1.本发明涉及一种重瓣百合快速成球培养基及培养方法，涉及植物组织培养技术领域。
背景技术：2.百合(lilium spp.)是百合科(liliaceae)百合属(lilium)植物的总称，是世界三大球根花卉之一。以其美丽的花姿和吉祥的寓意长期走俏，成为国际花卉市场的主流产品。近年来，国内外市场对百合种球、种苗和鲜切花的需求呈持续增长趋势，需求量以每年20％的速率递增。但花粉污染、花型单一及花期较短是普通百合普遍存在的问题。而近年来兴起的重瓣百合，又名“玫瑰百合”，其在切花品质方面有了很大的提升，不仅花大色艳、瓶插期更长，而且重瓣百合无花粉或雄蕊，不会造成花瓣污染，同时也不存在花粉过敏现象，受到花艺师的喜爱和生产企业的广泛关注。重瓣百合虽深受市场欢迎，然而迄今尚未有成熟、稳定的快速成球技术体系，加之重瓣百合种球生长周期长，大田扩繁易感染病毒病等疾病，进而影响其产量和品质。
3.百合常规的繁殖方法有鳞片繁殖、珠芽繁殖和小鳞茎繁殖，上述方法其生长慢且繁殖系数低，不易大规模扩繁和生产，且易造成病毒扩散和积累引起品种退化，加之大田扩繁极易受土壤、气候等因素影响；而采用组织培养可有效克服上述缺点，提高百合的繁殖系数，并在短期内培育出大量种苗，同时通过茎尖脱毒技术还可以获得脱毒的优质种苗。目前我国的百合种球主要依靠进口，成本高，耗资巨大，使用组培快繁的技术，可有效减轻对进口种球的依赖性。重瓣百合作为一种新型花卉，其货源极少，广受市场欢迎，然而其培育技术不成熟现已成为其规模化生产的瓶颈。因此本发明以重瓣百合
‘
elena’鳞片为外植体，建立了一套较为完善、成熟稳定的百合快速成球组培快繁技术体系，对其在国内的工厂化育苗及推广应用具有重要的现实意义。
技术实现要素：4.本发明的目的在于提供一种重瓣百合快速成球培养基及培养方法，提供的重瓣百合小鳞茎膨大的培养基配方为b5+naa0.2mg/l+蔗糖75g/l+ac3mg/l，适合重瓣百合快速成球推广应用。
5.为实现上述技术目的，达到上述技术效果，本发明是通过以下技术方案实现：
6.一种重瓣百合快速成球培养基，所述重瓣百合快速成球培养基的组分包括：b5+naa0.2mg/l+蔗糖75g/l+ac3mg/l。
7.进一步的，所述重瓣百合快速成球培养基的组分包括：b5+naa0.2mg/l+蔗糖75g/l+ac3mg/l。
8.一种重瓣百合快速成球培养方法，所述培养方法为采用组分为b5+naa0.2mg/l+蔗糖75g/l+ac3mg/l的培养基进行培养。
9.本发明的有益效果：
10.本发明以重瓣百合
‘
elena’鳞片为外植体，建立了一套较为完善、成熟稳定的百合快速成球组培快繁技术体系，对其在国内的工厂化育苗及推广应用具有重要的现实意义。
11.当然，实施本发明的任一产品并不一定需要同时达到以上所述的所有优点。
附图说明
12.图1为本发明实施例所述重瓣百合
‘
elena’鳞片灭菌试验图；
13.图2为本发明实施例所述不同培养基对重瓣百合
‘
elena’小鳞茎膨大直径和鲜重的影响示意图；
14.图3为本发明实施例所述优化培养基对重瓣百合
‘
elena’小鳞茎膨大直径和鲜重的影响示意图；
15.图4为本发明实施例所述重瓣百合
‘
elena’小鳞茎膨大(第一次)d8效果图；
16.图5为本发明实施例所述重瓣百合
‘
elena’小鳞茎膨大(优化)e9效果图；
具体实施方式
17.为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将结合附图对实施例对本发明进行详细说明。
18.实施例
19.本实施例选择的重瓣百合种球为：
20.东方重瓣百合品种
‘
elena’的鳞茎，为荷兰进口商品球，规格12～14cm；
21.不同灭菌处理对重瓣百合
‘
elena’鳞片灭菌的影响
22.选用新鲜有活力的东方重瓣百合
‘
elena’鳞片作为外植体，剥去外部损伤和腐烂的鳞片，选用完整的，无损伤的外层和内层鳞片，将鳞片放入洗衣粉水中浸泡10分钟后取出，先用自来水冲洗干净，再用无菌水冲洗2-3遍后，放至超净工作台内。超净工作台在使用前先用75％的乙醇对工作台面进行擦拭，再打开紫外灯消毒杀菌30分钟以上。鳞片先用75％的乙醇浸泡30s，用无菌水冲洗2遍后移至0.1％升汞溶液中灭菌消毒并计时，期间充分震荡摇晃，使鳞片能够充分接触消毒液，消毒完成后用无菌水漂洗试验材料5～6遍，尽可能减少残留药品和细菌在试验材料表面。将灭菌处理好的鳞片放置在乘有无菌滤纸的接种盘上，吸干表面的水分。将鳞片顺着纹路切成3mm
×
5mm的小块，取鳞片的基部和中部，接种到培养基上，每瓶培养基接一个外植体，每个处理接30瓶，初代培养基配方为ms+6-ba1.0mg/l+iba0.5mg/l+蔗糖30g/l。光照培养4周后，统计其污染数、成活数、灭死数，灭菌处理见表1。
23.表1重瓣百合
‘
elena’鳞片的灭菌处理
[0024][0025]
不同培养基对重瓣百合
‘
elena’小鳞茎膨大的影响
[0026]
以ms，1/2ms(大量元素减半)，b5为基本培养基，添加琼脂6g/l，另添加不同浓度的
蔗糖和外源添加物，ph6.0，设置一个三因素三水平的正交试验。将诱导获得的小鳞茎分成单个进行转接，每个处理接30颗苗，试验重复3次，期间采用暗培养，培养9周后，开始观察统计鳞茎膨大的生长状况，筛选出最适宜的鳞茎膨大培养基，见表2。
[0027]
表2重瓣百合
‘
elena’小鳞茎膨大正交试验
[0028][0029][0030]
通过第一次试验得知外源添加物ac对重瓣百合
‘
elena’小鳞茎膨大有极显著影响且效果最好，因此在第一次试验的基础上进行优化。将外源添加物活性炭固定成3g/l，另添加不同浓度的naa，其他添加物不变，设置优化后的三因素三水平的正交试验，每个处理接30颗苗，试验重复3次，暗培养8周后，开始观察统计鳞茎膨大的生长状况，筛选出最适宜的鳞茎膨大培养基，见表3：
[0031]
表3重瓣百合
‘
elena’小鳞茎膨大优化正交试验
[0032][0033]
评价项目与统计分析
[0034]
成活率％＝(成活的外植体数/接种总数)
×
100％
[0035]
污染率％＝(污染率的外植体数/接种总数)
×
100％
[0036]
死亡率％＝(死亡的外植体数/接种总数)
×
100％
[0037]
用excell软件进行图表分析，采用spss24.0对数据进行显著性及多重比较分析，p《0.05为显著性差异(用*表示)，p《0.01为极显著性差异(用**表示)。
[0038]
不同灭菌处理对重瓣百合
‘
elena’鳞片灭菌的影响
[0039]
从表4可以看出，重瓣百合鳞片在0.1％升汞的处理中灭菌8min时污染率最高，达到36.7％；10min时污染率明显下降，成活率达到最高，为83.33％，但同时伴随有灭死的现象出现；当达到15min时灭死率进一步增加，成活率也明显降低。综上所述，东方重瓣百合
‘
elena’鳞片灭菌处理的最佳方案是75％酒精(30s)+0.1％升汞(10min)，成活率为83.3％，实施例中重瓣百合
‘
elena’鳞片灭菌试验图如图1；
[0040]
表4不同处理时间及灭菌剂对鳞片灭菌效果的影响
[0041][0042]
不同培养基对重瓣百合
‘
elena’小鳞茎膨大的影响
[0043]
从表5可以看出，在第一次小鳞茎膨大的试验中，d1、d3、d6和d8处理的小鳞茎有明显的增大，其中d1、d6、d8的生根普遍较长，多且白，根长约有5～10cm，d3出现了新生的小鳞茎。d2、d5、d7处理的小鳞茎有少量的膨大，根长适中，d5的根较多，d2和d7的根黄且粗。d4的小鳞茎膨大不明显，根短，少且细，而且很多苗上增生了小鳞茎。由于培养时小鳞茎都出现了生根的现象，而且有些处理的根长且多，为不影响测量结果，本试验对小鳞茎鲜重的测量是切掉根系测的，而且在测直径时去掉了新增生的小鳞茎。从表中可以看出，不同培养基对重瓣百合
‘
elena’小鳞茎膨大的效果不同，膨大效果最好的处理是d8，平均直径为0.92cm，平均鲜重是0.40g；其次为d6的处理，平均直径0.91cm，平均鲜重为0.37g；膨大效果最差的是d4的处理，平均直径只有0.68cm，平均鲜重0.16g，d8和d4处理的直径和鲜重相差了0.24cm和0.24g。
[0044]
表5不同培养基对重瓣百合
‘
elena’小鳞茎膨大直径和鲜重的影响
[0045][0046][0047]
注：同一栏中的不同字母表示具有显著性差异(p《0.05)。
[0048]
从图2可以比较直观的看出，在9个处理中，不同处理的小鳞茎直径和鲜重是成正
相关的，即直径大的小鳞茎鲜重也大，在图表中可以看出，小鳞茎膨大效果最好的有d1、d3、d6和d8的处理，最差的有d2、d4和d9，在培养的三个因素中，可以判断活性炭对小鳞茎膨大的影响最大，而土豆泥则影响甚微。
[0049]
从表6可以看出，在第一次小鳞茎膨大的试验里，培养基的三个因素中，基本培养基和蔗糖浓度对小鳞茎膨大的直径增加没有显著影响，而外源添加物对直径的影响极为显著，说明外源添加物的种类对小鳞茎膨大有重要的影响。因此进一步对外源添加物进行多重比较。
[0050]
表6不同培养基对重瓣百合
‘
elena’小鳞茎膨大直径的方差分析
[0051][0052]
从表7可以看出，在小鳞茎膨大的试验中，外源添加物活性炭对直径增大的效果最好，直径达到0.90cm，最差的是土豆泥，直径为0.74cm，香蕉泥居中。
[0053]
表7不同培养基对重瓣百合
‘
elena’小鳞茎膨大直径的多重比较
[0054][0055]
从表8可以看出，三个不同的培养因素中，外源添加物对重瓣百合
‘
elena’小鳞茎膨大鲜重的影响极为显著，蔗糖浓度对鲜重增加的影响为显著，基本培养基则几乎无影响，因此进一步对外源添加物和蔗糖进行多重比较。
[0056]
表8不同培养基对重瓣百合
‘
elena’小鳞茎膨大鲜重的方差分析
[0057][0058]
从表9可以看出，对于重瓣百合
‘
elena’小鳞茎膨大，外源添加物活性炭对鲜重的增加效果最好，为0.36g；土豆泥对鲜重增加的效果最差，为0.20g。在蔗糖的处理中，浓度为90g/l的处理小鳞茎增重最明显，为0.30g；其次为75g/l的处理，为0.29g；最差的为50g/l的处理，小鳞茎鲜重只有0.24g，因此判断高浓度的蔗糖有利于小鳞茎膨大。
[0059]
综上所述，适合重瓣百合
‘
elena’小鳞茎膨大的培养基配方为d8：b5+蔗糖75g/l+ac3g/l。
[0060]
表9不同培养基对重瓣百合
‘
elena’小鳞茎膨大鲜重的多重比较
[0061][0062]
优化培养基对重瓣百合
‘
elena’小鳞茎膨大的影响
[0063]
在优化后的小鳞茎膨大试验中，各处理的直径和鲜重都有增加，且都长出了较长较多的根系，为了不影响目标结果的测量，本次试验同样切掉了根系来进行鲜重的称量，并测了直径。从表10可以看出，将培养基的三个因素进一步细化后，各处理的小鳞茎膨大区别更小。在9个处理当中，e8的处理平均直径最大，为0.88cm；其次为e9的处理，平均直径为0.85cm；第三是e1的处理，平均直径0.83cm；直径最小的处理是e4，平均直径为0.76cm。在鲜重的测量结果上，e5的平均鲜重最大，为0.39g；其次为e1和e9的处理，平均鲜重0.38g；第三为e2，平均鲜重0.35g；e7处理的小鳞茎鲜重最小，只有0.27g。
[0064]
表10优化培养基对重瓣百合
‘
elena’小鳞茎膨大的影响
[0065][0066]
从表11和表12可以看出，优化培养基的三个因素中，基本培养基种类、naa浓度、蔗糖浓度对小鳞茎膨大的直径和鲜重影响不大，由此推论，以b5培养基为基本培养基，加上较高浓度的蔗糖更有利于重瓣百合
‘
elena’小鳞茎的膨大。
[0067]
综上所述，适合重瓣百合
‘
elena’小鳞茎膨大的培养基配方为e9：b5+naa0.2mg/l+蔗糖75g/l+ac3mg/l。
[0068]
表11优化培养基对重瓣百合
‘
elena’小鳞茎膨大直径的方差分析
[0069][0070]
表12优化培养基对重瓣百合
‘
elena’小鳞茎膨大鲜重的方差分析
[0071][0072]
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“示例”、“具体示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
[0073]
以上公开的本发明优选实施例只是用于帮助阐述本发明。优选实施例并没有详尽叙述所有的细节，也不限制该发明仅为所述的具体实施方式。显然，根据本说明书的内容，可作很多的修改和变化。本说明书选取并具体描述这些实施例，是为了更好地解释本发明的原理和实际应用，从而使所属技术领域技术人员能很好地理解和利用本发明。本发明仅受权利要求书及其全部范围和等效物的限制。
技术特征：1.一种重瓣百合快速成球培养基，其特征在于：所述重瓣百合快速成球培养基的组分包括：b5+naa0.2mg/l+蔗糖75g/l+ac3mg/l。2.如权利要求1所述的一种重瓣百合快速成球培养基，其特征在于：所述重瓣百合快速成球培养基的组分包括：b5+naa0.2mg/l+蔗糖75g/l+ac3mg/l。3.一种重瓣百合快速成球培养方法，所述培养方法为采用组分为b5+naa0.2mg/l+蔗糖75g/l+ac3mg/l的培养基进行培养。
技术总结本发明公开一种重瓣百合快速成球培养基，涉及植物组织培养技术领域。所述重瓣百合快速成球培养基的组分包括：B5+NAA0.2mg/L+蔗糖75g/L+AC3mg/L，通过培养基可以实现对重瓣百合的快速成球培养，适合推广应用；本发明以重瓣百合
技术研发人员：黄海泉 黄美娟 王珏洁 张天谣 闻永慧 邓雪梅 梁武叶
受保护的技术使用者：西南林业大学
技术研发日：2022.03.18
技术公布日：2022/7/5
