1.本发明涉及医药领域，具体为一种防治流感的中药提取物组合物及其制备方法和应用。
背景技术：2.流行性感冒是由流感病毒引发的急性呼吸道传染病，春、秋季节高发，亚太地区高发，在儿童、孕妇、老年人和免疫缺陷群体等高危人群中，流感病毒可引起肺损伤，诱发严重的病毒性肺炎，导致多器官衰竭或基础疾病恶化、甚至死亡。
3.目前常用一些西药来防治流感病毒，西药主要是对症治疗，一种成分针对一种症状，且西药常会带有一些副作用，如奥司他韦能够将肠道中的酯酶转为活性代谢物，从而干扰病毒的传播，但不适用于已出现了下呼吸道感染症状的患者；帕拉米韦作为唯一的静脉注射类神经氨酸酶抑制剂，疗效要优于其他神经氨酸酶抑制剂，比口服奥司他韦能够更有效地缩短退烧时间，但可能会与其他神经氨酸酶抑制剂相互耐药，且对奥司他韦耐药的患者疗效不理想；利巴韦林的使用会出现恶心呕吐、疲倦、头痛、乏力、胸闷、发热、寒战等不良反应，严重者可能出现白细胞减少、溶血性贫血、心肌损害、胰腺炎等症状。
4.而中药可以通过整体调节人体机能发挥全面治疗感冒，在防治流感中具有独特的疗效，且一般不存在副作用，但由于种种原因，仅限于临床辩证论治个人化处方中，收益的人群非常有限。
技术实现要素：5.本发明为了解决现有技术中存在的缺陷，提供一种防治流感的中药提取物组合物及其制备方法和应用，能够显著降低流感致死率以及流感对肺损伤的影响，拓宽防流感用药的选择范围。
6.为达到上述目的，本发明采用以下技术方案：
7.本发明首先提供一种防治流感的中药提取物组合物，包括以下组分：当归提取物、川芎提取物和药物中能接受的辅料。
8.优选的，所述当归提取物由当归原生药提取得到，所述川芎提取物由川芎原生药提取得到，所述当归原生药与川芎原生药的质量比计为(0.1～5)：(0.2～10)。
9.优选的，所述川芎提取物是通过亚临界或超临界萃取所得的川芎挥发油。
10.优选的，所述川芎提取物中藁本内酯的质量含量不低于10％，藁本内酯和洋川芎内酯a的总量不低于20％。
11.优选的，所述当归提取物是亚临界或超临界萃取所得的当归挥发油。
12.优选的，所述当归提取物中阿魏酸的质量含量大于或等于1％，且藁本内酯的质量含量大于或等于30％。
13.优选的，所述组合物中阿魏酸不低于1％，藁本内酯和洋川芎内酯a的总量不低于5％。
14.优选的，所述辅料为崩解剂、赋形剂、润滑剂或粘合剂。
15.本发明还提供一种所述防治流感的中药提取物组合物的制备方法，包括以下步骤：
16.当归提取物的制备：取当归药材，粉碎过筛，放入亚临界流体萃取罐，加入亚临界流体，35-45℃萃取2-3次，萃取时间35-45min，分离萃取剂，回收当归挥发油，即得；
17.川芎提取物的制备：取川芎药材，粉碎过筛，放入亚临界流体萃取罐，加入亚临界流体，35-45℃萃取2-3次，萃取时间45-55min，分离萃取剂，回收川芎挥发油，即得。
18.优选的，所述亚临界流体为丁烷。
19.优选的，所述防治流感的中药提取物组合物的制备方法，包括以下步骤：
20.当归提取物的制备：取当归药材，粉碎过40目筛，放入亚临界流体萃取罐，加入亚临界流体，35℃萃取45min，萃取2次，分离萃取剂，回收当归挥发油，即得；
21.川芎提取物的制备：取川芎药材，粉碎过40目筛，放入亚临界流体萃取罐，加入亚临界流体，45℃萃取45min，萃取2次，分离萃取剂，回收川芎挥发油，即得。
22.优选的，所述防治流感的中药提取物组合物的制备方法，将当归提取物、川芎提取物和药物中能接受的辅料混合即得。
23.本发明还提供一种所述中药提取物组合物的制剂，按照常规工艺制成医药上可接受的剂型。
24.优选的，所述制剂为口服型药物制剂或外用制剂。
25.优选的，所述剂型中包含川芎提取物和当归提取物；所述川芎提取物和当归提取物的总质量以川芎原生药和当归原生药的总质量计，所述川芎原生药和当归原生药的总质量占所述剂型的质量比为2～8g/kg。
26.本发明还提供一种所述中药提取物组合物、所述制备方法、或所述中药提取物组合物的制剂在制备抗流感药物中的应用。
27.更为优选的，所述应用具体为流感病毒液致死亡的保护以及流感病毒液致肺损伤的保护。
28.本发明的有益效果是：
29.1、本发明当归提取物与川芎提取物合用对流感病毒所致疾病具有很好的治疗作用，研究显示，本发明防治流感的中药提取物组合物可显著延长流感病毒小鼠的生存期，减少流感病毒小鼠的死亡率；同时，可显著降低流感病毒小鼠肺脏指数，肺脏标本均可见不同程度的肺间质及肺泡隔炎细胞浸润，病变程度减轻，能有效抑制流感病毒导致的肺损伤。
30.2、本发明的组合物，充分考虑原料的组成和各原料之间的配比，使各原料在特定的配比下相互配合，共同作用，在抗流感病毒方面具有显著的协同增效作用。
31.3、本发明采用新型亚临界或超临界萃取原生药获得川芎、当归挥发油的提取物，亚临界或超临界流体的存在，使得分子的扩散性能增强，传质速度加快，有效提高川芎和当归原生药中有效成分藁本内酯、洋川芎内酯、阿魏酸等的渗透性和溶解能力，使得有效成分不会被破坏，过程稳定可控、无毒无害、且具有较好的质量可控性，可工业化大规模生产。
附图说明
32.图1为中药提取物组合物对流感病毒肺炎小鼠模型肺组织病理学的影响(he，
×
100)(其中，a：对照；b：模型；c：利巴韦林；d：中药提取物组合物制剂2.0原生药g/kg；e：中药提取物组合物制剂4.0原生药g/kg；f：中药提取物组合物制剂8.0原生药g/kg)。
具体实施方式
33.为了使本领域的技术人员更好地理解发明的技术方案，下面结合具体实施方式对本发明作进一步的详细说明。
34.本发明实施例中的原料均为市售，其中：
35.川芎：购自彭州，经鉴定为伞形科植物川芎ligusticum chuanxiong hort.的干燥根茎。采用亚临界萃取其挥发油，中药提取物的收率不稳定，在一定范围内变化，本实施例中实验测定的收率为5.9％，批号：2019080201，由中国科学院兰州化学物理研究所提供。
36.当归：购自甘肃岷县，经鉴定为伞形科植物当归angelicasinensis(oliv.)diels的干燥根。采用亚临界萃取其挥发油，中药提取物的收率不稳定，在一定范围内变化，本实施例中实验测定的收率为2.2％，批号：2019072901，由中国科学院兰州化学物理研究所提供。
37.食用油：采用金龙鱼食用调和油，批号：2hq09，益海嘉里(重庆)粮油有限公司出品。
38.本发明的辅料为本领域常规使用的辅料。
39.本发明实施例中所述的提取物剂量按当归+川芎原生药g/kg换算，例如“中药提取物组合物制剂2.0原生药g/kg”意为1kg组合物制剂中使用的当归原生药和川芎原生药共2g。
40.实施例1中药提取物组合物制剂2.0原生药g/kg
41.当归提取物的制备：取当归药材1kg，粉碎后过40目筛，放入亚临界流体萃取罐(cbe-2
×
25l)中，加入丁烷，在45℃条件下，萃取35min，萃取3次，分离萃取剂，回收当归挥发油，检测其阿魏酸的质量含量大于或等于1.0％，且藁本内酯的质量含量大于或等于30％；
42.川芎提取物的制备：干燥的川芎全药材用粉碎机粉碎后过40目筛，称取1kg，放入亚临界流体萃取罐(cbe-2
×
25l)中，加入丁烷，在35℃条件下，萃取55min，萃取3次，分离萃取剂，回收川芎挥发油，检测其藁本内酯的含量不低于10％，藁本内酯和洋川芎内酯a的总量不低于20％；
43.检测所述组合物中阿魏酸不低于1％，藁本内酯和洋川芎内酯a的总量不低于5％。
44.可按常规工艺制备成软胶囊，如：
45.软胶囊中加入上述当归提取物和川芎提取物(按照当归+川芎原生药2g/kg确定质量)，辅料占软胶囊的质量百分比为2％，余量为食用油，混合即得。
46.实施例2中药提取物组合物制剂4.0原生药g/kg
47.当归提取物的制备：取当归药材1kg，粉碎后过40目筛，放入亚临界流体萃取罐(cbe-2
×
25l)中，加入丁烷，在35℃条件下，萃取45min，萃取2次，分离萃取剂，回收当归挥发油，检测其阿魏酸的质量含量大于或等于1％，且藁本内酯的质量含量大于或等于35％；
48.川芎提取物的制备：干燥的川芎全药材用粉碎机粉碎后过40目筛，称取1kg，放入亚临界流体萃取罐(cbe-2
×
25l)中，加入丁烷，在45℃条件下，萃取45min，萃取2次，分离萃
取剂，回收川芎挥发油，检测其藁本内酯的含量不低于12％，藁本内酯和洋川芎内酯a的总量不低于20％；
49.检测所述组合物中阿魏酸不低于1％，藁本内酯和洋川芎内酯a的总量不低于5％。
50.可按常规工艺制备成软胶囊，如：
51.软胶囊中加入上述当归提取物和川芎提取物(按照当归+川芎原生药4g/kg确定质量)，辅料占软胶囊的质量百分比为3％，余量为食用油，混合即得。
52.实施例3中药提取物组合物制剂8.0原生药g/kg
53.当归提取物的制备：取当归药材2kg，粉碎后过40目筛，放入亚临界流体萃取罐(cbe-2
×
25l)中，加入丁烷，在35℃条件下，萃取45min，萃取2次，分离萃取剂，回收当归挥发油，检测其阿魏酸的质量含量大于或等于1％，且藁本内酯的质量含量大于或等于35％；
54.川芎提取物的制备：干燥的川芎全药材用粉碎机粉碎后过40目筛，称取2kg，放入亚临界流体萃取罐(cbe-2
×
25l)中，加入丁烷，在45℃条件下，萃取45min，萃取2次，分离萃取剂，回收川芎挥发油，检测其藁本内酯的含量不低于10％，藁本内酯和洋川芎内酯a的总量不低于20％；
55.检测所述组合物中阿魏酸不低于1％，藁本内酯和洋川芎内酯a的总量不低于5％。
56.可按常规工艺制备成软胶囊，如：
57.软胶囊中加入上述当归提取物和川芎提取物(按照当归+川芎原生药8g/kg确定质量)，辅料占软胶囊的质量百分比为5％，余量为食用油，混合即得。
58.实施例4
59.同实施例1，区别仅在于：当归药材0.1kg，川芎药材0.2kg，按常规工艺制成片剂。
60.实施例5
61.同实施例1，区别仅在于：当归药材5kg，川芎药材10kg，按常规工艺制成滴丸。
62.效果实施例
63.1.试验药物：
64.氯化钠注射液：批号：b21020205，四川科伦药业股份有限公司出品。
65.利巴韦林分散片：批号：2012010，国药集团国瑞药业有限公司出品，临用前用0.5％cmc溶液配制成所需浓度的混悬液备用。
66.2.试验试剂
67.甲醛溶液：浓度为7.0％-40.0％，批号：20210415，成都长联化工试剂有限公司出品；
68.1％豚鼠红细胞：批号211122，广州鸿泉生物科技有限公司出品；
69.3.实验仪器
70.分析天平：型号bp211d，德国赛多利斯公司生产；型号yp1201，上海良平仪器仪表有限公司生产。
71.台式高速冷冻离心机：型号tgl-16，长沙湘仪离心机仪器有限公司生产；
72.全自动凝血分析仪：型号：exc810，mindray出品；
73.生物安全柜：型号1389，赛默飞世尔科技公司生产；
74.全电动智能显微镜：型号olympus bx63，日本olympus公司生产。varioskanflash全波长扫描式多功能读数仪：美国thermo公司生产。
75.4.试验细胞/动物
76.昆明种小鼠，spf级，由四川省中医药科学院实验动物中心提供，生产许可证号：scxk(川)-2018-19。
77.流感病毒株，流感甲型病毒鼠肺适应株a/pr/8/34(h1n1)，购自中国预防医学科学院病毒所。经鸡胚传代增殖1轮，血凝滴度为1∶512，对小鼠ld50为10-3.5/50μl，-80℃超低温冰箱冻存。
78.5.试验环境
79.试验动物饲养于四川省中医药科学院实验动物中心屏障系统，合格证号：syxk(川)-2018-100，室温22-25℃，湿度50
±
5％，明暗各12h。
80.效果例的中药提取物组合物制剂配方同实施例1～3。
81.效果例1本发明防治流感的中药提取物组合物对流感病毒液致小鼠死亡的影响
82.实验分组：取体重为18-22g的昆明小鼠，雌雄各半共80只，适应性喂养2天后，根据体重随机分为5组每组16只，分别为模型组，中药提取物组合物制剂8.0原生药g/kg、中药提取物组合物制剂4.0原生药g/kg、中药提取物组合物制剂2.0原生药g/kg，利巴韦林0.1/kg。
83.实验过程：对小鼠进行灌胃给药，每天上午、下午各一次，连续给药8次；模型组灌胃等体积食用油，给药体积均为10ml/kg；在第三次给药后1h后将小鼠麻醉后固定在固定板上，使小鼠头部向上与水平呈45
°
角，然后在其颈部正中做切口，暴露气管，向肺部方向气管注入甲型流感病毒鼠肺适应株a/pr/8/34(h1n1)病毒液(浓度为10ld50＝10-2.5)0.05ml/只，然后将小鼠保持倾斜2min让病毒液充分流入肺中；缝合手术伤口，消毒肌肉注射40万u/ml青霉素溶液0.1ml/只放回笼中待其苏醒，记录感染后14天内小鼠死亡数，统计小鼠死亡率，见表1。
84.表1防治流感的中药提取物组合物对流感病毒肺炎小鼠模型的死亡率的影响
[0085][0086]
与模型组比较：*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001；
[0087]
小鼠在感染流感病毒5日后陆续出现死亡，在不给予治疗的情况下，在感染后7天内全部死亡，从表1可见，本发明防治流感的中药提取物组合物可显著延长流感病毒小鼠的生存期，与模型组比较差异具有统计学意义；本发明防治流感的中药提取物组合物制剂8.0原生药g/kg可显著减少流感病毒小鼠的死亡率，与模型组比较差异具有统计学意义。
[0088]
效果例2防治流感的中药提取物组合物对流感病毒致小鼠肺损伤的影响
[0089]
实验分组：取体重为18-22g的雄性昆明小鼠68只，根据体重随机分为6组，分别为对照组，模型组，中药提取物组合物制剂8.0原生药g/kg、中药提取物组合物制剂4.0原生药g/kg、中药提取物组合物制剂2.0原生药g/kg，利巴韦林组0.1mg/kg。
[0090]
实验过程：对小鼠灌胃给药，每天一次，连续给药7次；模型组和对照组灌胃等体积食用油，给药体积均为10ml/kg，在第三次给药后1h，将小鼠麻醉后固定在固定板上，使小鼠头部向上与水平呈45
°
角，然后在其颈部正中做切口，暴露气管，向肺部方向气管注入甲型流感病毒鼠肺适应株a/pr/8/34(h1n1)病毒液(浓度为10ld50＝10-2.5)0.05ml/只，将小鼠保持倾斜2min让病毒液充分流入肺中，缝合切口并消毒；对照组麻醉后固定在固定板上，然后在其颈部正中做切口，注入等体积生理盐水后缝合切口并消毒；在末次给药后1h，处死小鼠，取肺组织称湿重并计算脏器指数，取肺大叶固定后用于病理组织学观察，见表2、表3和图1。
[0091]
表2防治流感的中药提取物组合物对流感病毒肺炎小鼠模型肺指数的影响
[0092][0093]
与模型组比较：*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001
[0094]
流感病毒感染小鼠第五天模型组死亡两只，其余各给药组未出现死亡；从表2可见，小鼠在感染流感病毒后，其肺指数显著升高，与对照组比较差异具有统计学意义；本发明中药提取物组合物各剂量组均可显著降低流感病毒小鼠肺脏指数，其中中药提取物组合物制剂8.0原生药g/kg的作用最为显著，与模型组比较差异有统计学意义。
[0095]
表3防治流感的中药提取物组合物对流感病毒肺炎小鼠模型肺组织病理学的影响
[0096][0097][0098]
从表3及图1可见，显微镜下，模型组肺脏标本，可见肺间质、肺泡隔及肺泡腔大量炎细胞浸润，与对照组比较差异有统计学意义；中药提取物组合物各剂量组肺脏标本均可见不同程度的肺间质及肺泡隔炎细胞浸润，病变程度较模型组轻，其中中药提取物组合物制剂8.0原生药g/kg的作用最为显著，与模型组比较差异有统计学意义。
[0099]
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出的是，上述优选实施方式不应视为对本发明的限制，本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的精神和范围内，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
技术特征：1.一种防治流感的中药提取物组合物，其特征在于，包括以下组分：当归提取物、川芎提取物和药物中能接受的辅料。2.根据权利要求1所述的防治流感的中药提取物组合物，其特征在于，所述当归提取物由当归原生药提取得到，所述川芎提取物由川芎原生药提取得到，所述当归原生药与川芎原生药的质量比计为(0.1～5)：(0.2～10)。3.根据权利要求1所述的防治流感的中药提取物组合物，其特征在于，所述川芎提取物是通过亚临界或超临界萃取所得的川芎挥发油。4.根据权利要求1所述的防治流感的中药提取物组合物，其特征在于，所述川芎提取物中藁本内酯的质量含量不低于10％，藁本内酯和洋川芎内酯a的总量不低于20％。5.根据权利要求1所述的防治流感的中药提取物组合物，其特征在于，所述当归提取物是亚临界或超临界萃取所得的当归挥发油。6.根据权利要求1所述的防治流感的中药提取物组合物，其特征在于，所述当归提取物中阿魏酸的质量含量大于或等于1％，且藁本内酯的质量含量大于或等于30％。7.根据权利要求1所述的防治流感的中药提取物组合物，其特征在于，所述辅料为崩解剂、赋形剂、润滑剂或粘合剂。8.包括权利要求1～7任意一项所述的防治流感的中药提取物组合物的制剂，其特征在于，按照常规工艺制成医药上可接受的剂型。9.权利要求1～7任意一项所述的防治流感的中药提取物组合物或权利要求8所述的组合物的制剂在制备抗流感药物中的应用。
技术总结本发明公开了一种防治流感的中药提取物组合物，包括以下组分：当归提取物、川芎提取物和药物中能接受的辅料；本发明当归提取物与川芎提取物合用对流感病毒所致疾病具有很好的治疗作用，本发明防治流感的中药提取物组合物可显著延长流感病毒小鼠的生存期，减少流感病毒小鼠的死亡率；同时，可显著降低流感病毒小鼠肺脏指数，能有效抑制流感病毒导致的肺损伤。伤。伤。
技术研发人员：谭正怀 邸多隆 熊静悦 裴栋
受保护的技术使用者：四川省中医药科学院
技术研发日：2022.05.13
技术公布日：2022/7/5
