉(hp-a23)：
[0148][0149]
上述方法得到终产物(81.0mg，88％)。1h nmr(500mhz,acetone-d6)δ7.69(s,1h),7.47(dd,j1＝2.0hz,j2＝1.0hz,1h),7.22(s,1h),7.11(dt,j1＝2.0hz,j2＝1.0hz,1h),6.91
–
6.87(m,2h),6.61(dd,j1＝3.5hz,j2＝1.0hz,1h),6.48(dd,j1＝3.5hz,j2＝2.0hz,1h),4.00(s,3h),3.81
–
3.79(m,2h),2.74(td,j1＝7.0hz,j2＝1.0hz,2h),2.38(d,j＝
0.5hz,3h),1.96
–
1.91(m,2h).ms(esi):461.08[m+h]
+
。
[0150]
反应路线2：
[0151][0152]
n-苯胺酰基-6-氨基-1,2,3,4-四氢喹啉：
[0153]
将苯胺(186.3mg,2.0mmol)，固体三光气(148.3mg，1.0mmol)加入25ml单口瓶中，加入5ml无水thf溶解，于0℃下滴加三乙胺(1.2ml，8.0mmol)，有大量白色固体析出。滴加完后将反应移至室温反应2h。反应完全后，真空旋干溶剂，加入6-硝基-1,2,3,4-四氢喹啉(178.1mg，1.0mmol)，n,n-二异丙基乙胺(0.52ml，3.0mmol)与5ml溶剂二氯甲烷dcm。室温条件下反应过夜。待反应完后，加入适量硅胶伴样，在真空中去除溶剂dcm，将所得粗产物通过柱分离，得到目标产物(124.8mg，收率：42％)；ms(esi):298.08[m+h]
+
。将所得产物经过10％pd/c(12.5mg)还原氢化。得当量产物(112.2mg)；ms(esi):268.16[m+h]
+
。
[0154]
n-苯胺酰基-6-(2-甲氧基-4,5二甲基苯磺酰胺基)-1,2,3,4-四氢喹啉(hp-a8)：
[0155][0156]
上述方法得到终产物hp-a8(48.4mg，52％)。1h nmr(500mhz,acetone-d6)δ10.20(s,1h)，8.78(s,1h),7.76
–
7.69(m,2h),7.53(dd,j1＝2.0hz,j2＝1.0hz,1h),7.10
–
7.02(m,3h),6.89
–
6.82(m,2h),6.64(dd,j1＝3.5hz,j2＝1.0hz,2h),6.50(dd,j1＝3.5hz,j2＝2.0hz,1h),3.87(s,3h),3.83
–
3.79(m,2h),2.87(s,3h),2.80(s,3h)，2.75(td,j1＝7.0hz,j2＝1.0hz,2h),1.97
–
1.92(m,2h).；ms(esi):466.16[m+h]
+
。
[0157]
n-苯胺酰基-6-(4-甲基苯磺酰胺基)-1,2,3,4-四氢喹啉(hp-a18)：
[0158][0159]
上述方法得到终产物hp-a18(37.9mg，48％)。1h nmr(500mhz,acetone-d6)δ8.69(s,1h),7.79(dt,j1＝8.0hz,j2＝1.5hz,1h),7.58(ddd,j1＝8.5hz,j2＝7.5hz,j3＝2.0hz,1h),7.50
–
7.37(m,1h),7.19(dd,j1＝8.5,j2＝1.0hz,1h),7.10(dd,j1＝2.5hz,j2＝1.1hz,1h),7.05(td,j1＝7.5hz,j2＝1.0hz,1h),6.89(dd,j1＝9.0hz,j2＝2.5hz,1h),6.83(d,j＝
9.0hz,1h),6.53(t,j＝3.0hz,1h),6.46(dd,j1＝3.4hz,j2＝1.8hz,2h),3.78(t,j＝6.4hz,2h),2.71(t,j＝6.6hz,2h),2.40(s,1h)，1.91(p,j＝6.5hz,2h)
.
；ms(esi):422.10[m+h]
+
。
[0160]
反应路线3：
[0161][0162]
n-取代苯酰基-6-氨基-1,2,3,4-四氢喹啉：
[0163]
将各类取代羧酸类有机物(2.0mmol)加入25ml单口瓶中，加入5ml氯化亚砜socl2，反应置于100℃温度条件下回流反应4h。反应完后旋干溶剂，加入适量的无水thf溶解产物。按之前所述方法加入到6-硝基-1,2,3,4-四氢喹啉(178.1mg，1.0mmol)/nah反应体系中，加完后室温反应2h。后处理方法同上述操作，将所得产物经过10％pd/c还原氢化。可以得当量产物。
[0164]
n-吡咯酰基-6-(2-甲氧基-4，5-甲基苯磺酰胺基)-1,2,3,4-四氢喹啉(hp-a1)：
[0165][0166]
上述方法得到终产物(61.5mg，70％)。1h nmr(500mhz,acetone-d6)δ8.71(s,1h),7.68(s,1h),7.57(dd,j1＝5.0hz,j2＝1.5hz,1h),7.21(s,1h),7.13(d,j＝2.5hz,1h),6.92
–
6.85(m,3h),3.99(s,3h),3.81(t,j＝6.5hz,2h),2.75
–
2.73(m,2h),2.39(s,3h),2.25(s,3h),1.97
–
1.93(m,2h)；ms(esi):440.18[m+h]
+
。
[0167]
n-苯酰基-6-(2-甲氧基-4，5-甲基苯磺酰胺基)-1,2,3,4-四氢喹啉(hp-a3)：
[0168][0169]
上述方法得到终产物(79.2mg，88％)。1h nmr(400mhz,acetone-d6)δ8.66(s,1h),7.55(d,j＝6.8hz,2h),7.32(d,j＝8.6hz,2h),7.13
–
7.07(m,3h),7.01(s,2h),3.98(s,3h),3.72(t,j＝6.4hz,2h),2.68(t,j＝6.8hz,2h),2.27(s,3h),2.19(s,3h),1.87(p,j＝6.8hz,3h),0.93(dq,j1＝6.0hz,j2＝3.2hz,2h),0.76(dt,j1＝8.0hz,j2＝3.2hz,2h)；ms(esi):451.12[m+h]
+
。
[0170]
n-环丙酰基-6-(2-甲氧基-4，5-甲基苯磺酰胺基)-1,2,3,4-四氢喹啉(hp-a4)：
[0171][0172]
上述方法得到终产物(58.8mg，71％)。1h nmr(400mhz,acetone-d6)δ7.46(s,1h),7.24(s,1h),7.10(d,j＝2.5hz,1h),7.07
–
7.02(m,1h),7.00(s,1h),3.81(s,3h),3.69(t,j＝6.4hz,2h),3.32(s,3h),2.86(s,2h),2.68(t,j＝6.8hz,2h),2.29(s,3h),2.18(s,3h),1.89(p,j＝6.8hz,2h),1.70(d,j＝8.0hz,2h),1.45(dd,j1＝13.6hz,j2＝10.4hz,2h),1.18(d,j＝9.2hz,2h)；ms(esi):415.18[m+h]
+
。
[0173]
n-苯乙酰基-6-(2-甲氧基-4，5-甲基苯磺酰胺基)-1,2,3,4-四氢喹啉(hp-a7)：
[0174][0175]
上述方法得到终产物(64.1mg，69％)。1h nmr(400mhz,acetone-d6)δ7.62(s,1h),7.55(s,1h),7.43(d,j＝8.0hz,2h)，7.32(d,j＝8.6hz,2h),7.13
–
7.07(m,3h),7.01(t,j＝6.4hz，1h),3.98(s,3h),3.72(t,j＝6.4hz,2h),2.74(s,2h)，2.68(t,j＝6.8hz,2h),2.27(s,3h),2.19(s,3h),1.87(p,j＝6.8hz,2h),0.93(dq,j1＝6.0hz,j2＝3.2hz,2h),0.76(dt,j1＝8.0hz,j2＝3.2hz,2h)；ms(esi):465.13[m+h]
+
。
[0176]
n-环己酰基-6-(2-甲氧基-4，5-甲基苯磺酰胺基)-1,2,3,4-四氢喹啉(hp-a13)：
[0177][0178]
上述方法得到终产物(71.2mg，78％)。1h nmr(400mhz,acetone-d6)δ7.51(s,1h),7.40(tt,j1＝6.4hz,j2＝2.4hz,1h),7.32
–
7.25(m,4h),7.10(d,j＝2.0hz,1h),7.00(s,1h),6.78(dd,j1＝8.6hz,j2＝2.4hz,2h),3.94(s,3h),3.75(t,j＝6.4hz,2h),2.79(t,j＝6.4hz,2h),2.31(s,3h),2.22(s,3h),1.94(q,j＝6.4hz,2h)
.
；ms(esi):457.23[m+h]
+
。
[0179]
n-噻吩酰基-6-(2-甲氧基-5-氟-4-甲基苯磺酰胺基)-1,2,3,4-四氢喹啉(hp-b24)：
[0180][0181]
上述方法得到终产物(78.1mg，82％)。1h nmr(500mhz,acetone-d6)δ8.71(s,1h),
7.68(s,1h),7.57(dd,j1＝5.0hz,j2＝1.5hz,1h),7.21(s,1h),7.13(d,j＝2.5hz,1h),6.92
–
6.85(m,4h),3.99(s,3h),3.81(t,j＝6.5hz,2h),2.75
–
2.73(m,2h),2.39(s,3h),1.97
–
1.93(m,2h).ms(esi):477.09[m+h]+。
[0182]
n-乙酰基-6-(2-甲氧基-5-氟-4-甲基苯磺酰胺基)-1,2,3,4-四氢喹啉(hp-b25)：
[0183][0184]
上述方法得到终产物(79.2mg，88％)。1h nmr(500mhz,acetone-d6)δ8.71(s,1h),7.65(s,1h),7.40
–
7.35(m,1h),7.26(d,j＝6.5hz,4h),7.21(s,1h),7.09(dt,j1＝2.0hz,j2＝1.0hz,1h),6.73(s,2h),3.97(s,3h),3.74(t,j＝6.5hz,2h),2.78(dd,j1＝7.0hz,j2＝1.0hz,2h),2.41
–
2.40(m,3h),1.97
–
1.92(m,2h).ms(esi):409.12[m+h]
+
。
[0185]
n-苯酰基-6-(2-甲氧基-5-氟-4-甲基苯磺酰胺基)-1,2,3,4-四氢喹啉(hp-b26)：
[0186][0187]
上述方法得到终产物(86.5mg，92％)。1h nmr(500mhz,acetone-d6)δ8.79(s,1h),7.69(s,1h),7.20(s,1h),7.04(dd,j1＝17.0hz,j2＝6.0hz,2h),4.00(s,3h),3.66(t,j＝6.5hz,2h),2.66(t,j＝7.0hz,2h),2.13
–
2.02(m,6h),1.87(q,j1＝6.0hz,j2＝5.0hz,2h).ms(esi):471.12[m+h]
+
。
[0188]
n-环丙酰基-6-(2-甲氧基-5-氟-4-甲基苯磺酰胺基)-1,2,3,4-四氢喹啉(hp-b27)：
[0189][0190]
上述方法得到终产物(66.0mg，76％)。1h nmr(500mhz,acetone-d6)δ8.81(s,1h),7.69(s,1h),7.33(d,j＝9.0hz,1h),7.20(s,1h),7.09
–
7.04(m,2h),4.00(s,3h),3.71(t,j＝6.5hz,2h),2.67(t,j＝7.0hz,2h),2.36(s,3h),1.86(dd,j1＝9.0hz,j2＝4.5hz,3h),0.93
–
0.90(m,2h),0.75
–
0.72(m,2h)
.
ms(esi):435.19[m+h]
+
。
[0191]
n-环已酰基-6-(2-甲氧基-5-氟-4-甲基苯磺酰胺基)-1,2,3,4-四氢喹啉(hp-b28)：
[0192]
[0193]
上述方法得到终产物(74.2mg，78％)。1h nmr(600mhz,acetone-d6)δ8.78(s,1h),7.69(d,j＝1.2hz,1h),7.20(s,1h),7.09
–
7.03(m,2h),4.00(s,3h),3.66(t,j＝6.4hz,2h),2.73
–
2.62(m,3h),2.36(s,3h),1.85(p,j＝6.6hz,2h),1.64(dd,j1＝36.0hz,j2＝12.0hz,5h),1.42(td,j1＝12.6hz,j2＝12.0hz,j3＝3.6hz,2h),1.22
–
1.05(m,3h).ms(esi):477.18[m+h]
+
。
[0194]
n-吡啶酰基-6-(2-甲氧基-5-氟-4-甲基苯磺酰胺基)-1,2,3,4-四氢喹啉(hp-b29)：
[0195][0196]
上述方法得到终产物(86.7mg，92％)。1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ9.93(s,1h),7.73(s,1h),7.62(s,1h),7.29
–
7.22(m,2h),7.14(s,1h),6.87
–
6.80(m,2h),3.89(s,3h),3.65
–
3.58(m,2h),3.35(s,6h),3.20(s,3h),2.54
–
2.50(m,3h),2.35(d,j＝8.4hz,6h),1.55(p,j＝6.4hz,2h).ms(esi):472.15[m+h]
+
。
[0197]
n-4-叔丁基苯酰基-6-(2-甲氧基-5-氟-4-甲基苯磺酰胺基)-1,2,3,4-四氢喹啉(hp-b30)：
[0198][0199]
上述方法得到终产物(100.0mg，95％)。1h nmr(600mhz,acetone-d6)δ8.72(s,1h),7.66(s,1h),7.36
–
7.31(m,2h),7.20(s,1h),7.11(d,j＝2.4hz,1h),7.03
–
6.98(m,2h),6.75(dd,j1＝8.4hz,j2＝2.4hz,1h),6.67(s,1h),3.98(s,3h),3.75(t,j＝6.4hz,2h),2.78(t,j＝6.4hz,2h),2.40(s,3h),1.97
–
1.93(m,2h).ms(esi):527.20[m+h]
+
。
[0200]
n-4-甲氧基苯酰基-6-(2-甲氧基-5-氟-4-甲基苯磺酰胺基)-1,2,3,4-四氢喹啉(hp-b31)：
[0201][0202]
上述方法得到终产物(88.3mg，94％)。1h nmr(600mhz,acetone-d6)δ8.69(s,1h),7.66(s,1h),7.21
–
7.20(m,1h),7.17(d,j＝8.4hz,2h),7.10
–
7.06(m,3h),6.77
–
6.69(m,2h),3.98(s,3h),3.75
–
3.72(m,2h),2.79
–
2.76(m,2h),2.40(d,j＝0.6hz,3h),2.33(s,3h),1.93(q,j＝6.6hz,2h).ms(esi):501.17[m+h]
+
。
[0203]
n-3,4-二甲氧基苯酰基-6-(2-甲氧基-5-氟-4-甲基苯磺酰胺基)-1,2,3,4-四氢
喹啉(hp-b32)：
[0204][0205]
上述方法得到终产物(103.9mg，98％)。1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ9.94(s,1h),7.62(s,1h),7.24(s,1h),6.92(d,j＝2.4hz,1h),6.86(d,j＝1.8hz,2h),6.83(d,j＝1.6hz,1h),6.72(d,j＝8.4hz,1h),6.65(dd,j1＝8.4hz,j2＝2.4hz,1h),3.87(s,3h),3.76(s,3h),3.66(t,j＝6.0hz,2h),3.56(s,3h),2.70(t,j＝6.6hz,2h),2.35(s,3h),2.09(s,2h),1.84(q,j＝6.6hz,2h)；ms(esi):531.18[m+h]
+
。
[0206]
实施例3：基于hp-19的类似物活性评价
[0207]
以hp-19为先导化合物，我们共获得24个化合物。如表1和表2所示，10μm给药时，大部分化合物对于nf-kb的转录抑制活性大于50％。而n-苯基磺酰胺类化合物在化合物库中由于骨架类型较少，仅购买了一种hp-26(chemdiv id:v016-8573)，活性评价如下表：
[0208][0209]
表1 n-苯基磺酰胺类化合物(1)对nf-κb转录水平的抑制活性
[0210]
[0211]
[0212][0213][0214]
表2 n-苯基磺酰胺类化合物(2)对nf-κb转录水平的抑制活性
[0215][0216]
对实施例方案的描述旨在解释本发明的原理及举例其实际应用，以便本领域其他技术人员能够利用本发明进行实现及修改。本发明的范围由权利要求书及其等同形式所限定。

技术特征：
1.结构式如式(ⅰ)-(ⅵ)所示的化合物或其药学上可接受的盐任意一种在制备治疗自身免疫性疾病药物中的应用，其中，r1、r2和r3各自独立地为氢、卤素、氰基、硝基、sf5、scn、氨基、c
1-c6烷基氨基、双(c
1-c6)烷基胺基、羟基、羧基、c
1-c8烷基、c
3-c6环烷基、c
5-c7环烯基、c
1-c6卤代烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6卤代烷氧基、c
3-c6卤代环烷氧基、c
1-c6烷基-c
3-c6卤代环烷氧基、c
1-c6烷基-c
1-c6烷氧基、c
1-c6烷基-c
1-c6卤代烷氧基、c
1-c6烷氧基-c
1-c6烷氧基、c
1-c6烷基-氰基、c
1-c6烷基-c
3-c6环烷基、c
2-c6烯基、c
2-c6烯氧基、c
2-c6炔基、c
2-c6炔氧基、sh、c
1-c6硫代烷基、c
1-c6亚磺酰烷基、c
1-c6磺酰烷基、c
1-c6卤代磺酰烷基、c
1-c6烷基-c
1-c6烷氧胺基、c
1-c6烷基羰基、c
3-c6环烷基羰基、c
1-c6卤代烷基羰基、c
1-c6烷氧羰基、c
1-c6烷基氨基羰基、双(c
1-c6)烷基胺基羰基、五元或六元芳基、五元或六元杂芳基、c
1-c6烷基-五元或六元芳基、五元或六元芳基胺基羰基、五元或六元芳基-c
1-c6烷基、c
1-c6烷基-五元或六元杂芳基、五元或六元杂芳基-c
1-c6烷基、五元或六元芳基羰基、五元或六元芳基酰胺基、五元或六元杂芳基羰基、五元或六元杂芳基酰胺基、五元或六元杂芳基胺基羰基、五元或六元杂环、c
1-c6烷基-五元或六元杂环基、五元或六元杂环基-c
1-c6烷基、五元或六元杂环基羰基、五元或六元杂环基酰胺基、五元或六元杂环基胺基羰基、八元至十四元杂芳二环或三环环系、c
1-c6烷基-八元至十四元杂芳二环或三环环系、八元至十四元杂芳二环或三环环系-c
1-c6烷基、八元至十四元杂芳二环或三环环系基羰基、八元至十四元杂芳二环或三环环系基酰胺基、八元至十四元杂芳二环或三环环系基胺基羰基；或者c
1-c6烷基氨基、双(c
1-c6)烷基胺基、c
1-c8烷基、c
3-c6环烷基、c
5-c7环烯基、c
1-c6卤代烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6卤代烷氧基、c
3-c6卤代环烷氧基、c
1-c6烷基-c
3-c6卤代环烷氧基、c
1-c6烷基-c
1-c6烷氧基、c
1-c6烷基-c
1-c6卤代烷氧基、c
1-c6烷氧基-c
1-c6烷氧基、c
1-c6烷基-氰基、c
1-c6烷基-c
3-c6环烷基、c
2-c6烯基、c
2-c6烯氧基、c
2-c6炔基、c
2-c6炔氧基、c
1-c6硫代烷基、c
1-c6亚磺酰烷基、c
1-c6磺酰烷基、c
1-c6卤代磺酰烷基、c
1-c6烷基-c
1-c6烷氧胺基、c
1-c6烷基羰基、c
3-c6环烷基羰基、c
1-c6卤代烷基羰基、c
1-c6烷氧羰基、c
1-c6烷基氨基羰基、双(c
1-c6)烷基胺基羰基、五元或六元芳基、五元或六元杂芳基、c
1-c6烷基-五元或六元芳基、五元或六元芳基胺基羰基、五元或六元芳基-c
1-c6烷基、c
1-c6烷基-五元或六元杂芳基、五元或六元杂芳基-c
1-c6烷基、五元或六元芳基羰基、五元或六元芳基酰胺基、五元或六元杂芳基羰基、五元或六元杂芳基酰胺基、五元或六元杂芳基胺基羰基、五元或六元杂环、c
1-c6烷基-五元或六元杂环基、五元或六元杂环基-c
1-c6烷基、五元或六元杂环基羰基、五元或
六元杂环基酰胺基、五元或六元杂环基胺基羰基、八元至十四元杂芳二环或三环环系、c
1-c6烷基-八元至十四元杂芳二环或三环环系、八元至十四元杂芳二环或三环环系-c
1-c6烷基、八元至十四元杂芳二环或三环环系基羰基、八元至十四元杂芳二环或三环环系基酰胺基、八元至十四元杂芳二环或三环环系基胺基羰基，被氢、卤素、氰基、硝基、羟基、c
1-c6烷基、c
2-c6烯基、c
2-c6炔基、c
3-c6环烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6卤代烷基、c
1-c6卤代烷氧基或c
1-c6硫代烷基单取代或多取代；p为1，2或3；z为o，n或c；a1，a2各自独立地为h、c、cr1、o、s或nr1，或者和苯环与连续的原子形成并环结构ⅰ或者所述并环结构ⅰ被至少一个r1所取代；q1，q2各自独立地为h、c、cr1、o、s或nr1，或者和z与连续的原子形成并环结构ⅱ或者所述并环结构ⅱ被至少一个r1所取代。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，r1为氨基、卤素、c
1-c8烷基、c
1-c6烷基羰基、c
3-c6环烷基羰基、c
1-c6卤代烷基羰基、c
1-c6烷氧羰基、c
1-c6烷基氨基羰基、双(c
1-c6)烷基胺基羰基，或者氨基、c
1-c8烷基、c
1-c6烷基羰基、c
3-c6环烷基羰基、c
1-c6卤代烷基羰基、c
1-c6烷氧羰基、c
1-c6烷基氨基羰基、双(c
1-c6)烷基胺基羰基被氢、卤素、氰基、硝基、羟基、c
1-c6烷基、c
2-c6烯基、c
2-c6炔基、c
3-c6环烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6卤代烷基、c
1-c6卤代烷氧基或c
1-c6硫代烷基单取代或多取代。3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，r2和r3为h和取代苯并环，所述取代苯并环为所述取代苯并环为
4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，z，q1，q2共同组成取代哌啶、取代吲哚啉、取代哌嗪。5.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述化合物的结构式如下：
6.如权利要求1-5任一项所述的应用，其特征在于，所述化合物具有糖皮质激素受体结合活性，通过靶向糖皮质激素受体，抑制nf-κb信号通路和/或ap1信号通路，调节抑制炎症因子表达。7.如权利要求1-5任一项所述的应用，其特征在于，所述自身免疫性疾病为哮喘、类风湿性关节炎、银屑病、炎症。8.结构式如下列任一所示的磺酰胺类化合物，
9.一种药物组合物，其特征在于，其含有治疗有效量的一种或多种如权利要求8中任一项所述的磺酰胺类化合物，或其药学上可接受的盐，或其氘代物，以及药学上可接受的载体。10.如权利要求9所述的药物组合物，其特征在于，所述药学上可接受的盐为盐酸盐、苯磺酸盐、甲基苯磺酸盐、磷酸盐、马来酸盐、硫酸盐、醋酸盐、枸橼酸盐、富马酸盐或酒石酸盐。

技术总结
本发明公开了磺酰胺类化合物及其在制备治疗自身免疫性疾病药物中的应用，属于医药技术领域。所述的磺酰胺类化合物为结构式如式(Ⅰ)-(Ⅵ)所示的化合物或其药学上可接受的盐任意一种，所述化合物具有糖皮质激素受体结合活性，能够靶向糖皮质激素受体配体结构域，有效抑制下游促炎信号通路NF-κB，AP1等多条通路的激活，具有显著的抗炎效果，而且该化合物不能诱导转录激活作用，不会产生由转录激活引起的副作用；另外，所述化合物没有细胞毒性，对其他甾体类核受体没有结合活性。因此将其作为糖皮质激素受体小分子调节剂应用到由糖皮质激素受体介导的自身免疫性疾病中，为临床上提供新的治疗策略和方法。供新的治疗策略和方法。供新的治疗策略和方法。


技术研发人员：侯廷军 李丹 胡雪萍 庞锦萍 张锦途 沈超 崔孙良 鲍小栋
受保护的技术使用者：浙江大学
技术研发日：2022.04.11
技术公布日：2022/7/5