sars-cov-2抗原检测试剂盒
技术领域
1.本发明涉及新型冠状病毒检测技术领域，更具体的说是涉及sars-cov-2抗原检测试剂盒。
背景技术：2.冠状病毒是自然界广泛存在的一个大型病毒家族，因其形态在电镜下观察似王冠而得名，主要引起呼吸系统疾病。冠状病毒属于单股正链rna病毒，其遗传物质是所有rna病毒中最大的，分为α、β、γ和δ四个属。2019新型冠状病毒(sars-cov-2)是一类呈球形、表面有突起、电镜下观察形似皇冠的病毒，病毒基因为连续线性单链rna，直径在75-160nm。sars-cov-2是目前发现的可以感染人类的冠状病毒科中的第七个成员。其他6个成员分别为：hcov 229e、hcov nl63、hcov oc43、hcov hku1、sars-cov和mers-cov。
3.sars-cov-2感染人的潜伏期1-14天，多为3-7天。病毒主要经呼吸道飞沫和密切接触传播；患者出现发热、乏力和干咳，并逐渐出现呼吸困难等严重症状。因此，如何提供一种检测速度快、操作简单方便、检测结果准确、稳定，且可以对抗原进行检测的试剂盒是本领域技术人员亟需解决的问题。
技术实现要素：4.有鉴于此，本发明提供了sars-cov-2抗原检测试剂盒，该试剂盒可以直接对鼻腔、鼻咽、口咽的抗原进行检测，检测时间短，方便，快捷。
5.一种sars-cov-2抗原检测试剂盒，包括底板和设置在底板上的样品垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，胶体金结合垫和吸水垫分别错位搭接于硝酸纤维素膜的两侧，样品垫与胶体金结合垫错位搭接；硝酸纤维素膜上平行设置有质控区和检测区，且质控区靠近吸水垫；胶体金结合垫包被胶体金标记新型冠状病毒单克隆抗体i和胶体金标记的鼠igg抗体；检测区上包被新型冠状病毒单克隆抗体ii；质控区上包被抗鼠igg抗体。
6.作为本发明优选的技术方案，所述样品垫和所述吸水垫均为吸水纸。
7.作为本发明优选的技术方案，所述试剂盒中还包括独立设置的提取管、干燥剂和样品稀释液。
8.作为本发明优选的技术方案，所述样品稀释液为0.01-0.015m的pbs缓冲液，ph7.4
±
0.2。
9.经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明提供了一种sars-cov-2抗原检测试剂盒，以胶体金免疫层析法来检测sars-cov-2核壳抗原(n-抗原)的定性检测产品。当含有sars-cov-2的n-抗原的阳性样本被引入测试盒的孔中时，n-抗原与相应抗原的胶体金标记的新型冠状病毒单克隆抗体i结合。这种复合物在毛细血管效应的作用下沿着膜条迁移，并与固定在测试区域的单克隆抗体ii结合，在那里形成一条紫红色的线。其使用方便，准确度高、特异型好、检测稳定性和储存稳定性强，抗干扰性强，可检测鼻腔、鼻咽、口咽样品，适于推广使用。
附图说明
10.为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
11.图1附图为一次性检测试剂卡示意图；其中，t-检测线；c-质控线；s-加样孔。
具体实施方式
12.下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
13.实施例中通过使用rt-pcr确诊的新型冠状病毒肺炎患者身上采集的回顾性临床标本对新型冠状病毒的检测进行临床研究。
14.实施例1sars-cov-2抗原检测试剂盒，包括一次性检测试剂卡，提取管，干燥剂和样品稀释液。
15.一次性检测试剂卡包括底板和设置在底板上的样品垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，胶体金结合垫和吸水垫分别错位搭接于硝酸纤维素膜的两侧，样品垫与胶体金结合垫错位搭接；硝酸纤维素膜上平行设置有质控区和检测区，且质控区靠近吸水垫；胶体金结合垫包被胶体金标记新型冠状病毒单克隆抗体i和胶体金标记的鼠igg抗体；检测区上包被新型冠状病毒单克隆抗体ii；质控区上包被抗鼠igg抗体。
16.一次性检测试剂卡，提取管和干燥剂封装于铝箔袋中。
17.样品稀释液为0.01m的pbs缓冲液，ph7.4
±
0.2。
18.其中，一次性检测试剂卡的制备包括以下步骤：（1）制备胶体金标记新型冠状病毒单克隆抗体i1）制备胶体金溶液：取质量分数0.2%氯金酸水溶液，加热至95℃，迅速加入质量分数为1.5%的柠檬酸三钠水溶液，不断搅拌直至溶液变为酒红色，获得的20-40nm粒径20~40nm的胶体金溶液，4℃保存备用；2）使用0.12 mm的pb缓冲液将新型冠状病毒单克隆抗体i和鼠igg抗体稀释至0.5mg/ml，得到两种蛋白溶液；调节胶体金溶液ph至9.0，将两种蛋白溶液分别添加到10ml胶体金溶液中，使新型冠状病毒单克隆抗体i和鼠igg抗体浓度为20
µ
g/ml；静置5min后加入1ml质量分数为10%的bsa溶液，搅拌20min，离心；3）离心后收集沉淀，使用含bsa的三羟甲基氨基甲烷溶液溶解，离心后取沉淀，使用含叠氮化钠、蔗糖、bsa的三羟甲基氨基甲烷溶液溶解，获得胶体金标记的新型冠状病毒单克隆抗体i和胶体金标记的鼠igg抗体。
19.含bsa的三羟甲基氨基甲烷溶液中bsa质量分数为1%，三羟甲基氨基甲烷浓度为
0.015mol/l，ph为8.0；含叠氮化钠、蔗糖、bsa的三羟甲基氨基甲烷溶液中bsa质量分数为1.2%，叠氮化钠质量分数为0.01%，蔗糖质量分数为1%，三羟甲基氨基甲烷浓度为0.015mol/l，ph为8.0。
20.使用喷膜仪将胶体金标记的新型冠状病毒单克隆抗体i和胶体金标记的鼠igg抗体喷涂于样品垫上，37℃干燥2h后备用；（2）使用喷膜仪将0.8mg/ml新型冠状病毒单克隆抗体ii喷于检测线处，将0.8mg/ml抗鼠igg抗体喷于质控线处。用量20μl/10cm，37℃干燥2h。
21.（3）将样品垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次相连固定于底板上，裁成条状（宽度3mm），封装于外壳（带有加样孔s和观察窗，观察窗处可观察检测线t和质控线c颜色变化）中，得到一次性检测试剂卡，其液体移行速度不低于10mm/min。
22.上述sars-cov-2抗原检测试剂盒的使用方法：使用前，将试剂盒平衡到室温；取咽拭子样品到加样孔中；将试剂卡放在平整的表面上，等待10min，观察窗处观察结果：阳性结果：可见质控线c和检测线t，即检测到样品中存在新冠病毒抗原。
23.阴性结果：控制线c是唯一可见的线，表明样品中未检测到新冠病毒抗原。
24.无效结果：质控线c不可见，无论试剂卡中是否存在其它可见线，测试结果均无效，需使用新试剂卡重新测试。
25.实施例2进行临床试验的依据2021年6月2日，谢丽尔集团有限公司关于对体外诊断医疗产品进行临床实验室试验的申请，用免疫层析法检测人鼻咽拭子样本中的sars-cov-2(实施例1记载的，用于体外诊断，lot8920201116，来源于中国的天津贝罗尼生物科技有限公司)。
26.用于体外诊断的sars-cov-2检测试剂盒检测人鼻腔、鼻咽和口咽拭子样品中的sars-cov-2（用于体外诊断，批号8920201116），产品临床试验中获得的生物材料样品的检查结果如下：被调查的总数：患有sars-cov-2的真阳性样本105；患有sars-cov-2 的假阳性样本0；患有sars-cov-2 的真阴性样本105；患有sars-cov-2的假阴性样本6；诊断灵敏度：94.59%（88.61-97.99%）；诊断特异性：100.00%（96.55-100.00%）。
27.通过鼻拭子检查确定的诊断特征被调查的总数：患有sars-cov-2的真阳性样本35；患有sars-cov-2的假阳性样本0；患有sars-cov-2的真阴性样本35；患有sars-cov-2的假阴性样本3；
诊断灵敏度：92.11%（78.62-98.34%）；诊断特异性：100.00%（90.00-100.00%）。
28.通过鼻咽拭子检查确定的诊断特征被调查的总数：患有sars-cov-2的真阳性样本35；患有sars-cov-2的假阳性样本0；患有sars-cov-2的真阴性样本35；患有sars-cov-2的假阴性样本1；诊断灵敏度：97.22%（85.47-99.93%）；诊断特异性：100.00%（90.00-100.00%）。
29.通过检查口咽拭子确定的诊断特征被调查的总数：患有sars-cov-2 的真阳性样本35；患有sars-cov-2 的假阳性样本0；患有sars-cov-2 的真阴性样本35；患有sars-cov-2 的假阴性样本2；诊断灵敏度：94.59%（81.81-99.34%）。
30.应当说明的是，上述实施例均可根据需要自由组合。对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。
技术特征：1.sars-cov-2抗原检测试剂盒，包括底板和设置在底板上的样品垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，胶体金结合垫和吸水垫分别错位搭接于硝酸纤维素膜的两侧，样品垫与胶体金结合垫错位搭接；硝酸纤维素膜上平行设置有质控区和检测区，且质控区靠近吸水垫；其特征在于，胶体金结合垫包被胶体金标记新型冠状病毒单克隆抗体i和胶体金标记的鼠igg抗体；检测区上包被新型冠状病毒单克隆抗体ii；质控区上包被抗鼠igg抗体。2.根据权利要求1所述的sars-cov-2抗原检测试剂盒，其特征在于，所述样品垫和所述吸水垫均为吸水纸。3.根据权利要求1所述的sars-cov-2抗原检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包括独立设置的提取管、干燥剂和样品稀释液。4.根据权利要求3所述的sars-cov-2抗原检测试剂盒，其特征在于，所述样品稀释液为0.01-0.015m的pbs缓冲液，ph7.4
±
0.2。
技术总结本发明公开了SARS-CoV-2抗原检测试剂盒，属于新冠病毒检测技术领域；试剂盒包括底板和设置在底板上的样品垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，胶体金结合垫和吸水垫分别错位搭接于硝酸纤维素膜的两侧，样品垫与胶体金结合垫错位搭接；硝酸纤维素膜上平行设置有质控区和检测区，且质控区靠近吸水垫；胶体金结合垫包被胶体金标记新型冠状病毒单克隆抗体I和胶体金标记的鼠IgG抗体；检测区上包被新型冠状病毒单克隆抗体II；质控区上包被抗鼠IgG抗体。本发明试剂盒可快速进行SARS-CoV-2抗原的检测，准确度高、稳定性强、抗干扰能力强。抗干扰能力强。抗干扰能力强。
技术研发人员：张伯清 贾正虎 祝佳杏
受保护的技术使用者：天津贝罗尼生物科技有限公司
技术研发日：2022.04.11
技术公布日：2022/7/5
