1.本发明属于分析检测技术领域，尤其涉及一种酶联免疫吸附试验用全自动分析方法。
背景技术：2.酶联免疫吸附试验(elisa)或微阵列生物芯片作为一种测定微量抗原、抗体的方法，以其高灵敏度、高特异性和低成本而广泛应用于食品安全检测、临床测定和科研实验。酶联免疫吸附试验和微孔板阵列芯片通常在多孔板上进行检测，基本过程包括加样、样品孵育、洗板、底物显色、数据读取等过程，相关技术中，公开了一种酶联免疫吸附试验模拟方法，包括现有的标准酶联免疫吸附试验方法，该方法是用48孔空白酶标板替代已包被的酶标板，利用蒸馏水或生理盐水替代血清，利用蓝色指示剂替代酶试剂和底物试剂，利用盐酸溶液替代终止液，最后采用现有的标准酶联免疫吸附试验方法进行模拟试验，即可反映出标准酶联免疫吸附试验可见的客观现象。本发明采用低廉的蒸馏水和48孔空白酶标板来模拟酶联免疫吸附试验(elisa)的操作方法及可见的客观现象，学生可人手一块48孔空白酶标板，实验前和实验后进行两次洗板的训练；在48孔空白酶标板上各孔分别加入50μl的蒸馏水替代血清，既节约了成本，又减少了因从临床带来的血清造成实验室污染或感染的机会。
3.但是，上述结构中还存在不足之处，微孔板阵列芯片与免疫层析试纸条相比，是一个相对比较耗费人力、时间、精力的实验，而且由于处理量大、程序多，非常容易漏加、多加或错加而影响实验结果，另外，由于加试剂的时候总有先后顺序，导致孵育或洗涤的时间有差异，特别是最后的显色时间，会直接影响实验结果，导致结果不可信，在操作过程中，还需要严格防止外界的污染以及不同孔之间的交叉污染。
4.因此，有必要提供一种新的酶联免疫吸附试验用全自动分析方法解决上述技术问题
技术实现要素：5.本发明解决的技术问题是提供一种使用方便，可以降低仪器的生产和使用成本，降低了溶液的使用量和废液的产生，进而可以减少工作人员的工作量，提高检测效率和准确率的酶联免疫吸附试验用全自动分析方法。
6.为解决上述技术问题，本发明提供的酶联免疫吸附试验用全自动分析方法包括：分析系统和自动加样模块，所述分析系统包括有多孔板，所述分析系统包括有储液模块、反应模块、清洗模块和检测模块，所述分析系统还包括有控温模块、多道移液系统和检测系统；所述储液模块将利用多孔板条存储相应的反应试剂；所述自动加样模块主要依靠多道移液器进行加液和取液操作，自动完成相关液体的加取；所述反应模块和控温模块将实现相关反应在温控条件下进行；所述检测模块将对反应后的孔条进行检测并自动分析提供检测报告。
7.作为本发明的进一步方案，所述多孔板分为1区、2区、3区、4区、5区和6区。
8.作为本发明的进一步方案，所述储液模块中每种溶液分别存储在多孔板中的储液区，所述溶液分别有抗体试剂、清洗液、显色液a和显色液b。
9.作为本发明的进一步方案，所述自动加样模块是通过多道电动移液器进行加样操作，所述5区中孔板内固定有不同待检测项目的阵列点。
10.作为本发明的进一步方案，所述控温模块位于固定多孔板的底部，用于在与试剂反应过程中加热，提供反应所需的温度。
11.作为本发明的进一步方案，所述清洗模板通过多道电动移液器移取洗涤液进行清洗，所述检测模块主要通过ccd对5区中微阵列芯片进行拍照获取图像，再由软件提取信号并提供检测报告。
12.作为本发明的进一步方案，所述分析系统包括以下步骤：
13.(1).将标准品或样品分别加至多孔板5区中的各反应孔内；
14.(2).从1区吸取抗体工作液至5区，加热反应15分钟；
15.(3).从5区吸回反应后的溶液至6区；
16.(4).从4区吸取清洗液至反应后的5区，清洗10秒；
17.(5).从5区吸回清洗液至6区；
18.(6).重复(4)与(5)一次；
19.(7).从2区吸取显色液a至3区显色液b中，混合5秒；
20.(8).从3区吸取混合后的显色液至5区，加热显色反应10min；
21.(9).从5区吸取反应后的显色液至6区；
22.(10).重复(4)与(5)一次。
23.与相关技术相比较，本发明提供的酶联免疫吸附试验用全自动分析方法具有如下有益效果：
24.本发明提供一种酶联免疫吸附试验用全自动分析方法：
25.1、通过设置有储液模块，自动加样模块，反应模块，控温模块，清洗模板和检测模块的配合下，使得可以自动化操作，使用更方便，进而可以减少工作人员的工作量，提高检测效率和准确率的优点；
26.2、通过清洗液、废液等的储存，反应，清洗等均在多孔板内完成，节省了空间，移液均为8道电动移液器和自动平移装置，省去了蠕动泵或注射器等结构，保证功能的同时节省了仪器空间，缩小了分析仪的占用空间，致使可以降低了仪器的生产和使用成本，降低了溶液的使用量，减少了废液的产生。
附图说明
27.为了便于本领域技术人员理解，下面结合附图对本发明作进一步的说明。
28.图1为本发明中多孔板的多孔板分区示意图。
具体实施方式
29.请结合参阅图1，其中，图1为本发明中多孔板的多孔板分区示意图。
30.实施例1：
31.一种酶联免疫吸附试验用全自动分析方法包括：分析系统和自动加样模块，所述分析系统包括有多孔板，所述分析系统包括有储液模块、反应模块、清洗模块和检测模块，所述分析系统还包括有控温模块、多道移液系统和检测系统；
32.所述储液模块将利用多孔板条存储相应的反应试剂；
33.所述自动加样模块主要依靠多道移液器进行加液和取液操作，自动完成相关液体的加取；
34.所述反应模块和控温模块将实现相关反应在温控条件下进行；
35.所述检测模块将对反应后的孔条进行检测并自动分析提供检测报告。
36.所述多孔板分为1区、2区、3区、4区、5区和6区。
37.所述储液模块中每种溶液分别存储在多孔板中的储液区，所述溶液分别有抗体试剂、清洗液、显色液a和显色液b。
38.所述自动加样模块是通过多道电动移液器进行加样操作，所述5区中孔板内固定有不同待检测项目的阵列点。
39.所述控温模块位于固定多孔板的底部，用于在与试剂反应过程中加热，提供反应所需的温度。
40.所述清洗模板通过多道电动移液器移取洗涤液进行清洗，所述检测模块主要通过ccd对5区中微阵列芯片进行拍照获取图像，再由软件提取信号并提供检测报告。
41.所述分析系统包括以下步骤：
42.(1).将标准品或样品分别加至多孔板5区中的各反应孔内；
43.(2).从1区吸取抗体工作液至5区，加热反应15分钟；
44.(3).从5区吸回反应后的溶液至6区；
45.(4).从4区吸取清洗液至反应后的5区，清洗10秒；
46.(5).从5区吸回清洗液至6区；
47.(6).重复(4)与(5)一次；
48.(7).从2区吸取显色液a至3区显色液b中，混合5秒；
49.(8).从3区吸取混合后的显色液至5区，加热显色反应10min；
50.(9).从5区吸取反应后的显色液至6区；
51.(10).重复(4)与(5)一次。
52.本发明提供的酶联免疫吸附试验用全自动分析方法的工作原理如下：
53.储液模块中每种溶液分别存储在多孔板中的储液区，溶液分别有抗体试剂，显色液a，显色液b，清洗液，每种溶液体积为80-300μl，自动加样模块通过多道电动移液器进行加样操作，反应模块中孔板内固定有不同待检测项目的阵列点，加热模块位于固定多孔板的底部，用于在与试剂反应过程中加热，提供反应所需的温度，清洗模板通过多道电动移液器移取洗涤液进行清洗，检测模块主要通过ccd进行拍照获取图像，再由软件提取信号并提供检测报告，所有的操作程序均通过操作面板进行设置。
54.与相关技术相比较，本发明提供的酶联免疫吸附试验用全自动分析方法具有如下有益效果：
55.本发明提供一种酶联免疫吸附试验用全自动分析方法，通过设置有储液模块，自动加样模块，反应模块，控温模块，清洗模板和检测模块的配合下，使得可以自动化操作，使
用更方便，进而可以减少工作人员的工作量，提高检测效率和准确率的优点；
56.通过清洗液、废液等的储存，反应，清洗等均在多孔板内完成，节省了空间，移液均为8道电动移液器和自动平移装置，省去了蠕动泵或注射器等结构，保证功能的同时节省了仪器空间，缩小了分析仪的占用空间，致使可以降低了仪器的生产和使用成本，降低了溶液的使用量，减少了废液的产生。
57.实施例2：本发明还提供一种酶联免疫吸附试验用全自动分析方法。
58.(1).称取粉碎蔬菜1g，再加入10ml pbst缓冲液，用于后续分析检测；
59.(2).在微孔储液1，2，3区内依次加入纳米银标记后的多菌灵、百菌清、克百威混合抗体工作液，显色液a，显色液b各80μl/孔。在微孔4区加入350μl清洗液/孔。
60.(3).在微孔5区孔内，以羊抗鼠igg为阳性对照，牛血清白蛋白为空白对照，以及检测目标物多菌灵、百菌清、克百威抗原通过点样制备系统在微孔内点样操作后，于37℃固定2h即得；
61.(4).微孔6区为空白孔条，用于存储废液。
62.(5).微孔板按照图1模式放置后，再按照以下步骤进行反应：
63.1).移取50μl标准品或样品分别加至微孔板5区中的各反应孔内；
64.2).从微孔1区吸取50μl多菌灵、百菌清、克百威混合抗体工作液至5区有多菌灵、百菌清、克百威抗原阵列点的孔板内，37℃加热反应15分钟；
65.3).从5区吸回反应后的溶液至6区的废液区；
66.4).从4区吸取50μl清洗液至反应后的5区，清洗10秒；
67.5).从5区吸回清洗液至6区；
68.6).重复(4)与(5)一次；
69.7).从2区吸取50μl显色液a至3区显色液b中，混合5秒；
70.8).从3区吸取混合后的显色液50μl至5区，37℃加热显色反应10min；
71.9).从5区吸取反应后的显色液至6区；
72.10).重复(4)与(5)一次。
73.(6).清洗结束后，通过ccd对5区中微阵列芯片的显色结果进行拍照并获取图像，再由软件提取信号，信号值高低与显色点的深浅成正比，通过外标曲线实现定量并提供检测报告。
74.蔬菜样本中农药残留多菌灵、百菌清、克百威的检测限浓度分别为0.3mg/kg、0.3mg/kg、0.02mg/kg，均低于国家规定的最大允许残留限量要求，相对标准偏差小于15％。一次全自动分析最多可以检测18个样本，基本能满足基层每日检测需求，借助全自动分析检测设备同时也可降低对基层检测人员的依赖度。
技术特征：1.一种酶联免疫吸附试验用全自动分析方法，其特征在于，包括：分析系统和自动加样模块，所述分析系统包括有多孔板，所述分析系统包括有储液模块、反应模块、清洗模块和检测模块，所述分析系统还包括有控温模块、多道移液系统和检测系统；所述储液模块将利用多孔板条存储相应的反应试剂；所述自动加样模块主要依靠多道移液器进行加液和取液操作，自动完成相关液体的加取；所述反应模块和控温模块将实现相关反应在温控条件下进行；所述检测模块将对反应后的孔条进行检测并自动分析提供检测报告。2.根据权利要求1所述的酶联免疫吸附试验用全自动分析方法，其特征在于，所述多孔板分为1区、2区、3区、4区、5区和6区。3.根据权利要求1所述的酶联免疫吸附试验用全自动分析方法，其特征在于，所述储液模块中每种溶液分别存储在多孔板中的储液区，所述溶液分别有抗体试剂、清洗液、显色液a和显色液b。4.根据权利要求1所述的酶联免疫吸附试验用全自动分析方法，其特征在于，所述自动加样模块是通过多道电动移液器进行加样操作，所述5区中孔板内固定有不同待检测项目的阵列点。5.根据权利要求1所述的酶联免疫吸附试验用全自动分析方法，其特征在于，所述控温模块位于固定多孔板的底部，用于在与试剂反应过程中加热，提供反应所需的温度。6.根据权利要求1所述的酶联免疫吸附试验用全自动分析方法，其特征在于，所述清洗模板通过多道电动移液器移取洗涤液进行清洗，所述检测模块主要通过ccd对5区中微阵列芯片进行拍照获取图像，再由软件提取信号并提供检测报告。7.根据权利要求1所述的酶联免疫吸附试验用全自动分析方法，其特征在于，所述分析系统包括以下步骤：(1).将标准品或样品分别加至多孔板5区中的各反应孔内；(2).从1区吸取抗体工作液至5区，加热反应15分钟；(3).从5区吸回反应后的溶液至6区；(4).从4区吸取清洗液至反应后的5区，清洗10秒；(5).从5区吸回清洗液至6区；(6).重复(4)与(5)一次；(7).从2区吸取显色液a至3区显色液b中，混合5秒；(8).从3区吸取混合后的显色液至5区，加热显色反应10min；(9).从5区吸取反应后的显色液至6区；(10).重复(4)与(5)一次。
技术总结本发明提供一种酶联免疫吸附试验用全自动分析方法。所述酶联免疫吸附试验用全自动分析方法包括：分析系统和自动加样模块，所述分析系统包括有多孔板，所述分析系统包括有储液模块、反应模块、清洗模块和检测模块，所述分析系统还包括有控温模块、多道移液系统和检测系统；所述储液模块将利用多孔板条存储相应的反应试剂；所述自动加样模块主要依靠多道移液器进行加液和取液操作，自动完成相关液体的加取。本发明提供的酶联免疫吸附试验用全自动分析方法具有使用方便，可以降低仪器的生产和使用成本，降低了溶液的使用量和废液的产生，进而可以减少工作人员的工作量，提高检测效率和准确率的优点。准确率的优点。准确率的优点。
技术研发人员：李周敏 张丹丹 李帷帷 汤迪朋
受保护的技术使用者：南京祥中生物科技有限公司
技术研发日：2022.02.15
技术公布日：2022/7/5
